溶血磷脂酸对视网膜色素上皮细胞生物学的影响

目的 研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)对体外培养人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,hRPE)细胞增殖活力、分化特性及免疫活性的影响.方法 采用MTT法检测体外培养hRPE细胞增殖活力;细胞角蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫细胞化学染色方法分析体外培养hRPE细胞分化特性;流式细胞术检测hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR和ICAM-1的表达.结果 加药后第二天开始LPA组吸光度明显高于对照组(P＜0.001);LPA对hRPE细胞细胞角蛋白和α-SMA表达无影响(两者均P＞0.05),体外传代培养hRPE细胞细胞角蛋白表达减弱(F=92.28,P＜0.001),α-SMA表达增强(F=108.98,P＜0.001);hRPE细胞表面HLA-ABC、HLA-DR、ICAM-1的阳性细胞率和平均荧光强度组间差异无统计学意义(各指标均P＞0.05).结论 LPA明显促进hRPE的增殖活力;对hRPE转分化无影响;对hRPE免疫活性无影响.     

润肺口服液对慢性支气管炎大鼠支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8表达影响的研究

目的 研究中药复方润肺口服液对慢性支气管炎(Chronic bronchitis,CB)支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8表达的影响,探讨其治疗CB的疗效机制.方法 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、慢性支气管炎组及慢性支气管炎 润肺口服液治疗组,每组8只.大鼠慢性支气管炎模型通过熏香烟加气管内注入低剂量脂多糖制成,利用免疫组织化学观察各组大鼠支气管TNF-a,ICAM-1蛋白及IL-8的表达情况.结果 熏香烟加气管内低剂量脂多糖注射可复制出较理想的慢性支气管炎模型,假手术组支气管上皮内可见TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8弱阳性表达;慢性支气管炎组支气管TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8在支气管上皮细胞、支气管周围的淋巴滤泡炎性细胞和肺泡间质细胞中可见强阳性表达;半定量图像分析显示,慢性支气管炎组TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8的表达明显强于假手术组(P＜0.05),慢性支气管炎加润肺口服液治疗组的表达则明显弱于支气管炎组(P＜0.05).结论 润肺口服液通过下调支气管上皮细胞中TNF-α,ICAM-1蛋白及IL-8的表达,从而减轻气道炎症反应是其治疗慢性支气管炎的部分机制.     

传代培养对嵌合型非整倍体计数嵌合比例的影响

探讨嵌合型非整倍体样本经传代培养后,对嵌合比例的影响。将两例(21-三体综合征、特纳综合征)嵌合型非整倍体患者外周血样本进行体外培养,72h传代一次,连续传代两次。用原位荧光杂交(FISH)技术检测原代、传代1、传代2样本中嵌合比例的变化情况。嵌合型21-三体综合征异常细胞比例分别为原代(189/200)、传代1(165/200)、传代2(139/200);嵌合型特纳综合征异常细胞比例分别为原代(142/200)、传代1(73/200)、传代2(55/200)。嵌合型非整倍体样本经传代培养后,异常细胞所占比例逐渐减少,利用传代细胞进行疾病诊断时容易出现漏诊或误诊,原代细胞更适用于疾病的诊断。     

脯氨酸羟化酶抑制剂对缺氧环境下大鼠视网膜神经胶质细胞中脯氨酸羟化酶2表达的影响研究

观察在脯氨酸羟化酶抑制剂(PHI)干预下,脯氨酸羟化酶2(PHD 2)在缺氧环境下大鼠视网膜神经胶质细胞中的表达变化,探讨其与眼内相关增生因子表达的关系。原代培养大鼠视网膜神经胶质细胞,鉴定后传代培养,并分为3组:正常对照组(control)、缺氧组(hypoxia)、干预组(intervention)。正常对照组不做特殊处理;缺氧组加入200μmol/L缺氧诱导剂氯化钴(CoCl_2);干预组加入500μmol/L的脯氨酸羟化酶抑制剂。免疫荧光化学染色法观察各组PHD 2和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,RT-PCR检测PHD 2、VEGF mRNA水平,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测各组细胞增殖活性,Annexin V-FITC鉴定各组细胞凋亡情况。对照组视网膜神经胶质细胞中PHD 2和VEGF的表达比较弱,呈弱荧光染色;缺氧组视网膜神经胶质细胞中PHD 2及VEGF的表达明显增强,呈强红色荧光及强绿色荧光;干预组PHD 2及VEGF的表达明显低于缺氧组。RT-PCR分析结果表明:对照组视网膜神经胶质细胞中PHD 2和VEGF mRNA都呈弱表达;缺氧组视网膜神经胶质细胞中PHD 2和VEGF mRNA表达量明显增多;干预组中PHD 2、VEGF mRNA表达量较对照组轻度增多,但较缺氧组明显减少。缺氧组视网膜神经胶质细胞的增殖活性明显高于正常对照组(P0.001);干预组视网膜神经胶质细胞的增殖活性高于正常对照组(P=0.001);但是干预组视网膜神经胶质细胞增殖活性明显低于缺氧组(P=0.001)。干预组和对照组视网膜神经胶质细胞的凋亡明显高于缺氧组(P0.001);干预组视网膜神经胶质细胞的凋亡高于正常对照组(P0.001)。缺氧环境可诱导视网膜神经胶质细胞中PHD 2、VEGF mRNA的表达增高,刺激神经胶质细胞的增殖,减缓细胞凋亡;脯氨酸羟化酶抑制剂可有效抑制缺氧环境下PHD 2增高引起的神经胶质细胞的增殖和VEGF mRNA的表达。     

MBL在绵羊呼吸道上皮细胞抗肺炎支原体感染过程中的机制探讨

为了探究甘露糖结合凝集素(MBL)对绵羊呼吸道黏膜上皮细胞抵御绵羊肺炎支原体(MO)感染的作用,本研究从绵羊血清中提取天然MBL蛋白,将绵羊呼吸道黏膜上皮细胞分4组,分别处理为:接种MO前细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后细胞培养基中添加MBL蛋白;接种MO后继续细胞培养;正常培养。采用荧光定量PCR的方法,对各组细胞MBL、C3、ICAM-1、IL-6、SBD-1基因的表达量进行研究。结果显示:与对照组相比,其他组细胞密度均减少,且MBL、C3基因的表达量显著下降(P0.05),同时ICAM-1、IL-6基因的表达量显著升高(P0.05);接种MO前加入MBL的细胞ICAM-1基因的表达量相对其他组显著升高(P0.05),且其SBD-1基因表达量极显著升高(P0.01)。被MO感染的各组细胞均产生免疫应答,在感染前加入MBL组细胞的免疫应答更强烈,该过程或有ICAM-1和SBD-1参与。     

大鼠骨髓间充质干细胞视网膜下移植观察

观察了骨髓间充质干细胞(MSC)在视网膜下移植后的定位以及分化后的蛋白表达情况.将体外培养的雄性大鼠MSC移植于成年大鼠视网膜下,4周后取眼球做石蜡切片并用Y染色体鉴定;将MSC用重组腺相关病毒AAV-gfp感染后移植,4周后在荧光显微镜下观察眼球冰冻切片中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;并用4',6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记的MSC进行视网膜下移植,分别于10,20,35和50 d后观察DAPI荧光分布,并在阳性的连续切片上做神经元核(Ne-uN),神经元特异性烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和角蛋白(CK)免疫组化染色.结果显示,光学显微镜下Y染色体原位杂交观察,荧光显微镜下GFP观察及DAPI观察均发现来源于MSC的阳性细胞融入了原来的视网膜结构,这些细胞分布于视网膜色素上皮层、视细胞层、双极细胞层及节细胞层,细胞形态结构与周围视网膜相似;DAPI标记观察表明,移植后至50 d无细胞增生,50 d后阳性细胞数量和分布范围缩小.免疫组织化学染色发现阳性区域的细胞NeuN,NSE,GFAP和CK的表达与周围组织相同.3种标记方法检测到的视网膜结构完整,但某些区域的细胞排列不整齐.上述结果表明,MSC在视网膜下移植后可与原视网膜结构相融合,MSC具有分化为类视网膜结构的能力.     

mTOR抑制剂联合替莫唑胺治疗恶性胶质瘤

目的:研究mTOR抑制剂替西罗莫司(Temsirolimus)联合替莫唑胺(Temozolomide)对C6鼠胶质瘤增殖及侵袭的影响.方法:传代培养C6大鼠胶质瘤细胞,HE染色观察细胞形态的变化,MTT比色法检测药物对C6细胞的体外增殖抑制作用.原位注射法建立C6大鼠胶质瘤模型,10 d后分为替西罗莫司组、替莫唑胺组、联合药物组(替西罗莫司+替莫唑胺)及空白组,隔天给药7次,4周后断头法处死大鼠取脑,做肿瘤病理组织切片,计算肿瘤体积;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数,检测与肿瘤侵袭性有关的MMP1(基质金属蛋白酶1)的表达.结果:联合药物组促进肿瘤细胞凋亡效果显著高于替莫唑胺组(P0.01).与空白组比较,替莫唑胺组移植瘤体积下降了33.5%(P0.05),移植瘤中MMPl表达为(++),移植瘤细胞凋亡率64.6%(P0.05);联合药物组移植瘤体积下降了55.2%(P0.05),移植瘤中MMPl表达阳性(+),细胞凋亡率84.0%(P0.05).结论:西罗莫司联合替莫唑胺用药能明显抑制C6大鼠胶质瘤细胞移植瘤生长,并降低与肿瘤侵袭能力有关的MMP1蛋白表达.     

大鼠脑损伤海马神经干细胞bFGF表达及三七总皂苷的作用研究

目的 探讨脑损伤对神经干细胞bFGF阳性细胞表达的影响及三七总皂苷的作用.方法 通过免疫细胞化学的方法检测脑损伤后以及给予三七总皂苷后新生大鼠海马神经干细胞bFGF阳性细胞的表达.结果 三七总皂苷可促进缺血再灌注组的bFGF阳性细胞的数目明显增多.缺血组1h、2h的bFGF阳细胞计数均多于正常组;模型组6h后阳性细胞计数开始低于正常组,具有统计学意义.24h给药组的bFGF阳性细胞的面密度和光密度均高于模型组,有显著性差异P＜0.001),具有统计学意义.结论 体外模拟脑缺血在一定时间内能引起海马神经干细胞内的bFIGF水平上调,三七总皂苷对bFCF水平的上调具有促进作用.     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

体内精卵结合、早期胚胎发育是在输卵管中进行,人们将配子、早期胚胎进行输卵管内移植（GIFT、TET）,发现胚胎发育率和妊娠率都提高。体外模仿输卵管内环境的最好方法是将胚胎与输卵管上皮细胞或组织共培养。本实验用已建立的原代和传代培养的人输卵管上皮细胞分别与小鼠早期胚胎共培养,观察其对早胚发育的影响。胚胎与不同培养时间的人输卵管壶腹部上皮细胞共培养的发育状况见表1。表1人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎发育的影响P：原代培养第5－6d细胞;S1－S5：传代1－5代培养第4－5d细胞;T2、T4：传代第2和第4代培养第id细胞,设此…     

宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中HPV16感染与hTERT,P21wafl和Ki67表达关系的分析

为了探讨宫颈鳞状细胞癌(SCC)及宫颈上皮内肿瘤(CIN)组织中人乳头瘤病毒(HPV)16感染及端粒酶反转录蛋白(hTERT)、抑癌基因P21wafl和增生抗原Ki67表达的关系及其意义,在130例正常宫颈组织及宫颈上皮内瘤样病变和宫颈鳞状细胞癌组织中,利用组织芯片技术,结合原位杂交技术,检测HPV16感染及结合免疫组织化学技术检测hTERT,Ki67,P21wafl的表达.结果表明:1)CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织HPV16杂交信号阳性率显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸润性鳞癌HPV16阳性率也显著高于CIN(χ2=5.670,P=0.017).2)hTERT在CINⅡ级、CINⅢ级、原位癌、浸润性鳞癌组织中的表达都显著高于正常宫颈组织(P均＜0.05),浸涧性鳞癌hTERT表达率也显著高于原位癌及CIN(χ2=18.870,P=0.000;χ2=66.390,P=0.000).CIN三级之间相比差异也具显著统计学意义(χ2=30.468,P=0.000).3)P21wafl在浸润性鳞癌组织中的阳性率显著低于正常宫颈组织(P＜0.05),但与CIN相比差异无显著统计学意义(P＞0.05).CIN三级之间P21wafl表达差异也无显著统计学意义(P＞0.05).4)随着宫颈病变组织学严重程度的增加,Ki67表达逐渐增加(P＜0.05).5)HPV16感染率与hTERT表达之间呈正相关(P＜0.05,r=0.339),与P21wafl表达之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.337),与Ki67表达无相关性(P＞0.05):hTERT与P21wafl之间呈负相关(P＜0.05,r=-0.248),与Ki67表达呈正相关(P＜0.05,r=0.398);P21wafl与Ki67表达呈负相关(P＜0.05,r=-0.446).可见:在宫颈上皮内肿瘤及宫颈鳞状细胞癌组织中,hTERT,P21wafl,Ki67表达改变可能与HPV16感染有关,且几者之间互相作用,共同影响CIN的发展及宫颈鳞癌的发生.这些指标综合分析可能为阐明HPV16的恶性转化机制以及为提高宫颈鳞癌及其癌前病变诊断率提供参考依据.组织芯片技术是高效的研究基因及其表达产物的技术平台.     

HO-1在慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者鼻息肉组织中的表达及调节机制研究

目的探讨血红素氧合酶1(HO-1)在慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者鼻息肉组织中的表达及调节机制.方法 50例慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者为鼻息肉组织组,30例单纯鼻中隔偏曲患者的钩突黏膜组织为对照组.采用实时荧光定量RT-PCR、免疫组化、Western blot检测鼻息肉和钩突黏膜组织中HO-1表达情况.另取钩突黏膜组织体外培养,检测不同细胞因子(IL-17A,TGF-β1)和地塞米松(DEX)刺激鼻黏膜组织中HO-1 mRNA的调节作用.结果HO-1 mRNA在鼻息肉组织中表达水平明显高于钩突黏膜组织,差异具有统计学意义(P0.05).鼻息肉组织中HO-1阳性细胞多分布于黏膜下腺体、上皮细胞、炎性细胞;HO-1阳性细胞数明显多于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).鼻息肉组织中HO-1蛋白表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).IL-17A可明显提升HO-1 mRNA表达水平;TGF-β1,DEX可明显降低HO-1 mRNA表达水平;且IL-17A,TGF-β1,DEX刺激具有浓度依赖性.DEX与IL-17A联合刺激组和DEX与TGF-β1联合刺激组的HO-1 mRNA表达量均明显低于IL-17A单独刺激组,差异具有统计学意义(P0.05).结论 HO-1作为拮抗氧化剂在鼻息肉组织氧化应激过程中被反馈性诱导上调,而糖皮质激素可抑制其表达上调.     

转基因猪细胞中CMV启动子区域甲基化的研究

为研究转基因猪外源基因表达与启动子区域甲基化的关系,利用流式细胞仪检测体外传代至第5、10和15代的转基因猪成纤维细胞中EGFP荧光强度的变化情况;采用亚硫酸盐测序的方法对这3代细胞CMV IE启动子区域30个Cp G岛的甲基化程度进行测定。结果显示细胞从第5代培养到第10代时荧光变弱,但是当继续培养到15代时EGFP荧光又渐渐变强,但EGFP阳性细胞的比例没有发生变化,均为100%。第5、10、15代细胞启动子区域的Cp G岛甲基化阳性率分别为3.64%±1.25、2.97%±1.03和1.65%±0.74,统计结果表明3代细胞间的甲基化阳性率差异不显著(P0.05)。表明转基猪成纤维细胞中CMV启动子区域的甲基化程度随着体外培养时间的变化不明显,与EGFP的表达水平变化无明显相关。     

趋化素样因子1对肾癌细胞ACHN生物活性的影响及其相关机制

通过质粒转染实现趋化素样因子1(Chemokine-like Factor 1,CKLF1)在肾癌细胞ACHN中过表达, 探究CKLF1对肾癌细胞ACHN细胞增殖和凋亡的影响及机制研究。方法：将实验组pEGFP-N1-CKLF1和对照组pEGFP-N1真核细胞表达质粒分别转染肾癌ACHN细胞,实现趋化素样因子1在ACHN细胞中的过表达。利用荧光显微镜,镜下观察质粒转染效率。利用CCK8实验观察肾癌细胞ACHN转染24、48、72小时后增殖情况;利用流式细胞术检测ACHN细胞转染24、48、72小时后细胞周期的变化情况;利用Hoechst33258染色法观察转染48小时后, ACHN细胞形态变化,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用Western blot法检测CKLF1过表达后,蛋白Cyclin D1、、Bcl-xL、STAT3、P-STAT3表达情况。结果: 1、荧光显微镜下90%以上的细胞有绿色荧光蛋白表达,证明转染效率良好。2、CCK8检测结果显示：转染48、72小时后,实验组肾癌细胞ACHN的增殖情况均明显高于对照组,差异有显著性意义48小时(P ＜0.05),72小时（P ＜0.05）;3、流式细胞术检测结果显示：实验组增值指数PI明显高于对照组, 差异有显著性意义24h(P ＜0.01),48h(P ＜0.01),72h (P ＜0.01) 。4、 荧光显微镜下Hoechst 染色结果显示：与对照组相比较,实验组凋亡小体数量较少。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比较,转染后48小时后实验组细胞凋亡率明显降低（P ＜0.05）。5、Western blot结果: 与对照组相比较,周期相关蛋白Cyclin D1表达明显高于对照组,差异有显著性意义（P＜0.05）;实验组凋亡相关蛋白Bcl-xL表达量明显高于对照组（P ＜0.05）;实验组JAK-STAT信号通路蛋白P-STAT3明显高于对照组（P＜0.05）。 结论：趋化素样因子1过表达可促进肾癌细胞ACHN的增殖、抑制其凋亡,其发生机制可能与JAK-STAT信号通路有关。CKLF1可能是肾透明细胞癌的新的治疗靶点。     

儿童哮喘发病及严重程度相关影响因素分析

目的 分析儿童哮喘发病及病情严重程度的相关影响因素,为小儿哮喘防治提供参考依据.方法 选取2019a3月～2020a5月至上海市第十人民医院(简称上海十院)就诊患儿为研究对象,哮喘组与非哮喘组各200人.采用问卷调查法研究.结果 儿童超重或肥胖(OR=2.845,P=0.004)、婴幼儿湿疹(OR=2.118,P=0.043)、过敏性鼻炎(OR=5.912,P＜0.001)、家族哮喘史(OR=3.302,P=0.005)、被动吸烟(OR=2.743,P=0.002)、饲养宠物(OR =6.251,P＜0.001)、种植花卉(OR=8.967,P＜0.001)增加儿童哮喘发生风险,母乳喂养(OR=0.151,P＜0.001)降低儿童哮喘发生风险.另外,家中饲养宠物(r=0.175,P=0.013)、种植花卉(r=0.255,P＜0.001)与儿童哮喘严重程度呈正相关.结论 哮喘是遗传与环境相互作用的结果,环境与哮喘严重程度密切相关.识别哮喘发生或恶化的危险因素对儿童哮喘防治具有重要意义.     

再次角膜移植手术前后OKT免疫球蛋白的测定

再次角膜移植术前检测外用血淋巴细胞亚群及血清泪液中免疫球蛋白的含量，与对照组比较无明显差异，再次角膜移机发生排斥反应时重复检测，结果表明，泪夜中IgG含量显著增高（P＜0．01），其它指标与对照组比较无显著性。当排斥反应复发时,OKT4数值增加;OKT4/OKTg比值升高，表明细胞免疫功能增强细胞和体液免疫反应共同对移植片起排斥作用，     

ICAM-1,TNF-α在原发性肝癌中表达的相关性分析

采用酶联免疫吸附试验检测原发性肝癌及正常体检人群各56例血清中ICAM-1和TNF-α的表达,免疫组化方法检测56例原发性肝癌组织标本的ICAM-1和TNF-α蛋白的表达.结果显示ICAM-1和TNF-α在原发性肝癌血清中存在异常表达(p<0.05),不同组织分型原发性肝癌患者血清中ICAM-1水平、TNF-α水平无差异(p>0.05),原发性肝癌组织中ICAM-1和TNF-α蛋白的表达呈正相关(r=0.216,p=0.000).ICAM-1和TNF-α的表达可能是原发性肝癌病理进程中的普遍现象,检测原发性肝癌患者血清ICAM-1和TNF-α含量,可为患者个性化治疗提供实验室依据,改善患者的预后.     

视网膜色素上皮细胞移植术后免疫排斥的相关问题探讨

视网膜色素上皮细胞(RPE)移植在动物实验中已取得大量成功,并正逐步向临床应用方面过渡,但移植后相关免疫排斥以及细胞凋亡所致一系列问题不容忽视,免疫排斥反应已成为RPE移植成功的最大障碍,且主要是慢性排斥反应.近年在该方面进行的研究已逐步深入,大量研究为防治移植后免疫排斥问题提供了可靠的实验室依据和应用前景,以期在不远的将来RPE移植能够成功地应用于人类RPE相关疾患的治疗.     

Survivin、Bcl-2和Ki-67在乳腺导管内增生性疾病及浸润性导管癌中的表达及其意义

通过检测乳腺UDH、ADH、DCIS和浸润性导管癌(infiltrative ductal carcinoma,IDC)中Survivin、Bcl-2和Ki-67的表达,从凋亡、增殖等方面初步探讨乳腺癌的某些发病机制及其可能的临床意义.选取四川大学华西医院病理科1996年～2004年手术切除乳腺标本94例,经三位有经验的病理医师复习原切片,按照2003年版《WHO乳腺与女性生殖系统肿瘤与遗传学分类》标准,筛选出UDH 22例,ADH8例,DCIS36例和IDC28例.运用免疫组化Envision法检测Survivin、Bcl-2和Ki-67的表达情况.Survivin在UDH、ADH、DCIS和IDC中表达的阳性细胞百分率分别为3.27%±8.02%(0%~34%)、2.25%±2.92%(0%~8%)、9.71%±14.16%(1%~34%)和19.45%±17.81%(1%~60%).四组病变的表达差异有显著性(F=6.983,P＜0.05).在IDC中表达的阳性细胞百分率分别比UDH、ADH和DCIS高(P＜0.05).②Bcl-2在UDH、ADH、DCIS和IDC中表达的阳性强度分别为2.32±0.72(1~3)、2.38±0.52(2~3)、1.39±1.08(0~3)和1.04±1.11(0~3).四组病变的表达差异有显著性(P＜0.05).UDH、ADH的阳性强度分别明显高于DCIS、IDC(P＜0.05).③Ki-67在UDH、ADH、DCIS和IDC中的增殖指数分别为2.97±3.66%(0.5%~12%)、2.75±3.09%(0.5%~10%)、9.81±10.25%(2%~40%)和20.21±16.50%(5%~85%).四组病变的表达差异有显著性(F=11.560,P＜0.05).IDC分别比UDH、ADH和DCIS的Ki-67增殖指数高(P＜0.05).④Survivin与Ki-67增殖指数显著正相关性(r =0.697,P＜0.05),而与Bcl-2表达呈负相关性(r =-0.425,P＜0.05).得到以下结论 ①乳腺癌的发生过程中可能表现为增殖增加,凋亡抑制增加.②Survivin、Bcl-2可能都参与乳腺癌的发生、发展.     

超表达状态下的TMP21对介导阿尔茨海默氏病γ分泌酶复合物活性影响的研究

研究转运膜蛋白21(TMP21)在小鼠成纤维细胞中超表达状态下,对γ分泌酶活性的影响.利用TMP21 cDNA转染敲除淀粉样前体蛋白表达基因的小鼠胚胎成纤维细胞系(MEF(KO)),以梯度浓度G418筛选TMP21表达量最高的细胞.处理超表达组(T)和对照组(C)细胞,并收集纯化含γ分泌酶复合物的样本.用Western blotting检测TMP21蛋白表达量,选用饱和浓度的γ分泌酶底物C99,运用ELISA检测Aβ-peptide40和Aβ-peptide42的生成总量.结果表明,样本T1、T2及IPT2所含TMP21的蛋白表达量较相应对照组样本C1、C2和IPC2分别上升11.5%(P=0.08),28.1%(P＜0.01),69.1%(P＜0.001),提示经TMP21 cDNA转染后MEF(KO)细胞中TMP21蛋白表达明显提高.同时,对照样本C1、C2及IPC2,样本T1、T2及IPT2中所含γ分泌酶活性分别降低33.4%(P=0.01),71.9%(P＜0.001),96.5%(P＜0.001).转染组样本中,样本IPT2所含γ分泌酶活性最低,提示经处理γ分泌酶得到明显纯化分离,与Western blotting所得结果一致.因此,高表达状态下的TMP21蛋白,对MEF(KO)细胞中γ分泌酶的活性具有明显的降低作用,表明TMP21为γ分泌酶的负调控因子之一.     

LAK细胞和HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用

[目的]对LAK细胞和.HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外作用进行研究分析.[方法]分别将不同比例的LAK细胞和AO细胞混合培养6 h(4:1,20:1,100:1,500:1).采用LDH释放法测定LAK的杀伤活性;HSV1-TKc+及HSV1-TKc-AO细胞按照不同比例培养60 h(15:85,35:65,50:50,75:25,65:35,85:15),后更换15μg/ml GCV培养液,6 d后采用LDH释放法测定其杀伤活性.对两组实验的效靶比与杀伤活性进行相关性检验,比较两组的杀伤活性.[结果]LAK细胞与靶细胞的比值与杀伤活性呈线性相关性(r=0.996,P＜0.01).其杀伤活性随着效靶比的增大而增加;AO/HSVI-TKc+与AO/HSV1-TKc-的细胞比例与HSV-1TKc/GCV的杀伤活性成线性相关(r=0.984,P＜0.01),其杀伤活性随着比例的增大而增加,LAK与HSV1-TKc/GCV两组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]LAK细胞与HSV1-TKc/GCV基因治疗系统对卵巢癌细胞的体外具有一定的杀伤作用,但两者比较差异无统计学意义.