三氧化二砷联合Trolox对人早幼粒白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响

利用MTT法、台盼蓝排染法、Hoechst33258荧光染色法、瑞氏-姬姆萨染色法以及单细胞凝胶电泳法检测了三氧化二砷(As2O3)单独作用及联合Trolox后对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、凋亡诱导作用及其DNA损伤作用.结果表明,1μmol.L-1As2O3作用即可抑制HL-60细胞的增殖,联合100μmol.L-1Trolox对HL-60细胞增殖抑制作用较As2O3单独作用时明显增强.高浓度的As2O3(4μmol.L-1)作用24h可引起HL-60细胞的凋亡,与Trolox联合作用,在低浓度(1μmol.L-1)下即可引起细胞凋亡.联合100μmol.L-1Trolox可以显著增强As2O3引起的HL-60细胞的DNA损伤.这种损伤可能导致细胞周期阻滞,从而在生长曲线中体现出对HL-60细胞的增殖抑制作用.     

二烯丙基二硫诱导人白血病细胞系HL-60细胞凋亡的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人急性髓性白血病细胞系HL-60细胞凋亡和对细胞周期的影响。方法采用MTT、流式细胞仪等方法检测DADS对HL-60的增殖抑制,诱导凋亡以及细胞周期分布的影响。结果20μΜDADS作用HL-60细胞48h,MTT显示DADS对HL-60细胞有明显的抑制增殖作用;流式细胞仪分析结果显示DADS对HL-60细胞有明显的G2/M期阻滞作用;用丫啶橙染色法观察到不同阶段的凋亡细胞形态学改变,且DADS呈时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡。结论DADS引起HL-60细胞G2/M期阻滞并诱导凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一。     

Wangzaozin A调节NADPH氧化酶源性活性氧诱导HL-60细胞分化

利用台盼蓝排染法、吉姆萨染色及流式细胞术对对映-贝壳杉烷二萜wangzaozin A影响人早幼粒白血病细胞HL-60生长、细胞形态、NBT还原能力、细胞吞噬及细胞表面抗原CD11b表达进行了检测.结果显示,0.2~0.8μmol/L wangzaozin A抑制HL-60细胞生长,0.6和0.8μmol/L处理组细胞显示了明显的G1期周期阻滞.随着wangzaozin A浓度升高及处理时间延长,细胞核质比减小,肾形核、杆状核和分叶核细胞增多及胞质中颗粒状物质增加;同时,细胞NBT还原能力、吞噬能力及细胞表面抗原CD11b表达显著增强,表明wangzaozin A可诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化.进一步利用荧光探针DCF检测显示0.6和0.8μmol/L wangzaozin A处理细胞12h后细胞内ROS显著升高;抗氧化剂NAC及NADPH氧化酶抑制剂APO显著抑制wangzaozin A诱导HL-60细胞上调CD11b表达,表明wangzaozin A可通过上调NADPH氧化酶源性的活性氧浓度诱导HL-60细胞分化.     

异叶败酱中三萜化合物常春藤皂苷元对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用

利用倒置显微镜观察法、台盼蓝排染法、Hoechst33258荧光染色法、DNA ladder电泳以及流式细胞分析技术,检测了从甘肃产异叶败酱(Patrinia heterophylla Bunge.)中分离得到的三萜化合物常春藤皂苷元(HG)对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用.结果表明,常春藤皂苷元在较低浓度(10～40 μmol·L-1)条件下,时HL-60细胞增殖具有良好的抑制作用;在较高浓度(40～50μmol·L-1)条件下,对HL-60细胞具有致死作用;同时,常眷藤皂苷元对HL-60细胞的G1期阻滞和凋亡诱导作用极可能是其实现增殖抑制和致死作用的主要途径.     

11-羰基-β-乙酰乳香酸诱导HL-60细胞凋亡

目的:探讨11-羰基-β-乙酰乳香酸(AKBA)对人类髓系白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响。方法:不同质量浓度和时间的AKBA处理HL-60细胞后,采用琼脂糖凝胶电泳技术检测凋亡带;采用Hochest33342染色观察细胞的形态学变化;Annexin-V-FITC/PI双染法及流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:一定质量浓度的AKBA作用于HL-60细胞即可观察到细胞出现凋亡的形态学改变,DNA凝胶电泳出现了凋亡特征性的DNA小分子降解片段带,流式细胞仪检测早期凋亡率最高可达39.49%,总凋亡率可达99.9%,并呈时间和剂量依赖性。结论:AK-BA能诱导HL-60细胞凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。     

熊果酸抑制脂肪酸合酶及诱导HepG2细胞凋亡机制研究

采用MTT法检测发现熊果酸引起肝癌细胞HepG2活性下降的半抑制浓度IC50为68.23μmol.L-1,通过Hoechst 33258染色法检测得出熊果酸诱导HepG2细胞的凋亡,其作用强度呈药物浓度依赖性.在HepG2细胞培养过程中,加入熊果酸后细胞内脂肪酸合成酶（FAS）的表达量及活性降低.在培养基中添加棕榈酸钠可以在一定程度上补救熊果酸引起的HepG2细胞凋亡.推论熊果酸下调FAS的表达影响了脂肪酸合成,肿瘤细胞缺乏正常代谢所需要的能量及原料,导致肿瘤细胞凋亡.     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60/ADR凋亡的研究

目的 研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60/ADR的抑制作用及其机制.方法 采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的抑制作用.采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 (1)丙戊酸能明显抑制HL-60/ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32.65mg/mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)相当于生药66.44mg/mL.(2)形态学改变呈典型的凋亡特征.(3)丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60/ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性.结论 丙戊酸对多药耐药细胞HL-60/ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一.     

水飞蓟宾通过上调P15~(INK4B)和P21~(WAF1/CIP1)活化JNK诱导人胰腺癌细胞G1期阻滞及细胞凋亡

目的:探讨水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:MTT法和克隆形成抑制实验观察水飞蓟宾对人胰腺癌As PC-1细胞的增殖抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:不同浓度的水飞蓟宾对胰腺癌As PC-1细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应和时间-效应关系(P0.05),水飞蓟宾作用于As PC-1细胞48、72 h的IC50浓度分别为224.20、87.25μmol/L;克隆形成抑制实验显示,随着水飞蓟宾浓度增加,As PC-1细胞克隆形成逐渐减少.细胞周期检测结果显示,随着水飞蓟宾浓度的增加,胰腺癌As PC-1细胞出现明显G1期阻滞;水飞蓟宾处理组细胞的周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E2、Cyclin A、Cyclin B1表达下降,细胞周期蛋白激酶CDK4、CDK6表达不变,细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制蛋白P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达升高,与流式检测的结果相一致.不同浓度水飞蓟宾作用48 h后,出现明显的凋亡细胞群;同时发现Caspase-9、Caspase-3活化降解,Caspase3下游效应蛋白PARP出现切割条带.JNK蛋白表达增加并磷酸化活化,Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变,BH3-only蛋白Bclxs、Bid、Bim表达增加.结论:水飞蓟宾明显抑制胰腺癌细胞增殖,通过诱导P15INK4B、P21WAF1/CIP1表达阻滞细胞周期在G1期,并通过诱导JNK活化激活线粒体细胞凋亡途径,进而诱导胰腺癌As PC-1细胞凋亡.     

α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中IAPs家族蛋白表达的影响

目的检测α-生育酚琥珀酸酯(-αTOS)对MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖以及细胞中凋亡抑制蛋白家族(IAPs)表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453增殖的抑制作用,细胞分别接种于96孔板后用浓度为51、0、255、0、75、1001、25和150μmol/L的-αTOS处理48 h后检测;细胞经50μmol/L、100μmol/L-αTOS处理122、4、48 h后,用RT-PCR的方法检测细胞内c-IAP1和c-IAP2 mRNA的转录水平;用Western Blot的方法检测c-IAP1和c-IAP2的蛋白质表达水平。结果-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453有显著的增殖抑制作用,并表现为剂量依赖性,-αTOS对MCF7和MDA-MB-453的IC50值(细胞半数死亡的药物浓度)分别为132μmol/L和74μmol/L;RT-PCR结果显示,-αTOS使两个细胞系的c-IAP1的转录水平显著下降,且呈时间依赖性;但对c-IAP2的转录水平没有明显影响;Western Blot的结果发现-αTOS使得这两种细胞系的c-IAP1蛋白质翻译水平也呈下降趋势,该结果与mRNA转录水平下降相一致,对c-IAP2蛋白质的表达几乎无影响。因此,α-TOS可能通过抑制c-IAP1蛋白的表达而抑制MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞的生长增值,a-TOS有望开发成为新的预防和治疗乳腺癌的有效药物。     

丙戊酸诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的研究丙戊酸对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜技术观察细胞形态结构的改变,利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果（1）丙戊酸能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长,药物浓度相当于生药32．65mg／mL时,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度0c．50）相当于生药66．44mg／mL。（2）形态学改变呈典型的凋亡特征。（3）丙戊酸能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡,凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论丙戊酸对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用,诱导其凋亡是其机制之一。     

去甲斑蝥素抑制胃癌MGC-803细胞生长并诱导其凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:噻唑蓝（MTT）法及克隆形成抑制实验观察去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,碘化丙锭（propidium iodide,PI）单染色检测细胞周期改变,膜连蛋白-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC/PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素作用MGC-803细胞后,不同浓度的去甲斑蝥素对胃癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系（P<0.05）,去甲斑蝥素作用于胃癌MGC-803细胞48 h和72 h的IC₅₀浓度分别为69.92μmol/L和31.27μmol/L;与对照组相比随着去甲斑蝥素的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;细胞周期检测结果显示,随着去甲斑蝥素浓度的增加,胃癌MGC-803细胞出现明显G2/M期阻滞;不同浓度去甲斑蝥素作用后,出现明显的凋亡细胞群;Western blotting检测结果显示,去甲斑蝥素处理组细胞的Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变。Casepase-9、Caspase-3活化降解,PARP蛋白出现切割条带。结论:去甲斑蝥素能够抑制胃癌MGC-803细胞生长,使细胞周期抑制在G2/M期,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞发生凋亡。     

岩藻甾醇诱导人早幼粒白血病HL -60细胞凋亡

研究岩藻甾醇对人早幼粒白血病HL - 60细胞的生长及细胞凋亡的影响.采用MTT比色法测岩藻甾醇对HL - 60细胞增殖的抑制作用;用Hoechst33258染液染色,在荧光显微镜下观察细胞形态学改变;采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞的凋亡率;比色法检测caspase -9,caspase -3活性.岩藻甾醇能抑制...     

中华补血草多酚诱导白血病细胞HL-60凋亡的研究

采用MTT法研究了中华补血草根多酚提取物对HL-60细胞的抑增殖效果;AO/EB染色、DNA片段化检测和Annexin V-FITC流式细胞术等方法检测了多酚提取物对HL-60细胞诱导凋亡结果.Western blotting检测HL-60细胞株中Bcl-2、Bax蛋白的表达量.结果表明,中华补血草多酚能明显抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60细胞凋亡并具有质量浓度依赖性;Western blotting检测经药物处理的细胞内Bax蛋白显著升高,而Bcl-2蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05),其凋亡机制可能与下调Bcl-2蛋白、上调Bax蛋白表达量相关.     

候选药物TW918对K-Ras突变型人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用

探讨候选药物TW918对K-Ras突变型人肺腺癌A549细胞的体外抑制作用.以MTT法检测TW918对A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测A549细胞周期和凋亡的变化;Western blotting 检测相关蛋白的表达.结果表明:候选药物TW918可以以时间和剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖,且作用72 h时抑制效果比吉非替尼高9.93倍;引起细胞周期阻滞于G1期,并诱导细胞发生凋亡;降低A549细胞中p-EGFR的表达,并抑制其下游PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活.TW918对K-Ra     

羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA对鼠胶质瘤C6细胞的促凋亡效应

目的探讨羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA对鼠胶质瘤C6细胞的促凋亡作用,并探讨相关机制.方法羟基磷灰石纳米粒子包被的Stat3 shRNA转染到C6胶质瘤细胞内,MTT法检测细胞增殖情况,应用流式细胞术及吖啶橙染色观察细胞周期分布及凋亡情况,TUNEL染色观察细胞的凋亡及增殖情况.结果羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA转染C6细胞后,呈时间依赖性抑制C6细胞生长和增殖.通过流式细胞术检测证实:该质粒可使细胞阻滞在细胞周期的G0/G1期,细胞凋亡率明显增加(P<0.05),与对照组比较差异有统计学意义;吖啶橙及TUNEL染色发现其明显促进细胞凋亡(P<0.05),与对照组比较差异有统计学意义;结论羟基磷灰石纳米粒子运载Stat3 shRNA体外可明显抑制胶质瘤C6细胞增殖,并促进其凋亡,是治疗胶质瘤较理想的方法.     

依地福新抑制Jurkat细胞生长机制的研究

目的观察依地福新对体外培养的Jurkat细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V—FITC染色法检测细胞凋亡率。结果不同浓度依地福新处理Jurkat细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈现浓度及时间依赖性;1．0μmol／L、5．0ymol／L、10．0μmol／L依地福新处理72h后,Jurkat细胞G0／G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低（P〈0．01）;各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P〈0．01）。结论依地福新对Jurkat细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

虫草菌提取物对HL-60细胞的抑制作用及G2/M期阻滞的诱导

对人工培养的虫草菌菌丝体提取物进行了体外抗肿瘤活性及其作用机理的研究．依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醇和水提取人工培养的虫草菌菌丝体，分别得到石油醚、乙酸乙酯、乙醇和水提取物．采用MTT比色法检测发现乙酸乙酯提取物显著抑制类前骨髓白血病细胞HL-60的增殖活性，半数抑制质量浓度（IC50）约为25μg／mL．并采用流式细胞术和Western blotting等方法进一步研究虫草菌乙酸乙酯提取物抑制HL-60细胞生长的作用机理．用流式细胞仪检测HL-60细胞DNA含量发现，25μg／mL虫草菌乙酸乙酯提取物作用12～2Ah后，S期细胞减少，而G2／M期细胞增多，表明细胞周期中G2／M检验点被阻滞．Western blotting分析结果表明，在虫草菌乙酸乙酯提取物作用后，HL-60细胞中G2／M检验点相关周期蛋白p34^cdc2表达量降低．     

来氟米特对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响

为了研究来氟米特(LEF)对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响,采用前列腺癌细胞株PC3与不同浓度的来氟米特(0,50,100,150μmol·L~(-1))共培养(24,48,72 h),通过CCK-8细胞活力检测实验和克隆形成实验,发现来氟米特抑制PC3细胞增殖,且存在明显的浓度时间依赖性;流式细胞检测表明,来氟米特使PC3细胞发生S期阻滞,并且促进其凋亡;当来氟米特浓度≥150μmol·L~(-1)时,Western Blot实验检测到Caspase-3蛋白发生剪切活化.来氟米特处理可诱导PC3细胞自噬,采用羟氯喹抑制自噬可促进细胞凋亡的发生,提示自噬增强了细胞抗凋亡能力.研究表明,来氟米特可抑制PC3细胞的增殖,诱导其凋亡,可能对前列腺癌有潜在的治疗作用.     

氧氟沙星对人角膜上皮细胞的毒性作用及其细胞与分子机理研究

以非转染人角膜上皮(HCEP)细胞系为体外实验模型,研究了眼科常用抗生素药物氧氟沙星(ofloxacin,OFX)的细胞毒性及其细胞与分子机理。体外培养的HCEP细胞用不同浓度OFX处理后,分别利用光镜和M TT方法测定细胞病变效应和细胞活力,用流式细胞术、吖啶橙/溴化乙锭双染色、DNA凝胶电泳和透射电镜检测细胞周期阻滞和细胞凋亡,使用ELISA、Western杂交和流式细胞术鉴定胱天蛋白酶的激活、胞质中线粒体特有凋亡激活蛋白的含量和线粒体跨膜电位(MTP)的崩解。结果显示,OFX在质量浓度大于0.375 g/L时,可剂量和时间依赖性地引起HCEP细胞出现细胞病变效应、活力下降和质膜通透性升高,并引起细胞周期阻滞在S期,磷脂酰丝氨酸外翻,DNA断片化,凋亡小体形成,胱天蛋白酶-2、-9和-3的激活,胞质中细胞色素c和凋亡诱导因子含量的上调,以及MTP崩解。可见,OFX在质量浓度为其临床治疗质量浓度的1/8以上时,能通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡对HCEP细胞产生显著细胞毒性,其凋亡诱导作用要受到死亡受体介导的线粒体依赖性信号途径的调控。     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.