北冬虫夏草多肽分离纯化及活性研究

目的对北冬虫夏草活性多肽进行分离纯化,并测定其抗氧化活性.方法优选北冬虫夏草多肽的提取方法;通过体外抗氧化DPPH清除率测定北冬虫夏草多肽的抗氧化活性;通过大孔树脂HP-20对北冬虫夏草多肽产物进行分离纯化,并分别测定洗脱后各浓度产物的蛋白含量和抗氧化活性,经Tricine-SDS-PAGE电泳法初步鉴定北冬虫夏草中多肽的分子量.结果 Tris-HCl作为提取液时DPPH清除率最高可达88.68%;经大孔树脂HP-20洗脱并分离纯化后,25%浓度的乙醇溶液和去离子水可作为洗脱剂; Tricine-SDS-PAGE结果显示:北冬虫夏草中富含小分子肽.结论此研究确定了北冬虫夏草多肽的最佳提取工艺,提高了初步提取多肽的产量;北冬虫夏草中的多肽具有一定的抗氧化活性.     

梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响

目的探讨3种不同提取方法的梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞生物学活性的影响.方法分别采用匀浆法、匀浆裂解法、匀浆超声法在新鲜梅花鹿茸中提取梅花鹿茸多肽(velvet antler polypeptiddes,VAP),用BCA法对梅花鹿茸多肽蛋白质浓度进行分析,培养MC3T3-E1细胞,采用MTT法检测3种提取方法获得的梅花鹿茸多肽对细胞增殖率的影响,利用茜素红染色对MC3T3-E1细胞进行矿化定量测定.结果匀浆法多肽得率9.08%;匀浆裂解法多肽得率15.56%;匀浆超声法多肽得率13.38%;鹿茸多肽能明显促进MC3T3-E1细胞的增殖,并且匀浆超声法的增殖作用最强.钙沉积物的比较表明:与对照组比较,匀浆法、匀浆裂解法和匀浆超声法对MC3T3-E1细胞中的矿化现象呈现递增趋势.结论 3种提取方法综合比较,采用匀浆超声破碎方法提取梅花鹿茸多肽,不仅可以节约时间,而且提高了梅花鹿茸多肽的提取量,是较为理想的鹿茸多肽提取方式,并且能明显地促进MC3T3-E1细胞的增殖和矿化.     

黑藻多糖的提取、纯化与组成研究

通过正交实验研究黑藻中多糖的提取方法,并对其纯化鉴定.用热水提取黑藻多糖,经乙醇沉淀,活性碳脱色,Sevage法去蛋白,DEAE-Cellulose离子交换和Sephadex G-25柱层析纯化,电泳鉴定纯度和纸层析分析其组成.最佳提取条件为80℃,20倍体积的水,提取3 h,所得多糖电泳为单一组分,层析证明由D-葡萄糖和D-半乳糖构成.     

巴戟天多糖的分离与纯化新方法

以巴戟天(Morinda officinalis How) 为原料,运用多种理化方法,提取纯化巴戟天粗多糖,经红外吸收光谱比较和鉴定确认提取物中有多糖特征吸收.采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以多糖的纯度和提取率为主要指标,对提取方法进行优化.结果表明,用乙醇-水提取法进行提取,用Sevag法除蛋白,氯化十六烷基吡啶(CPC)结合醇沉法进行纯化.正交实验结果表明提取纯化巴戟多糖最隹条件是乙醇浓度为85%,CPC浓度为0.4%,粗多糖浓度为10%的条件下,纯化多糖的纯度为89.7%,多糖的提取率为10.2%.     

人参多肽的分离纯化

运用生物化学的技术和方法,以人参为原料,经乙醇提取后,采用大孔吸附树脂、离子交换、凝胶过滤等层析技术,分离纯化出一种人参多肽,经过HPLC鉴定其纯度为95%以上,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量为3.5 KD到10 KD之间.     

鼠妇富含蛋白多肽提取物的镇痛作用研究

采用蛋白酶法与酸碱法提取鼠妇蛋白多肽成分,利用化学刺激和热刺激法观察提取物对小鼠的镇痛作用,同时测定小鼠脑组织中的去甲肾上腺素(NE),多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)水平.以蛋白多肽中氨基酸种类,尤其是兴奋性氨基酸天门冬氨酸和谷氨酸,抑制性氨基酸甘氨酸和γ-氨基丁酸的质量分数为指标,醋酸扭体次数抑制率和热板实验痛阈值为镇痛活性指标,对两种提取方法进行比较并且初步研究镇痛作用机理,结果表明酸碱法制备的富含蛋白多肽的鼠妇提取物镇痛效果优于酶法,该提取物能明显提高小鼠醋酸扭体次数抑制率与热板实验痛阈值,且能明显提高小鼠脑内NE,DA和5-HT质量分数水平.酸碱法提取蛋白多肽对小鼠具有明显的镇痛作用,其镇痛作用可能与脑内的单胺递质类5-HT有关.     

毛樱桃果肉总黄酮最佳提取纯化工艺设计研究

目的探讨毛樱桃果肉总黄酮的最佳提取纯化条件,并验证所得产物的性质及活性.方法采取联合提取纯化法分离毛樱桃果肉总黄酮;采用红外光谱鉴定提取物的性质,并用小鼠足肿胀实验验证所得产物的生物学活性.结果联合提取纯化法所得产物得率较高,折合生药量平均达到0.833%,经红外光谱检测所得提取物与芦丁标准品有较高的一致性;小鼠足肿胀实验显示:所得产物抗炎活性显著,且呈剂量依赖性.结论联合提取纯化法具有较强的统一性,可使分离纯化更加协调有序地进行,节约时间,提高效率,该法所得毛樱桃果肉总黄酮具有较高的得率和纯度,产物品质和生物学活性良好,可推广利用.     

家蝇幼虫抗菌物质的诱导及抗菌活性研究

针刺家蝇三龄幼虫诱导其体内产生抗菌物质,利用乙酸铵和硫酸铵盐析方法提取纯化家蝇三龄幼虫体内产生的抗菌物质,并进行抗菌实验,通过测量其抑菌圈的大小来确定其抑菌能力的强弱。实验结果显示:家蝇三龄幼虫经针刺诱导后能产生抗菌物质;经初步鉴定该抗菌物质为蛋白质或多肽,且具有热稳定性。     

从吉林林蛙干皮中提取抗菌肽

从吉林林蛙干皮中分离提取了具有广谱抗菌作用的多肽 ,制备得到抗菌肽样品。在实验中摸索出提取抗菌肽的最佳工艺路线 ,建立了抗菌肽的纯化方法 ,并对所得到的抗菌肽的氨基酸进行组成分析     

R-藻红蛋白的提取方法的比较研究

R-藻红蛋白的提取是其分离纯化的重要前提.因此,选择适合的提取方法是较为关键的步骤.以坛紫菜藻为材料,分别采用反复冻融法、液氮研磨法、细胞溶胀法、低浓度CaCl2提取法、SDS溶液提取法、纤维素酶提取法和超声波破碎法提取R-藻红蛋白,以期确定最佳的提取方法.研究结果表明:在反复冻融法中,以磷酸盐缓冲液为提取液,冷冻2 ...     

两种质粒DNA纯化方法的比较

质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,在基因构建中常被用作基因的载体,实验中经常使用碱裂解法提取质粒.本实验对应用经典纯化方法和离心柱吸附纯化方法提取的质粒进行了对比,结果表明,离心柱吸附纯化方法提取质粒更快捷、更高效,是质粒提取的最理想方法.     

蜈蚣粗毒中多肽毒素组分生理活性初步分析

几乎所有蜈蚣都是肉食动物,都依靠其毒液来捕杀和消化猎物,蜈蚣粗毒为混合物,其主要成分为蛋白质.本文以蜈蚣粗毒为原料,通过反相高效液相色谱进行分离纯化,将纯化产物进行MALDI-TOF-MS鉴定,发现蜈蚣粗毒中具有多肽组分.收集多肽组分在DRG细胞上进行全细胞膜片钳电生理实验研究,发现其中4个组分具有抑制电压门控钠通道电流活性、4个组分具有抑制电压门控钾通道电流活性.表明蜈蚣毒素具有很好的开发应用前景,为后续工作打下了良好的实验基础.     

狗小肠新生物活性肽的分离纯化及结构测定

研究了一种新的胃肠肽的分离纯化及其部分氨基酸序列测定．沸水处理后的狗小肠经醋酸提取、海藻酸吸附、盐酸洗脱、氯化钠盐析和乙醇沉淀，再经Sephadex G-25（fine）层析和两次RP-HPLC分离，从中纯化出一个热稳定多肽．用Tris-Tricine-SDS-PAGE鉴定其相对分子质量约为4 kD．该肽经胰酶水解，产物片断经RP-HPLC分离后，取其中之一主峰经CapLC-ESI-MS-MS（Q-TOF2）质谱仪测定氨基酸顺序为：T-E-Y-T-A-L-N-V-L-A-T-T-E-E-N-G．蛋白质数据库（Gen Bank和SWISS-PROT）查寻证明：此肽为首次发现的新多肽，正在进一步研究其生物学功能．     

鸡腿菇子实体多糖分离纯化和光谱分析

从鸡腿菇子实体中提取纯化多糖,鉴定其纯度并测定其结构.利用水浴浸提、乙醇沉淀多糖、TCA法去除蛋白质等工艺提取粗多糖;将得到的粗多糖通过DEAE-52柱层析和Sephadex G-200柱层析进行分离纯化,收集得到4个糖组分Ccp-Ⅰ-A、Ccp-Ⅰ-B、Ccp-Ⅱ-C和Ccp-Ⅱ-D;采用紫外分光光度计、红外光谱仪对多糖结构进行初步的光谱分析.     

石油醚、乙酸乙酯预处理在金银花绿原酸萃取中的应用研究

金银花为忍冬科植物，忍冬的花蕾或初开的花，是我国传统名贵中草药和花代茶，其主要有效成分为绿原酸．含量高达3％～5％，是工业化萃取天然绿原酸的主要原料之一。目前国内研究金银花中绿原酸提取纯化技术的机构和人员很多．提取方法归纳起来多为煎煮法、浸渍法、同流法；分离纯化有沉淀法、萃取法、大孔树脂吸附法和层析法等。各种提取和纯化方法各有优劣，     

从槐米中提取槲皮素方法的研究

为了寻找高效节能的提取纯化槲皮素的方法，采用碱溶酸沉法提取芦丁，再进行酸水解得到槲皮素，经理化方法、薄层层析方法进行鉴定、HPLC进行测定含量。通过实验对从槐米中提取芦丁的工艺进行了研究，得到了较佳的提取工艺条件，所得槲皮素的纯度达到95％以上。由此可知：碱溶酸沉法提取芦丁，再酸水解得到槲皮素的方法可得到高纯度的槲皮素。     

啤酒废酵母自溶提取物的制备及抗氧化活性研究

废啤酒酵母具有较高的开发利用价值，本研究以啤酒厂废酵母为材料，通过单因素实验研究其最佳自溶条件及最佳微波水解条件，比较自溶、微波水解与外加酶制剂处理法制备酵母活性多肽的效果，并研究了酵母多肽的抗氧化活性.结果表明，啤酒酵母的最佳自溶条件为固液比1: 20、温度45.0 ℃、pH 6.0、时间48 h；在此自溶条件下，酵母蛋白质被有效水解为多肽，水解度为41.5%，提取蛋白质得率为42%.自溶法制备啤酒酵母多肽的效率与外加酶制剂处理的效果相当，但显著高于微波水解法.自溶法制备的啤酒酵母多肽具有高的抗氧化活性.本研究表明，自溶法是开发利用啤酒厂废弃的酵母和制备酵母多肽的理想方法.     

抗肺炎链球菌工程多肽的制备研究

目的:制备和纯化抗肺炎链球茵工程多肽(Ph-SP).方法:将重组质粒转化入工程茵TGl表达工程多肽,经透析、离子交换柱纯化后,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白,微平板法测定蛋白浓度.结果:经透析、离子交换柱纯化后可获得较为单一的目的蛋白,蛋白浓度为0.18mg/ml.结论:本文的操作流程可以获得相对单一的目的蛋白.     

宣威火腿中抗菌肽的分离、纯化及鉴定

为探究干腌火腿中生物活性多肽的抗菌活性及其组成,选取产自中国云南省曲靖地区的宣威火腿为材料,通过缓冲液浸提的方法提取火腿中的多肽成分。以粗提多肽对单增李斯特菌和O157型大肠杆菌的生长抑制情况为指标进行抗菌性评价,同时结合离子交换色谱、尺寸排阻色谱等技术对宣威火腿粗多肽进行分离与纯化,并选取其中抑菌活性较强的组分进行氨基酸序列测定。抑菌实验发现宣威火腿粗多肽具有显著抑制单增李斯特菌和O157型大肠杆菌生长的效果；经过逐级分离纯化得到的各组分具有不同的抑菌活性。其中组分7活性最强,对大肠杆菌和李斯特菌的抑菌率分别为98%和56%。通过Nano-LC-ESI-MS/MS肽序列鉴定,最终得到抑菌活性较强的多肽序列,分别为QYYNGEEHVRFDSDVGEYR、LRNLPNLEVLDLGTNFI、FASFEAQGALANIAVDK。将鉴定得到的3条多肽化学合成后进行抑菌实验发现,合成多肽均具有较好的抑菌效果,对O157型大肠杆菌的生长抑制效果均显著高于单增李斯特菌。研究结果表明宣威火腿中含有抑菌效果的肽类成分,从而为阐释宣威火腿多肽的功能特征提供理论依据。     

虎纹捕鸟蛛毒素-ILys13突变对生物学活性的影响

从虎纹捕鸟蛛Selenocosmia (Ornithoctonus ) huwena的粗毒中分离纯化出来的虎纹捕鸟蛛毒素-I(HWTX-I)是一种多肽类神经毒素.为了进一步探明其结构与功能的关系,采用以固相多肽合成为核心技术的蛋白质工程方法直接构建了Ala取代Lys13的单残基突变体K13A-HWTX-I,并同时合成了HWTX-I的全序列sHWTX-I作实验对照.合成产物经质谱和序列分析鉴定无误后在含谷胱甘肽的缓冲体系中氧化折叠并用离子交换和RP-HPLC纯化.活性测定结果表明,氧化复性后,sHWTX-I与天然HWTX-I的生物学活性完全相同,而K13A-HWTX-I的生物学活性下降了87%,提示Lys13是与HWTX-I的生物学活性密切相关的重要残基.