仁扇舟蛾幼虫肠道可培养细菌群落结构分析

【目的】了解仁扇舟蛾(Clostera restitura)肠道共生细菌的主要类群及其群落结构特征,明确仁扇舟蛾幼虫前、中和后肠可培养细菌的种类及群落结构组成,为进一步研究特异功能细菌的生理生化特征和功能提供基础。【方法】选取仁扇舟蛾5龄幼虫进行肠道解剖,分离前、中和后肠不同肠段,研磨稀释10^-1~10^-6,分别涂布于NA和LB固体培养基上,每个处理重复3次,28 ℃培养72 h。后对前、中和后肠可培养细菌进行分离纯化培养,提取细菌基因组DNA,利用 16S rDNA 基因序列分析和PCR扩增技术,获得细菌基因组序列,后与NCBI GenBank数据库进行Blast同源性比对,参考序列相似度98%以上近缘序列的物种信息,结合菌落形态特征和生理生化特性鉴定细菌种类,利用MEGA 7.0软件,采用邻接法(Neighbor-Joining)构建系统进化树。【结果】从仁扇舟蛾5龄幼虫的前、中和后肠中共分离获得22株可培养细菌,分属于变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria),共13个属,22个种。其中:假单胞菌属(Pseudomonas)4株,罗尔斯通菌属(Ralstonia)3株,芽孢杆菌属(Bacillus)3株,嗜麦芽寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)2株,气球菌属(Aerococcus)2株,其余微小杆菌属(Exiguobacterium)、微球菌属(Micrococcus)、短小杆菌属(Curtobacterium)、伯克氏菌属(Burkholderia)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、节杆菌属(Arthrobacter)、短状杆菌属(Brachybacterium)和两面神菌属(Janibacter)各1株。细菌的种类存在差异,前、中和后肠不同肠段的细菌种类分别为5、10和7种。3个肠段共有的细菌种类是皮氏罗尔斯菌(Ralstonia pickettii)和斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)。【结论】仁扇舟蛾5龄幼虫肠道的可培养细菌种类较为丰富,其中以变形菌门和厚壁菌门为优势菌群。不同肠段中可培养细菌的多样性和群落结构存在差异,其中以中肠可培养细菌种类较为丰富。此次从仁扇舟蛾肠道中分离到与单宁降解相关的细菌,分析表明仁扇舟蛾肠道菌群与宿主的取食习性有关,肠道细菌可能在克服植物次生代谢物质的化学防御上发挥作用。     

mC7的点可区别Ⅰ-全染色和Ⅵ-全染色

利用色集合事先分配法及具体的染色给出了mC7的最优点可区别Ⅰ-全染色以及最优点可区别Ⅵ-全染色,进而确定了图mC7的点可区别Ⅰ-全色数及点可区别Ⅵ-全色数。结论表明VDITC猜想和VDVITC猜想对图mC7成立。     

瓦雷兹芽孢杆菌FZB42菌株拮抗两种树木病原真菌及其机理研究

镰刀菌和交链孢菌是导致树木病害的两种常见病原真菌,常导致苗圃植物严重的危害和经济损失。瓦雷兹芽孢杆菌FZB42菌株具有高效生防性能和植物促生活性,为进一步探明该菌株的生防机理,首先测试了FZB42对镰刀菌和交链孢菌的抑制效果。在了解该菌株抑制作用的基础上,进一步构建质粒,通过同源重组的方式构建了FZB42的3个抗生素合成缺损菌株(ΔbmyA,ΔfenA、ΔbmyAΔfenA)。对这3个突变株进一步测试表明,FZB42合成的物质bacillomycin D和fengycin是抑制两种真菌生长的重要原因,且这两种物质的拮抗作用具有明显的协同强化效果。     

短小芽孢杆菌LYMC-3菌株对拟茎点霉的拮抗作用

【目的】短小芽孢杆菌LYMC-3菌株对稻瘟病、黄瓜枯萎病及棉花黄萎病等具有显著的防治效果,测定LYMC-3菌株对8种植物病原真菌的抑菌活性,检测其抑菌谱,为其推广应用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定LYMC-3菌株对松球壳孢菌(Sphaeropsis sapinea)、松树脂溃疡病菌(Fusarium circinatum)、金黄壳囊孢菌(Cytospora chrysosperma)、拟茎点霉(Phomopsis macrospora)、七叶树壳梭孢菌(Fusicoccum aesculi)、拟盘多毛孢(Pestalotiopsis theae)、山茶炭疽菌(Guignardia camelliae)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothiorella)8种植物病原真菌的抑菌活性,筛选出抑菌活性最强的病原真菌,进行菌丝生长和孢子萌发抑制试验。【结果】LYMC-3菌株对8种供试植物病原真菌均有抑制作用,抑菌带长度及抑菌活性大小依次为:拟茎点霉>拟盘多毛孢>葡萄座腔菌>松球壳孢菌>七叶树壳梭孢菌>金黄壳囊孢菌>松树脂溃疡病菌>山茶炭疽菌。LYMC-3菌株发酵滤液对拟茎点霉菌丝生长的抑制率为70.36%,对其分生孢子24 h萌发抑制率为88.16%。【结论】短小芽孢杆菌LYMC-3菌株抑菌谱广,其发酵滤液对拟茎点霉有较强的拮抗作用。     

7株处理印染废水细菌的分离及鉴定

从福建石狮锦尚和伍堡污水处理厂的曝气池活性污泥中分离筛选到对碱性孔雀绿染料脱色能力强的7株高效菌株(B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7),并对7株细菌进行鉴定:B1菌株为库特氏菌属(Kurthia),B2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas),B3菌株为色杆菌属(Chromobacterium),B4菌株为气单胞菌属(Aeromonas),B5菌株为节杆菌属(Arthobacter),B6菌株为氧化产碱菌属(Alealigenes),B7菌株为棒状菌属(Corynebacterium).     

散斑壳菌对华山松凋落针叶的室内分解

为了探明散斑壳菌(Lophodermium spp.)分解利用针叶时的各纤维素酶酶解的作用机制和了解该菌的腐生性能,以华山松(Pinus armandii)新近凋落针叶为底物进行纯培养分解试验。试验以针叶为唯一碳源,采用试管培养液法,对Lophodermium conigenum、L. pinastri、L. kumaunicum、L. sichuanense 和L. erlangshanense 5种散斑壳菌进行纯培养试验,同时测定针叶失重率和纤维素酶酶活大小。相关性分析表明,内切纤维素酶(Endoglucanase, EG)、外切纤维素酶(Cellobiohydrolase, CBH)与β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase, BGL)三者之间存在一定协同效应(L. pinastri与L. erlangshanense除外),特别是CBH与EG之间。各酶类活性大小是制约针叶纤维素分解的主要因素,协同效应强酶活高凋落针叶分解就越快。5种菌引起针叶质量损失率在8.5%～11.8%之间,各菌株引起针叶质量损失依次为L. pinastri>L. sichuanense>L. kumaunicum>L. conigenum>L. erlangshanense。5种菌均能分泌纤维素酶,对凋落针叶有一定分解能力,且EG、CBH与BGL之间存在不同程度的协同作用,属于兼性寄生物,但其腐生性不强。     

鳗鲡肠道中嗜水气单胞菌的拮抗菌筛选

从鳗鲡肠道中分离到643株细菌,用点种法筛选出65株病原性嗜水气单胞菌的拮抗菌,研究拮抗效果最好的14株拮抗菌的抗菌谱和生长曲线及其与病原性嗜水气单胞菌的共凝集作用.研究结果显示:NAC琼脂培养基筛选的2株拮抗菌(Na 3-38和Nb 3-15)对7株指示菌均有较强的拮抗作用,Aa 3-22和Mb 3-7对7株指示菌中的5株有拮抗效果;除Na 3-38和Nb 3-15以外,其余12株的生长系数均大于嗜水气单胞菌;11株拮抗菌(Na 3-38、Nb 3-15、Ab 2-55、Ab 2-77、Ab 1-3、Aa 3-22、Aa 3-67、Mb 1-4、Mb 2-10、Mb 3-7和Mb 3-27)和嗜水气单胞菌的共凝集率大于10%.这表明:Aa 3-22和Mb 3-7在抗菌谱和生长曲线及其与病原性嗜水气单胞菌的共凝集作用等方面都适合作为益生菌.     

芽孢杆菌组合对海水养殖水体COD的降解效果

【目的】获得一种降解性能优于单菌株的菌株组合,更好地改善目前工业化密度养殖的水体水质。【方法】从刺参(Stichopus japonicus)养殖池塘分离降解效果良好的单菌株,根据菌株之间的拮抗效应,按照2株菌或3株菌进行组合,研究各组合菌株的降解效果。【结果】2株菌的组合第6天时COD含量的均值为422.57mg/L,标准差为63.85,3株菌的组合第6天时COD含量的均值为365.61mg/L,标准差为67.63,说明3株菌的组合整体降解效果比2株菌的组合好,且更容易获得降解效率高的组合,但并不是所有3株菌的组合降解效果都优于2株菌的组合。【结论】确定最优菌株组合为C14(菌株B2,菌株B6,菌株B11),COD降解率为64.29%。经鉴定,菌株B2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),菌株B6为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),菌株B11为嗜碱性芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus),为今后的实践应用提供参考。     

一株耐高温α-淀粉酶生产菌的分离鉴定及其产酶条件优化

作者从四川成都及其周边地区的淀粉厂,米厂,面粉厂等样品采集地的土样和污水当中筛选到16株酶活较高的野生型α-淀粉酶生产菌,其中一株编号为C1的菌株酶活最高,液体发酵酶活达到20 U/mL.这株菌能在高温（50 ℃）下生长良好.在电子显微镜观察,有明显芽孢,生理生化常规鉴定为枯草芽孢杆菌（B. subtilis）,进一步的16S rDNA分子鉴定确定该菌属于枯草芽孢杆菌,命名为B. subtilis C1. 并对B. subtilis C1的产酶条件进行优化.     

一株促生抗病的樱花内生细菌的分离、筛选和鉴定

【目的】解决樱属植物生产过程中根癌病的发生问题。【方法】采用组织分离法和稀释分离法分别从枝干和叶片中分离内生细菌;采用滤纸片法选拮抗菌,通过形态学、生理学和分子生物学法对筛选菌株进行种类鉴定;通过比色法测定筛选菌株的解有机磷的能力;以特定培养基测定菌株产IAA(anxin)的能力,通过测定OD₆₀₀值判断耐NaCl的能力。【结果】在樱花体内共分离到32株内生细菌,其中从枝条内分离到28株,从叶片内分离到4株。对32株内生细菌进行抑菌活性的筛选,有2株对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)有明显的抑制作用。另对其中的1株细菌YH-20进行鉴定,鉴定结果为瓦雷兹芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。菌株YH-20具有良好的解有机磷和无机磷作用,其在第7天的解无机磷的量为178.43 mg/L,在第7天解有机磷的量为76.50 mg/L;具有较高的分泌IAA的能力,在第7天IAA的生成量为9.174 μg/mL;可在含10% NaCl的培养基上正常生长。【结论】筛选获得的瓦雷兹芽孢杆菌YH-20菌株具有抗植物根癌病菌和解磷能力,是一株在林木根癌病的防治上有很好应用前景的菌株。     

一株耐盐芽孢杆菌的分离与鉴定

从校园草坪土壤中分离得到一株能够在20%NaCl的高盐条件下生长的耐盐细菌,经过形态观察、生理特征分析及16SrDNA序列分析,鉴定为一株芽孢杆菌(Bacillussp.),并在GenBank中完成该菌株16SrDNA序列的注册,登录号为EU167738.     

一株具有石油烃降解性能的交替假单胞菌的筛选和鉴定

从大连近岸海域筛选出了1株石油降解菌。通过形态学观察、生理生化反应和16SrDNA基因测序方法鉴定该菌株属于交替假单胞菌属。该菌株接种后,前4 d种群数量增长迅速,为对数增长期,4~11 d为稳定期,11 d后细菌密度下降。在22℃、120 r/min的条件下培养7 d,对柴油降解率可达到41.2%。     

1株氯苯降解菌的分离鉴定及降解特性研究

从大连化工厂的活性污泥样品中分离得到1株氯苯降解菌CB-2,该菌株能够以氯苯为唯一碳源进行生长.通过对其形态、生理生化特征分析以及对16SrDNA序列进行同源比较,初步鉴定该菌株为肠杆菌属（Enterobacter）.研究了菌株CB-2对氯苯的降解特性,实验结果表明,该菌株对氯苯的最适降解条件为pH=7,温度35℃,摇床转速为120r/min,接种量5%.在最适条件下,氯苯降解率可达82%以上.测定了降解途径中相关酶的活性,表明菌株CB-2降解氯苯是通过邻苯二酚1,2-双加氧酶催化的邻位开环途径进行的.     

醋渣纤维素降解菌的筛选及鉴定

以包头市呱呱叫调味品厂醋渣为菌源,采用纤维素刚果红培养基、滤纸条崩解试验初筛得到3株降解纤维素活性较高的菌株;采用不同混合菌对醋渣进行固态发酵,考察醋渣的降解率及滤纸酶活性变化,结果表明,H2+H4混合菌对醋渣的降解率最高;采用16SrDNA、18SrDNA序列分析方法对3株菌进行鉴定,菌H2为产黄青霉菌(Penicillium chrysogenum)、菌H4为卷枝毛霉菌(Mucor circinelloides)、菌H16为粪产碱菌(Alcaligenes faecalis)。     

枣疯病植原体PCR检测方法的建立及16SrDNA序列分析

以新郑灰枣枣疯病叶片为试验材料,先提取枣疯病病株叶片的DNA,经过巢式PCR扩增后对枣疯病植原体16SrDNA进行测序和分析.获得枣疯病植原体的16SrDNA基因片段为1125bp,通过序列同源性比较,表明枣疯病样品中检测到的植原体与EY(AY197655)同源性高达99％,应属于16SrV组,确定了枣疯病植原体的分类...     

玉米浆液贮运过程中常见杂菌的鉴定与分析

玉米浆是玉米淀粉加工过程中生成的一种重要的工业副产品.本研究对玉米浆液贮运过程中常见的杂菌污染情况进行了分离、鉴定和分析研究;结果表明,玉米浆液贮运过程中的主要杂菌以芽孢杆菌和酵母菌为主,其中芽孢杆菌有7种,分别是凝结芽孢杆菌(Bxillus coagulans)、栗褐芽胞杆菌(Bacillus badius)、球形芽...     

光合细菌分离鉴定及其对草鱼鱼苗养殖水质的影响

从养殖池塘底泥样品中分离纯化得到紫色非硫光合细菌1株,通过观察分离菌株的细胞形态结构和16SrDNA序列分析,鉴定该株光合细菌属于沼泽红假单胞菌(Rhodops eudomonaspalusteris).采用三级扩大培养法生产光合细菌,活菌数达3×10~9 cfu/mL.在草鱼鱼苗养殖池塘投加光合细菌,可维持池塘透明度,明显降低亚硝酸盐和氨氮含量.     

一株具有羽毛降解活性的益生菌的筛选和应用

利用以羽毛为唯一碳氮源的培养基,从市售的益生菌中分离筛选可高效降解羽毛的菌株,发现菌株HUBM2摇瓶培养7d,可将大部分的羽毛降解.该菌株经16SrDNA测序鉴定是地农芽孢杆菌.为缩短降解周期,利用该菌研究不同羽毛预处理方法对羽毛降解效率的影响,发现用0.02％的NaOH溶液处理15 min的羽毛降解效率最高.用稀碱处理的羽毛为唯一碳氮源,从接种量、培养基2个方面对HUBM2降解羽毛的条件进行优化,经过优化后,羽毛降解周期从7d减少到2d,羽毛降解率达到80％.测定降解产物中小肽和益生菌的含量,结果显示,发酵液中益生菌含量为1.4×109 CFU/mL,小肽和氨基酸含量为0.41 mg/mL.     

白桦BpTCPs基因家族生物信息学及时空表达分析

【目的】通过研究白桦TCP转录因子的序列特征及其在不同时期组织中的表达规律,为揭示BpTCPs 在白桦生长发育中的作用提供证据。【方法】依据白桦45个转录组测序结果,共获得 15 条TCPs 基因。利用生物信息学方法对TCPs基因进行了全面分析,采用实时荧光定量PCR技术分析基因在不同组织中的表达模式。【结果】生物信息学分析发现,15 条 BpTCPs均含有 1 个高度保守的bHLH结构域,系统进化分析发现 15条白桦TCP分属于TCP 蛋白的两大类; qRT-PCR分析结果显示,自5月到 9月的生长阶段中,顶芽中 BpTCPs 的表达水平呈现不同程度升高的变化趋势; 茎中BpTCP3在整个生长季上调表达; BpTCP4、BpTCP10及BpTCP7、BpTCP8分别在越冬后的雌花及雄花中上调表达。【结论】明确了BpTCPs基因的功能及揭示其参与调控植物生长的分子机制奠定基础。     

葡萄酒野生酿酒酵母的筛选及其生物特性的研究

从蓬莱葡萄酒产区君顶酒庄霞多丽葡萄果实表皮和葡萄园土壤中分离纯化得到200个单菌落,经初筛和复筛,获得性能较好的菌株11株,对其进行26SrDNA D1/D2区序列分析、形态学观察和生理生化测定,将编号为PJ16的菌株鉴定为酵母属酿酒酵母种（ Saccharomyces cerevisiae）。通过耐受性及发酵性能测试,表明菌株PJ16适合用于酿造葡萄酒。所酿葡萄酒的香气成分,如正己醇、1-壬醇、2-壬醇、壬醛、苯甲醛、乙酸乙酯、乙酸异戊酯、异戊酸乙酯、乳酸乙酯、乙酰苯、苯并噻唑、2-乙酰基呋喃、2-甲基四氢噻吩-3-酮和β-突厥酮,浓度远高于对照组商品酵母所酿葡萄酒,体现出酿酒酵母PJ16的优良特性。