苯甲酸及其衍生物对菜青虫多酚氧化酶抑制作用

以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究苯甲酸及其衍生物:p 羟基苯甲酸、p 氰基苯甲酸、p 环已基苯甲酸等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为14.2、11.3、16.1和2.1mmol/L.研究了抑制剂作用的动力学,结果表明:苯甲酸和p 环已基苯甲酸对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数分别为14.25和2.21mmol/L;p 羟基苯甲酸对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI为7.21mmol/L;p 氰基苯甲酸对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI和KIS分别为14.31和27.34mmol/L.     

4-氨基苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用机理研究

报道了4-氨基苯甲酸(4-aminobenzoic acid)对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制效应.结果表明,4-氨基苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用.导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50 0%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.35和0.30 mmol/L.4-氨基苯甲酸对单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,1.0 mmol/L可使单酚酶的迟滞时间从30.5 s延长到155.1 s.增加了4.4倍.4-氨基苯甲酸对二酚酶的抑制作用表现为混合型可逆抑制作用,抑制常数(Kl和Ks)分别为0.259和1.46 mmol/L.     

苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶抑制作用机理的研究

报道了苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力的影响以及抑制作用机理.研究结果表明,苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用,其效应为可逆抑制效应.测定导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为1.20和1.00mmol/L.苯甲酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,4mmol/L苯甲酸使得单酚酶的迟滞时间从42s延长到200s.测定苯甲酸对二酚酶的抑制作用表现为非竞争性抑制类型,测定抑制常数为0.95mmol/L.苯甲酸与酶的结合导致天然酶的内源荧光的量子产率下降,但荧光发射峰没有位移.作者提出抑制剂与酶分子的作用模型.     

有机溶剂对菜青虫多酚氧化酶活力的影响

以菜青虫五龄虫为材料,分离提取多酚氧化酶,研究有机溶剂乙醇、正丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇等对该酶催化L 多巴(L DOPA)氧化活力的影响.测定抑制作用的IC50分别为12.4、6.4、24.2、15.5和17.0%.抑制剂作用的动力学研究结果表明:乙醇、乙二醇和丙三醇对酶的抑制作用表现为非竞争性类型,其抑制常数KI分别为12.05、23.50和17.53mmol/L;正丙醇和丙二醇对酶的作用表现为混合型抑制,抑制常数KI分别为4.18和12.79mmol/L,KIS分别为19.45和22.41mmol/L.     

3-羟基苯甲酸对酪氨酸酶的抑制作用和抑菌作用

酪氨酸酶是一种金属铜蛋白,广泛存在于自然界中,在生物体合成黑色素过程中起着关键作用.以3-羟基苯甲酸为效应物,研究对蘑菇酪氨酸酶活力的影响和对化妆品中的主要腐败菌的抑制作用.结果表明:3-羟基苯甲酸对酪氨酸酶有明显的抑制作用,其半抑制率(IC50)为4.20 mmol/L.抑制作用表现为可逆的竞争型,抑制常数KI为2.38 mmol/L.3-羟基苯甲酸对大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(St.aureus)和枯草芽孢杆菌(B.subtilis)有显著的抑制作用.本文通过研究3-羟基苯甲酸的抑酶和抑菌作用,为进一步研究设计新型化妆品添加剂奠定了理论基础.     

苯甲酸衍生物对马铃薯多酚氧化酶的抑制作用

研究马铃薯的PPO理化性质,为研究其抑制剂的作用条件奠定基础.该酶作用的最适条件是30℃,pH 6.0;酶在低于50℃和在pH 5.15~8.75内稳定;在pH 6.8,30℃下,酶催化L-DOPA氧化反应的Km和Vm分别为7.24 mmol/L和617.0μmol/(L.min).3-甲氧基-2-羟基苯甲酸、4-甲氧基-2-羟基苯甲酸、5-甲氧基-2-羟基苯甲酸、4-甲氧基-3-羟基苯甲酸和3-甲氧基-4-羟基苯甲酸等对马铃薯PPO均有明显的抑制作用,其半抑制率(IC50)分别为1.78、0.28、0.53、0.14和2.49 mmol/L.抑制效应均为可逆竞争性,抑制常数分别为1.56、0.24、0.46、0.12和2.37 mmol/L.     

产物类似物对南美白对虾N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

以南美白对虾为材料,分离提纯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶,研究产物NAG及产物类似物glu、gal、fru等对该酶催化水解pNp-β-D-GlcNAc活力的影响.抑制强度次序为NAG＞gla＞glu＞suc＞fru.研究抑制作用动力学,结果表明NAG对酶的抑制作用表现为反竞争型,其抑制常数KIS为11.4 mmol/L/;gal、glu、fru对酶的作用表现为竞争型抑制,抑制常数KI分别为0.709、0.747和2.94 mol/L;suc对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI=KIS=2.58 mol/L.     

维生素B_1对蘑菇酪氨酸酶抑制作用机理的研究

报道了维生素B1对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力的影响以及抑制作用机理.研究结果表明,维生素B1(Vit B1)对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用.测定导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为15和20 mmol/L.Vit B1对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,21 mmol/L Vit B1使得单酚酶的迟滞时间从52 s延长到277 s.Vit B1对二酚酶的抑制作用表现为竞争性抑制类型,测定抑制常数(KI)为11.7 mmol/L.     

罗非鱼脯氨酸内肽酶的分离及抑制剂对其的作用机制

采用硫酸铵盐析及柱层析技术,从罗非鱼肌肉中分离纯化得到分子质量约为85 ku的脯氨酸内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)。通过肽质量指纹质谱分析,获得13个肽片段,含128个氨基酸残基,结果显示,与伯氏朴丽鱼(Haplochromis burtoni)的PEP完全一致。该酶特异分解荧光底物Suc-Gly-ProMCA和Suc-Gly-Pro-Leu-Gly-Pro-MCA,PEP特异性抑制剂SUAM-14746和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF可以抑制该酶的活性。PEP催化Suc-Gly-Pro-MCA水解反应的活化能(Ea)为47.42 k J/mol。SUAM-14746对PEP表现为竞争性抑制作用,抑制常数(KI)为1.91μmol/L。金属离子Zn~(2+)和Cu~(2+)对PEP的抑制类型均为混合型抑制,其中对游离酶的抑制常数(KI)分别为1.80 mmol/L和0.07 mmol/L,对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为2.33 mmol/L和1.17 mmol/L。     

5-甲氧基水杨醛对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶.实验发现:5-甲氧基水杨醛对酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活力均有抑制作用;5-甲氧基水杨醛对酪氨酸酶单酚酶活力的影响表现为对酶稳态活力的抑制作用,和对迟滞时间的延长作用,2.0mmol/L的5-甲氧基水杨醛使得单酚酶的稳态酶活力下降68%,并使迟滞时间从107 s延长到160 s;对二酚酶的抑制作用为可逆效应,半抑制率(IC50)为2.45 mmol/L,抑制类型表现为混合型机理,其抑制常数KI和KIS分别为1.426和7.766 mmol/L.通过研究5-甲氧基水杨醛对酪氨酸酶的抑制作用机理,为进一步研究设计新型酪氨酸酶抑制剂奠定基础.     

Inhibitory Kinetics of p-Substituted Benzaldehydes on Polyphenol Oxidase from the Fifth Instar of Pieris Rapae L.

Polyphenol oxidase (PPO) is the enzyme responsible for enzymatic browning during the growth of insects. It is also involved in defense reactions and is related with immunities in insects. PPO, a metalloenzyme oxidase, catalyzes the oxidation of ο-diphenol to ο-quinone. The present paper de- scribes the effects of benzaldehyde and its p-substituted derivatives on the activity of PPO from the fifth instar of Pieris rapae L. PPO from the fifth instar of Pieris rapae L. was purified using ammonium sulfate fractionation and chromatography on Sephadex G-100. The enzyme kinetics was characterized using L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) as substrate. The results show that benzaldehyde, p- hydroxybenzaldehyde, p-chlorobenzaldehyde, and p-cyanobenzaldehyde can inhibit the PPO activity for the oxidation of L-DOPA. The inhibitor concentration leading to 50% activity lost, IC50, was esti- mated to be 5.90, 5.62, 2.83, and 2.91 mmol/L for the four tested inhibitors, respectively. Kinetic analy- ses show that the inhibitory effects of these compounds are reversible. Benzaldehyde, p- hydroxybenzaldehyde, and p-chlorobenzaldehyde are noncompetitive inhibitors while p-cyano- benzaldehyde is a mixed-type inhibitor. The inhibition constants were determined for all four inhibitors. p-chlorobenzaldehyde and p-cyanobenzaldehyde were more potent inhibitors than the other com- pounds. These results provide a basis for developing PPO inhibition-based pesticides.     

黄花梨多酚氧化酶特性及防褐变处理

从黄花梨中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究.以邻苯二酚为底物采用分光光度法测定了不同pH值、温度、底物浓度、酶浓度及抑制剂对PPO活性影响.结果表明:黄花梨PPO具有同工酶.黄花梨PPO的最适pH值为6.0,最适温度为25℃,并在此基础上考察了抗坏血酸、柠檬酸、亚硫酸氢钠和L-半胱氨酸对PPO的褐变抑制效果.     

联苯基甲醛与联苯基甲酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

报道了联苯基甲醛与联苯基甲酸对蘑菇酪氨酸酶的抑制效应.研究结果表明:联苯基甲醛与联苯基甲酸对蘑菇酪氨酸酶均有明显的抑制作用,导致酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为86.5和860.0mmol/L,前者的抑制作用强度是后者的10倍.这两种抑制剂对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用均表现为可逆过程,联苯基甲醛对酶的抑制作用为非竞争性,而联苯基甲酸是混合型.本文进一步测定它们的抑制常数KI和KIS,并加以比较.     

苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力的抑制作用

酪氨酸酶(EC 1.14. 18.1)是生物黑色索形成的关键酶.该酶抑制剂在果蔬防褐变保鲜中具有重要的应用前景.在筛选酪氨酸酶活力抑制剂过程中,发现苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶活力有明显的抑制作用,对蘑菇防止褐变具有较好的保鲜效果.报道了苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶单酚酶活力和二酚酶活力的影响和抑制作用.结果表明,苯丙酸对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的效应不仅降低了酶促反应的稳定态活性,也延长了酶促反应的迟滞时间,并具有浓度依赖关系.当苯丙酸浓度达10.0 mmol/L时,稳定态活力下降2/3,迟滞时间从100 s延长到140 s;苯丙酸对二酚酶活力的抑制也显爪浓度效应,抑制效果更为显著,引起酶活力下降50％的抑制剂浓度(IC50)为2.05 mmol/L,苯丙酸对二酚酶活力的抑制显示可逆的效应,抑制类型为混合型,抑制常数(KI和KIS)分别为1.570和3.070 mmol/L.     

桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

研究桑黄素(Morin)对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制效应的结果表明:桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用;导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.08和1.02 mmol/L;桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,0.175 mmol/L桑黄素使得单酚酶的迟滞时间从24 s延长到362 s,迟滞时间增加了14倍,酶的稳态活力下降了61.9%;桑黄素对二酚酶的抑制作用表现为竞争性可逆抑制作用,抑制常数为0.55 mmol/L.     

李多酚氧化酶酶学特性的研究

采用分光光度法,研究了李多酚氧化酶（PPO）的特性,包括不同温度、pH值、底物浓度和抑制剂对PPO活性的影响,以及PPO的热稳定性。结果表明：李PPO的最适酶促反应温度为30℃;最适pH值为5．5;Km为123mmol／L;Vm为0．522△OD／min;90℃热处理2min可钝化PPO的活性;抗坏血酸和亚硫酸钠为强抑制剂,质量分数为189mg／kg的亚硫酸钠和317mg／kg的抗坏血酸能有效抑制PPO的活性。     

氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

选用L Ala、L Val、L Leu等15种氨基酸为效应物,研究它们对杂色鲍(Haliotisdiversicolor)碱性磷酸酶(EC.3.1.3.1)催化pNPP水解反应的影响.结果表明:上述这些氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶均有一定程度的抑制作用,抑制程度随着试剂浓度增大而加剧.当浓度为10.0mmol/L时,分别可以使酶活力下降:7.77%、36.75%、22.79%、39.86%、16.16%、19.33%、94.77%、20.19%、17.02%、40.15%、31.08%、17.52%、30.56%、36.77%和12.59%.尤其以L Cys对酶的抑制作用最为显著(抑制率为94.77%),其次是L Ile和L His,它们均能使酶活力下降40%;对酶抑制率在30%以上的氨基酸还有L Val、L Trp、L Phe和L Lys,其它选用的氨基酸对酶的抑制率小于25%.选择对杂色鲍ALP具有较明显的抑制作用的氨基酸L Val、L Ile、L Trp和L Cys等氨基酸为研究对象,研究它们对酶催化pNPP水解反应的抑制作用机理,并测定其抑制常数.结果表明L Cys的抑制作用为混合型效应,其KI和KIS值分别为0.042mmol/L和0.139mmol/L;而L Val、L Ile、L Trp为反竞争性,其KIS分别为9.56、8.55、8.09mmol/L.     

几种抗氧化剂对脂质过氧化的抑制作用

以大鼠肝微粒体为材料检测了几种常用抗氧化剂对由Fe^2＋／Vc启动的脂质过氧化的抑制作用．各化合物的抗氧化作用都呈浓度依赖关系．以半抑制浓度表示其抗氧化作用．结果表明，抗氧化作用由强到弱的次序为槲皮素〉BHT〉Trolox〉芦丁〉焦性没食子酸〉硫脲〉亚硒酸钠〉Vc〉甘露醇．     

没食子酸衍生物对蘑菇酪氨酸酶的抑制机理

蘑菇褐变过程主要是由于其酪氨酸酶的催化作用引起的，寻找该酶抑制剂在食品保鲜和储藏中的应用具有重要的意义．作者在实验中，发现没食子酸十二烷基酯和没食子酸香叶酯对蘑菇酪氨酸酶有较强的抑制作用，测定它们抑制蘑菇酪氨酸酶二酚酶的酶活力下降50％的抑制剂浓度（IC50）分别为1．55和0．25mmol／L．显示没食子酸香叶酯的抑制作用强度是没食子酸十二烷基酯的6倍．研究了这两种抑制剂对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用动力学，结果表明：没食子酸十二烷基酯和没食子酸香叶酯对酶的抑制作用均表现为可逆反应，前者为反竞争性，其抑制常数KIS为0．636mmol／L；而后者为混合型，抑制常数KI和KIS分别为0．133和0．453mmol／L．