肝癌细胞能量代谢中三种酶活力的比较研究

对健康小鼠肝细胞，实验性肝癌小鼠肝细胞及肝癌实体瘤细胞中的琥珀酸脱氢酶，乳酸脱氢酶和细胞色素氧化活力进行测定，发现：１）与健康鼠肝细胞比较，肝癌细胞中琥珀酸脱氢比活力显著降低（Ｐ〈０．０１），乳酸脱氢酶，细胞色素氧化酶比活力显著升高（Ｐ〈０．０１）。２）与正常肝细胞比较，荷瘤小鼠肝细胞中乳酸脱氢酶，细胞色素氧化酶比活力显著升高（Ｐ〈０．０１）。琥珀酸脱氢酶比活力无明显变化（Ｐ〉０．０５）。结果提示     

TTC-脱氢酶还原法测定滇重楼细胞活力优化条件筛选

目的:采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,TTC)-脱氢酶还原法对超低温保存后的滇重楼地下茎进行细胞活力测定,旨在探索出一套更加简单、快速和准确的细胞活力测定方法.方法:选取TTC-脱氢酶还原法测定细胞活力过程中的TTC溶液浓度、pH值、反应温度、...     

大肠杆菌的培养及L-天冬酰胺酶活力的测定

讨论了大肠杆菌L-天冬酰胺酶发酵液酶活力的影响因素，筛选了大肠杆菌产酶的优化条件。发现了发酵液酶活力的最适pH随缓冲介质的变化而变化；甘氨酸介质中，pH6．50～9．50均适于酶活测定，且pH8．00时酶活最高；硼酸、Tris、磷酸介质中，在pH8．50时，酶活力依次下降；酶反应的适宜温度40～50℃．对菌株培养的研究表明，葡萄糖对产酶有抑制作用，适当提高摇床转速可使发酵液酶活力由原来的136U／mL增至145U／mL，在确定的最优培养条件37℃，pH7．00，250r／min下，产酶稳定期可持续12h。     

胆碱酯酶抑制法检测辛硫磷农药残留

利用胆碱酯酶水解碘化酰胆碱后形成的硫代胆碱，与二硫双对硝基苯甲酸发生化学反应生成黄色产物，在412nm比色测定。利用此法测定酶、底物的添加量以及保温温度和保温时间对酶活力的影响，还研究了不同浓度与保温时间的辛硫磷对胆碱酯酶活力的抑制情况。获得了胆碱酯酶优化的反应条件，结果还表明胆碱酯酶对辛硫磷比较敏感，其抑制中浓度为I50为3．9049μg/L。     

太行猕猴血清六种酶活力的测定

猕猴在生理机能和生化代谢等方面都与人类相似,在医学和生物学实验研究中具有重要价值,对血液生化参数的研究不仅是灵长类疾病诊断的重要指标,亦是实验研究的重要资料,本文对26只太行猕猴血清中六种酶活力进行了测定。雄性18只,雌性8只,年龄均在4岁以上,体重4.5—9公斤。测定结果,门冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、γ-L-谷氨酰转肽酶等四种酶活力数值和南方猕猴数值相接近,均在人类正常值范围;而丙氨酸氨基转移酶和肌酸激酶数值则高于南方猕猴和人类,这可能与动物的食性及生活状态不同有关,有待进一步研究。     

阿特拉津氯水解酶基因的定点诱变和酶活力检测

阿特拉津氯水解酶(AtzA)是一种对除草剂的生物降解和环境净化有重要意义的酶．采用定点诱变方法将假单胞菌ADP株的atzA基因第832位碱基(鸟嘌呤)诱变成腺嘌吟，然后将其插入表达载体pET21b( )，并在大肠杆菌中表达．表达的蛋白特性研究表明：AtzA或AtzA—NK融合蛋白系水溶性蛋白，很容易通过Ni—NTA Magnetic Agarose Beads分离纯化．采用阿特拉津脱氯反应产生HCl而引起pH指示剂颜色改变的测定方法能方便地对其酶活力进行定量．酶活力结果表明，突变酶的比活力与假单胞菌ADP菌株的AtzA相比没有明显改变，暗示突变位点(第278位缬氨酸突变成甲硫氨酸)不是酶的活性中心或底物结合部位。     

枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

利用PCR技术扩增得到来源于枯草芽孢杆菌的葡萄糖脱氢酶基因片段，并构建重组质粒pUC-T-GDH，然后将基因片段克隆于大肠杆菌表达载体pBV220中．得到表达质粒pBV-GDH．葡萄糖脱氢酶在含有表达质粒的基因工程菌株中得以诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层扫描结果表明，经诱导表达的葡萄糖脱氢酶约占基因工程菌株总蛋白的45％．葡萄糖脱氢酶活力测试表明，基因工程菌株无细胞抽提液中葡萄糖脱氢酶的活力为7.8U／毫克，约为对照组的30倍．实验结果初步说明，广泛应用于工业化生产的葡萄糖脱氢酶可以在基因工程菌株中得以大量表达并维持较高活力．     

肺炎克雷伯氏菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增并克隆出D-乳酸脱氢酶的基因（ldhD）,将其连接到表达载体pET-22b(+)质粒上,构建pET-22b(+)-ldhD重组质粒,测序结果100%正确。将重组质粒pET-22b(+)-ldhD转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,通过氨苄霉素抗性平板筛选,构建大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-ldhD基因工程菌。重组菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE蛋白电泳分析,目标条带出现在分子量约37000处,表明D-乳酸脱氢酶基因ldhD在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。采用紫外分光光度法测定其酶活,底物丙酮酸终浓度为10mmol/L时,在丙酮酸还原为D-乳酸反应方向D-乳酸脱氢酶表现出119.04U/mL的酶活力;底物D-乳酸终浓度为50mmol/L时,在D-乳酸转化为丙酮酸的逆反应方向中表现出0.89U/mL的酶活力。比酶活则分别为9.16U/mg和 0.07U/mg。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法,计算出酶反应的米氏常数K_M为10.54mmol/L。经摇瓶发酵后,通过高效液相色谱测定产物,D-乳酸的产量达到3.09g/L。     

甘蔗渣沼气发酵过程中酶活力与产气量的动态关系研究

在恒温25℃下,以甘蔗渣为原料,采用批量发酵工艺,进行沼气发酵。在沼气发酵过程中,通过对料液中的淀粉酶、纤维素酶、木聚糖、脱氢酶的酶活力大小与产气量大小随时间的动态变化关系的研究,得出如下结论：这些酶的酶活力与产气量之间存在一定的相关性：这4种酶的酶活力均与产气量随时间呈现出峰值交替变化的规律,在时间上,前3种酶的酶活力的峰值稍提前于产气量的峰值变化,脱氢酶的酶活力峰值变化与产气量的峰值变化在时间上基本是同步的。     

纤维素酶测活方法的分析——基于构建统一的工业化纤维素酶测活标准

本实验分析了国内外常用的测活标准IUPAC标准(Ghose, 1987)、中国农业行业标准（NY/T 912-2004）及各大公司的企业标准,结果显示采用IUPAC标准推荐的方法测定纤维素内切酶活力和总酶活力操作简单,稳定性、重复性较好.实验进一步对国内生产厂家的一系列产品进行了测定分析,为工业化纤维素酶测活体系的统一奠定了基础.     

Cadherin 23 is a component of the tip link in hair-cell stereocilia

Mechanoelectrical transduction, the conversion of mechanical force into electrochemical signals, underlies a range of sensory phenomena, including touch, hearing and balance. Hair cells of the vertebrate inner ear are specialized mechanosensors that transduce mechanical forces arising from sound waves and head movement to provide our senses of hearing and balance; however, the mechanotransduction channel of hair cells and the molecules that regulate channel activity have remained elusive. One molecule that might participate in mechanoelectrical transduction is cadherin 23 (CDH23), as mutations in its gene cause deafness and age-related hearing loss. Furthermore, CDH23 is large enough to be the tip link, the extracellular filament proposed to gate the mechanotransduction channel. Here we show that antibodies against CDH23 label the tip link, and that CDH23 has biochemical properties similar to those of the tip link. Moreover, CDH23 forms a complex with myosin-1c, the only known component of the mechanotransduction apparatus, suggesting that CDH23 and myosin-1c cooperate to regulate the activity of mechanically gated ion channels in hair cells.     

3-羟基苯甲酸对酪氨酸酶的抑制作用和抑菌作用

酪氨酸酶是一种金属铜蛋白,广泛存在于自然界中,在生物体合成黑色素过程中起着关键作用.以3-羟基苯甲酸为效应物,研究对蘑菇酪氨酸酶活力的影响和对化妆品中的主要腐败菌的抑制作用.结果表明:3-羟基苯甲酸对酪氨酸酶有明显的抑制作用,其半抑制率(IC50)为4.20 mmol/L.抑制作用表现为可逆的竞争型,抑制常数KI为2.38 mmol/L.3-羟基苯甲酸对大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(St.aureus)和枯草芽孢杆菌(B.subtilis)有显著的抑制作用.本文通过研究3-羟基苯甲酸的抑酶和抑菌作用,为进一步研究设计新型化妆品添加剂奠定了理论基础.     

环状芽孢杆菌β-半乳糖苷酶水解乳糖和ONPG的底物特异性

在细菌乳糖酶的菌株筛选过程中发现，OHA与LHA的比值范围 1．3－32．2之间，表明OHA与LHA差异很大，无相关性。对环状芽孢杆菌的乳糖酶研究发现，Na^ 和K^ 能不同程度地促进OHA和LHA；Mg^2 能增强OHA，对LHA却表现出抑制作用。酶作用于ONPG和乳糖的最适pH和温度也存在差异。一定反应体系中，OHA／LHA的值随反应条件的变化而不同，因此用OHA来评价LHA会对酶的实际应用带来很大影响。     

Synergistic effects of cellobiose dehydrogenase and manganese-dependent peroxidases during lignin degradation

The synergistic effects of cellobiose dehydrogenase (CDH) and manganese-dependent peroxidases (MnP) on the degradation of kraft pulp cellulolytic enzyme lignin (CEL) were investigated. Addition of CDH significantly increased the amount of water-soluble products reduced from CEL by MnP. CDH facilitated the reduction of the contents of methoxyl, carboxyl, phenolic hydroxyl and total hydroxyl groups of CEL by MnP.¹H-NMR analysis showed that addition of CDH also decreased further the amount of protons of CEL degraded by MnP. The results proved for the first time that CDH could promote degradation of lignin by MnP and suggest that CDH could not only promote degradation of cellulose but also is an important part of the lignin biodegradation system.     

桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

研究桑黄素(Morin)对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制效应的结果表明:桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用;导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.08和1.02 mmol/L;桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,0.175 mmol/L桑黄素使得单酚酶的迟滞时间从24 s延长到362 s,迟滞时间增加了14倍,酶的稳态活力下降了61.9%;桑黄素对二酚酶的抑制作用表现为竞争性可逆抑制作用,抑制常数为0.55 mmol/L.     

脲变性兔脑肌酸激酶在复性过程中活力与构象变化的比较

研究了脲变性兔脑肌酸激酶（ＡＴＰ：Ｃｒｅａｔｉｎｅ Ｎ－ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ＥＣ２．７．３．２）在复性时的构象变化与活力变化的过程。在适当条件下，酶的活力恢复可达９０％以上。与兔肌肌酸激酶相似，该酶的复活过程也呈现含有三相组成的一级反应过程。在一定的酶浓度范围内，酶活力恢复过程与酶浓度无关。将用荧光、ＣＤ和紫外差吸收监测的构象变化与活力变化的速度常数比较，表明酶活力恢复前期的速度与构象变化速度相当，但在酶分子的总体构象变化完成之后，活力恢复尚未完全。     

内切菊粉酶基因在毕赤酵母中的高水平表达研究

低聚果糖(Fructooligosaccharides,FOS)具有改善胃肠道环境、刺激和加强机体免疫反应、抑制肠道特定肿瘤的发生等生物活性.内切菊粉酶能够水解菊粉获得低聚果糖.为了实现内切菊粉酶的高表达,从无花果曲霉(Aspergillus ficuum ATCC16882)中克隆了内切菊粉酶编码基因INU2,并实现了在毕赤氏酵母中的重组分泌表达,摇瓶表达的酶活力为570.4U/mL.去除内切菊粉酶的内源性信号肽序列后,其重组表达水平显著提高,摇瓶表达的酶活力为1013.8U/mL,提高幅度77.7%.TLC分析表明:毕赤酵母重组表达的内切菊粉酶(不含内源性信号肽序列)能将2%长链菊粉水解为2～3个聚合度的低聚果糖.     

苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用

酪氨酸酶(EC 1.14. 18.1)是生物黑色索形成的关键酶.该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0 mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100 s延长到140 s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显爪浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50％的抑制剂浓度(IC50)为2.05 mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070 mmol/L.     

钼对葡萄叶片硝酸还原酶活性及生长发育的影响

适量施钼有利于葡萄生长过程中硝酸还原酶活性的提高，缺乏或过量则使其降低，其他微量元素对ＮＲ活性也产生一定影响。由于酶活性的差异也对葡萄的生长发育带来影响。     

土壤酶与土壤肥力关系的研究

论述了各种土壤酶的特性及其相互关系;土壤酶活性与土壤肥力因素之间密切相关;施肥对土壤酶活性有着明显的影响,用酶活性的总体进行土壤肥力水平评价的可能性。