成都麻羊与7个山羊品种(群体)的AFLP遗传多样性研究

采用AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism AFLP）标记,研究成都麻羊与金堂黑山羊、乐至黑山羊、合江黑山羊、江安黑山羊、营山黑山羊、嘉陵黑山羊和白玉黑山羊等8个山羊品种（群体）,共261只个体的遗传多样性．结果表明,选用8对引物组合共获得174个标记,其中80个为多态性标记,标记多态频率为16．55％～38．62％,平均每对引物获得21．75条带．根据AFLP分析结果,用Shannon多样性指数公式计算获得,供试8个山羊品种（群体）的遗传多样性指数在0．0888～0．2289之间．其中营山黑山羊的遗传多样性指数最大（0．2289）,嘉陵黑山羊次之（0．2119）．白玉黑山羊最小（0．0888）、其余山羊品种（群体）介于其间．用Rogers遗传距离公式分析获得8个山羊品种（群体）间的遗传距离（DR）。根据DR值,采用Mega3．0软件以UPGMA法构建遗传系统树状图,聚类结果聚为三个大类,营山黑山羊和嘉陵黑山羊聚为一类,合江黑山羊和江安黑山羊为一类,这两类聚为一大类;成都麻羊和金堂黑山羊聚为一类后。再与乐至黑山羊聚为一大类;这两大类相聚后,再与单独为一大类的白玉黑山羊聚在一起．聚类结果与品种（群体）来源和生态地理分布相一致．AFLP标记很好的反映供试山羊品种（群体）的遗传差异和亲缘关系,是研究山羊遗传多样性一种理想的分子标记．     

成都麻羊与四川各地黑山羊品种(群体)mtDNA D-1oop序列多态性研究

采用mtDNA多态性标记对成都麻羊与四川各地黑山羊品种(群体)D-loop序列多态性进行分析.结果表明,供试山羊品种(群体)mtDNA片段长度为16kb左右,mtDNA D-loop片段长度为1210～1212bp,共检测到10种单倍型,群体间共有多态座位83个,单一多态座位23个,简约信息座位24个,平均核苷酸歧异度为0.001510,D-loop序列多态性较贫乏.经聚类,成都麻羊与四川各地黑山羊品种(群体)分为两大类,成都麻羊首先与金堂黑山羊(D=0.203)聚在一起后,再依次与乐至黑山羊(D=0.223)、建昌黑山羊(D=0.477)、白玉黑山羊(D=0.593)形成一大类;合江黑山羊与江安黑山羊(D=0.231)先聚在一起后,再与自贡黑山羊(D=0.337)聚为1类,营山黑山羊与嘉陵黑山羊(D=0.242)聚为1类,2类形成另一大类.最后两个大类聚在一起.聚类结果与供试山羊品种(群体)来源和生态地理分布相一致.     

四川9个黑山羊品种(群体)的DNA指纹分析

以寡核苷酸探针(CA/GATA/TCC)_5/HinfI酶切,研究四川9个黑山羊品种(群体)的DNA指纹图谱。结果表明,在供试黑山羊中,个体平均可检测出18.4±1.18条谱带,未发现有共同的谱带,亦未检出性别特异谱带。9.0kb和2.2kb为建昌黑山羊共有谱带,9.0kb为金堂黑山羊共有谱带,9.0kb、6.2kb和5.5kb为白玉黑山羊共有谱带,其余各黑山羊品种(群体)内无共有谱带。9个黑山羊品种(群体)内相似系数为0.420～0.560;遗传距离为0.380.0.560,其中合江黑山羊、江安黑山羊、自贡黑山羊间(0.380～0.390)、,金堂黑山羊和乐至黑山羊间(0.384)均较小,白玉黑山羊分别与其他8个黑山羊品种(群体)间(0.450～0.560)较大。     

川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因cDNA克隆及序列分析

根据GenBank中绵羊的PRLR基因序列设计引物,以川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊垂体总RNA为模板,通过RT-PCR技术对川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因cDNA克隆及进行序列分析,以期为进一步研究该基因与山羊的繁殖性能奠定理论基础.结果表明:川中黑山羊(金堂类群)和藏山羊PRLR基因编码区均长1746bp,均编码581个氨基酸.川中黑山羊(金堂类群)PRLR基因编码区与藏山羊、绵羊、牛、牦牛野猪和人的同源性分别为99.71%、99%、95%、95%、83%和80%.以核苷酸序列构建分子系统进化树,川中黑山羊(金堂类群)先与藏山羊聚为一类,再与绵羊聚为一类,后与牛和牦牛聚为一类,然后与野猪聚为一类,最后与人聚为一类.     

山谷型藏山羊建昌黑山羊安哥拉山羊乳生化遗传标记研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）分析山谷型藏山羊、建昌黑山羊、安哥拉山羊乳中的ＬＤＨ、ａｓ－ＣＮ、β－ＣＮ、β－ｌｇ、ＳＡ等基因座,结果表明,三品种的ＬＤＨ、ａｓ－ＣＮ、β－ＣＮ、β－ｌｇ有多态,ＳＡ无多态．其中乳ＬＤＨ为１～３条带,有Ａ、Ｂ、Ｃ三种表型．ａｓ－ＣＮ有ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ三种表型,由Ａ基因和Ｂ基因控制．β－ＣＮ和β－ｌｇ多为杂合的ＡＢ型,其它的电泳表型极少．乳ＳＡ为单态,定为ＡＡ型．运用乳蛋白基因座计算三个品种的基因杂合度,表明山谷型藏山羊及建昌黑山羊乳蛋白基因座的杂合度大于安哥拉山羊．计算三品种的遗传相似系数及遗传距离,表明山谷型藏山羊与建昌黑山羊的遗传距离较小,亲缘关系较近．安哥拉山羊与山谷型藏山羊及建昌黑山羊的遗传距离较大,亲缘关系远．     

山羊INHA和INHBA基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达研究

分别提取处于同一发情周期的5只低繁藏山羊和5只高繁金堂黑山羊的卵巢、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对INHA、INHBA基因cDNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究.结果表明:藏山羊和金堂黑山羊INHA基因编码区均长1083bp,编码360个氨基酸,两品种基因编码区有7处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;INHBA基因编码区均长1278bp,编码425个氨基酸,两品种基因编码区有4处碱基不同,并导致1处氨基酸的差异.藏山羊INHA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.4%、98.9%、95.8%、88.6%、81.0%、79.5%和84.8%;藏山羊INHBA基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、绵羊、牛、野猪、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.7%、99.4%、98.1%、91.7%、88.0%、88.5%和91.2%.INHA和INHBA基因mRNA在两个山羊品种的卵巢、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P0.05).说明INHA和INHBA基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究.     

中国美利奴羊(新疆军垦型)超细品系微卫星多态性的研究

选择分布在绵羊第6号染色体上的4个微卫星基因座OarDB6、BM1824、BM6438、BM6506,利用PAGE凝胶电泳检测微卫星在中国美利奴羊（新疆军垦型）超细品系中的等位基因数,计算等位基因频率（Pi）、遗传杂合度（H）和多态信息含量（PIC）,分析了中国美利奴羊（新疆军垦型） 微卫星DNA的多态性.4个微卫星位点OarDB6、BM1824、BM6438、BM6506在中国细毛羊品种超细品系中PIC平均值为0.6074,该4个微卫星位点可以用于中国细毛羊遗传多样性的评估.遗传杂合度平均值为0.86145,表明该品系绵羊遗传多态性丰富,群体遗传变异较大,并且4个微卫星基因座适用于绵羊的遗传连锁分析研究.     

四川黑山羊品种(群体)的RAPD标记研究

从5组24个随机引物中筛选出16个重复性好的多态引物,对四川9个黑山羊品种(群体)共计572只个体,进行随机扩增多态DNA(RAPD)标记研究.结果表明,16个引物扩增出125条带,其中102条带呈现多态,多态率为81.61%.不同引物扩增出的DNA片段在各品种(群体)中的分布频率不同.9个黑山羊品种(群体)间相似系数为0.7533～0.9642,遗传距离指数为0.0358～0.2467.引物OPQ-06(序列为GAGCGCCTTG)未在乐至黑山羊中扩增出900bpDNA片段,而在其他8个黑山羊品种(群体)中出现率均为1,可作为区分乐至黑山羊和其他8个黑山羊品种(群体)的分子遗传标记.引物OPK-03(序列为CCAGCTTAGG)未在江安黑山羊扩增出550bpDNA片段,在其他8个黑山羊品种(群体)中出现率均为1,可用于区分江安黑山羊和其他8个黑山羊品种(群体)的分子遗传标记.     

安哥拉山羊血液蛋白多态性的研究

用 PAGE 常压电泳法测试了安哥拉山羊血液蛋白多态性,并与当地藏山羊进行了比较研究.安哥拉山羊和藏山羊 Hb、Alb 和 Amy 均只有一种表型,未表现出多态性,安哥拉山羊 Tf 也无多态性,藏山羊则有多态性;而两个品种山羊的 AKP、LDH 和 Es 均表现出多态性,尤其是 Es 的表型更为复杂.血液蛋白质的多态性和活力的差异,可作为附加性状探索选种新途径.     

多胎和单胎山羊品种促性腺素基因及其受体基因的克隆、序列分析及组织表达研究

以多胎的金堂黑山羊和单胎的藏山羊为研究对象,通过RT-PCR技术,对金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因进行克隆,采用Real-time PCR技术测定FSHR和LHR基因在发情前期母羊卵巢中的表达量,采用酶联免疫法测定血浆中FSH和LH的浓度.结果表明:金堂黑山羊和藏山羊FSHβ、LHβ、FSHR和LHR基因的CDS区长度分别为390bp、426bp、2088bp、2103bp,同源性分别为99.74%、100%、99.95%、99.57%;发情前期两山羊品种之间卵巢FSHR和LHR基因的mRNA相对表达量差异不显著(P>0.05),血浆中FSH浓度无显著差异(P>0.05),LH的浓度差异显著(P<0.05).提示FSHβ和LHR基因序列及血浆中LH浓度在两个品种间的差异可能是品种间产羔数性状差异的重要原因.     

安哥拉山羊改良建昌黑山羊高代杂种羊血液生化遗传标记的研究

采用ＰＡＧＥ法检测Ｆ３的Ｈb、Ｔf、Hp,Pr,Alb、Po、ＬＤＨ、Ａkp和Amy等基因座的多态性和相关分析。研究结果表明,Ｆ３的Hb、Ｔf、Hp、Ａkp呈多态,Ａlb、Pr、Ｐr、Ｐo、ＬＤＨ、Ａmy呈单态;ＬＤＨ同工酶相对活力顺序为ＬＤＨ１＞ＬＤＨ３＞ＬＤＨ２＞ＬＤＨ４＞ＬＤＨ５;Ｆ３与安哥拉山羊Ａkp基因型分布差异显著（Ｐ＜０．０５）,与建昌黑山羊差异极显著（Ｐ＜０．０１）;平均基因杂合度安哥拉山羊最高,Ｆ３次之,建昌黑山羊最低,Ｆ３与安哥拉山羊的遗传相关系数大,遗传距离小;ＬＤＨ１的相对活力与净毛率呈极负相关（Ｐ＜０．０１）,ＬＤＨ５与两型毛根数百分比呈显著正相关（Ｐ＜０．０５）、与两型毛重量百分比呈极显著正相关（Ｐ＜０．０１）、、与无无髓毛伸度呈极显著负相关（Ｐ＜０．０１）,ＬＤＨ其他各要带的相对活力与产毛性状无显著相关。     

麦洼牦牛血液蛋白多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对麦洼牦牛９个血液蛋白基因座（Ｈｂ、Ｔｆ、ＰＴｆ、Ａｋｐ、ＬＤＨ－１、Ａｌｂ、Ａｍｙ、Ｈｐ、Ｐａ）进行检测,并计算其基因频率和基因型频率．结果表明,在检测的９个基因座中４个基因座（Ｔｆ、ｐＴｆ、Ａｋｐ、ＬＤＨ－１）具有多态性,麦洼牦牛群体遗传变异程度低     

西藏耗牛血液蛋白多态性的研究

采用淀粉凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳法对西藏耗牛的４上血液蛋白位点（Ｈｂ，Ｔｆ，Ａｌｂ，Ｐａ）进行检测，得出了基因频率和基因型频率，进行遗传变异性分析，引用６个其它耗牛品种Ｈｂ和Ｔｆ位点的基因频率资料，比较分析了西藏耗牛和其它耗牛品种的关系，并探讨了耗牛血液蛋白多态性研究中的有关问题。     

藏山羊微卫星DNA多态性研究

选用10个SSR标记,经PCR扩增、9%非变性聚丙烯酰胺电泳和银染法显色,对高原型藏山羊、山谷型藏山羊进行遗传多态性研究,并以白玉黑山羊、建昌黑山羊、美姑山羊和新疆山羊作对照.结果表明,10个SSR标记在高原型藏山羊、山谷型藏山羊、白玉黑山羊、建昌黑山羊、美姑山羊和新疆山羊群体的平均H、PIC、Ne分别为0.673/0.631/4.3、0.680/0.649/4.7、0.777/0.660/4.3、0.797/0.716/5.1、0.793/0.561/3.2和0.680/0.629/4.6.高原型藏山羊与山谷型藏山羊(D=0.063)聚为1类;建昌黑山羊和美姑山羊(D=0.026)聚为1类后,再与白玉黑山羊聚为1类;最后两类与新疆山羊聚为1大类,与各群体的来源和生态地理分布一致.     

金堂黑山羊与白玉黑山羊生态特征的比较研究

采用生态地理比较方法研究金堂黑山羊与白玉黑山羊的生态特征,结果表明,金堂黑山羊与白玉黑山羊在生态地理条件、饲养管理、外貌特征和生长性能等方面存在较大的差异.金堂黑山羊的产肉性能高,繁殖性能好,是一个优良的地方肉用山羊品种.白玉黑山羊产绒性能较好.     

三个山羊品种(类群)的RAPD分析

采用RAPD方法分析了藏山羊、安哥拉山羊、建昌黑山羊的巴普类群，得到清晰且多态性丰富的条带，其扩增条带总数共40条，其中22条有多态，多态频率为55．0％．对3个山羊品种(类群)的基因组DNA进行多态性和亲缘关系研究，结果表明：3个山羊品种(类群)间的多态性大于品种(类群)内的多态性，藏山羊与安哥拉山羊之间亲缘关系较近，巴普类群与安哥拉山羊之间亲缘关系较远．     

牦牛血液蛋白遗传多态性及其与生长发育和毛绒品质特性关系的初步研究

用非连续性缓冲系统聚丙烯酰胺垂直平板电泳法和乙酸纤维素薄膜电泳法,检测100头九龙和麦洼牦牛的血清运铁蛋白(T_f),后白蛋白(Pa)和红细胞血红蚕白(Hb)三个遗传位点的蛋白多态。发现 Hb 在麦洼牦牛中存在 FS 和 SS 两个型,九龙牦牛中则未见多态型(电泳表型均为 FS)。T_f 和 Pa 分别由等显性等位基因 T_f~A、T_f~D、T_f~E 和 Pa~A、Pa~B所决定。三个基因位点的多态型及其在两个品种间差异明显,说明在遗传上具有相对独立性。又研究43头2岁九龙牦牛 T_f 和 Pa 两个位点的不同多态型在体高、胸围、体重、含绒率、毛长、毛细、绒长和绒细八个性状上的差异性。结果初步表明,Pa 与上述经济性状均无显著关系,T_f 则与体高、胸围、体重、毛细和绒细五个性状呈显著相关P<0.05)。TEE 纯合型个体在生长发育和毛绒品质特性方面均优于其它牦牛。     

金堂黑山羊数量性状主基因的研究(一)

以偏离正态分布检测法分析了金堂黑山羊体重、体高、体长、胸围、胸深、胸宽和管围七个数量性状。结果表明：体重、体高、体长、胸围和胸深五个数量性状有主基因的作用。