小叶薜荔根茎提取物抗α-葡萄糖苷酶及乙酰胆碱酯酶活性研究

以芦丁为标准品测定小叶薜荔根茎提取物中黄酮的含量,利用96微孔板法测定提取物对α-葡萄糖苷酶以及乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制作用。结果表明:小叶薜荔根茎提取物中黄酮质量分数为0.8%~7.1%,提取物对α-葡萄糖苷酶抑制IC50值达到0.018g/L,对AChE抑制IC50值达到0.133g/L。粗提物的总黄酮含量与抗α-葡萄糖苷酶能力之间具有较为明显的相关性。     

大白鼠海马神经元NOS与AChE活性的研究

目的:观察大白鼠海马不同亚区一氧化氮合酶(NOS)与乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性神经元的活性。方法:分别采用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)和乙酰胆碱酯酶(AChE)组织化学方法对大白鼠海马不同亚区NOS和AChE阳性神经元的分布以及活性进行研究。结果:海马不同亚区均含有NOS和AChE阳性神经元,其中CA2区NOS呈强阳性反应,CA3区AChE呈强阳性反应。结论:实验表明,NOS和AChE阳性神经元广泛分布于大白鼠海马不同亚区,为进一步探讨海马的学习记忆功能机制提供了形态学佐证。     

褐飞虱乙酰胆碱酯酶启动子的克隆及表观遗传分析

褐飞虱Nilaparvata lugens是水稻的重要害虫之一.本研究旨在扩增褐飞虱乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)基因的启动子,并从表观遗传学的角度探讨DNA甲基化与褐飞虱生物型进化间的关系.采用染色体步移(genome walking)方法扩增AChE启动子,根据所得启动子序列设计甲基化特异性PCR(MS-PCR)引物和重亚硫酸盐测序法BSP引物,分析褐飞虱生物型Ⅰ和生物型Ⅱ中AChE启动子的甲基化程度,然后利用荧光定量PCR技术检测AChE的表达水平差异.结果表明,扩增得到褐飞虱AChE上游侧翼DNA序列长度为1 919 bp,启动子元件分析显示,AChE启动子区域中有若干与MYB、WRKY、ARE等抗性相关转录因子的结合位点(元件),表明该启动子可能与逆境胁迫相关.基于甲基化水平的限制酶酶切位点分析发现,AChE启动子区域含有多个~(5m)CG甲基化位点,表明该区域DNA甲基化主要发生在胞嘧啶的C-5位.MS-PCR分析表明,生物型Ⅰ褐飞虱AChE启动子区域的甲基化程度高于生物型Ⅱ; BSP结果显示生物型Ⅰ启动子区域总体平均甲基化频率(24. 09%)高于生物型Ⅱ(7. 27%);实时定量PCR结果显示,AChE在生物型Ⅱ中的表达量高于生物型Ⅰ.本研究克隆得到AChE启动子序列,并证实褐飞虱生物型间AChE的表达存在差异,且启动子区域高甲基化水平可能是导致AChE低表达的原因之一.     

人工催产时泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)尾部神经分泌系统单胺荧光和乙酰胆碱酯酶活性的变化

在人工催产过程中,我们用单胺荧光结合乙酰胆碱醋酶(AChE)组化方法对泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)尾部神经分泌系统进行了研究。给泥鳅注射LRH-A(0.05微克/克)12小时后,尾部神经分泌系统中单胺荧光强度明显比催产前增强,但神经分泌细胞的AChE活性却明显降低;当注射LRH-A 24小时和48小时后,单胺荧光强度减弱,而AChE活性却明显增强。     

大鼠在空间辨别性学习记忆时海马CA1,CA3区和DG的ACh能纤维和星形胶质细胞的变化

目的通过建立大鼠空间辨别性学习记忆的动物模型,观察大鼠海马CA1,CA3区和齿状回(DG)的乙酰胆碱(ACh)能纤维密度和含量的变化以及星形胶质细胞的数量及其胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化,从形态学上探讨中枢ACh和星形胶质细胞与空间辨别性学习记忆的关系.方法建立空间辨别性学习记忆的动物模型,采用乙酰胆碱酯酶(AChE)的组织化学染色及GFAP标记星形胶质细胞.并用显微镜方格目测系统和图像分析仪对大鼠海马CA1,CA3区及DG的GFAP免疫阳性星形胶质细胞的数量及其GFAP表达进行检测.结果模型组与对照组相比大鼠各观察部位的AChE阳性纤维的密度和含量均增高,有显著性差异(P<0.05).而空白组和游水组相比大鼠各观察部位的AChE阳性纤维的密度和含量均无显著性差异(P>0.05),模型组内各组间两两比较大鼠各观察部位的AChE阳性纤维的密度和含量均无显著性差异(P>0.05);模型组与对照组相比大鼠各观察部位的星形胶质细胞的数量及其GFAP的表达均增加,有显著性差异(P<0.05).而空白组和游水组相比大鼠各观察部位的星形胶质细胞的数量及其GFAP的表达均无显著性差异(P>0.05),模型组内各组间两两比较大鼠各观察部位的星形胶质细胞的数量及其GFAP的表达均无显著性差异(P>0.05).结论在空间辨别性学习记忆过程中,大鼠各观察部位的AChE阳性纤维的密度和含量增高,说明中枢ACh参与空间辨别性学习记忆过程;在空间辨别性学习记忆过程中,大鼠各观察部位的星形胶质细胞的数量及其GFAP表达的增加,说明星形胶质细胞参与空间辨别性学习记忆过程.     

乙酰胆碱酯酶在拟黑多刺蚁脑部的分布

用组织化学方法研究乙酰胆碱脂酶(Acetylcholine esterase,AChE)在拟黑多刺蚁(Polyrhachisvicina Roger)脑部分布.结果显示,AChE在拟黑多刺蚁脑部分布广泛,主要分布于后脑、咽下神经节、中脑,其次是前脑的中央复合体、视叶、蕈形体冠,前脑的蕈形体柄和叶分布最少;品级间比较显示,工蚁视叶和嗅叶分布较雌蚁和雄蚁的少,雌蚁中央复合体的分布多于其他品级.由该结果推测AChE可能参与拟黑多刺蚁视觉和嗅觉信息传递;根据AChE组织化学在临床上着色判别标准确定蕈形体冠是蕈形体的感觉信息输入区,而草形体的柄和叶是蕈形体的运动信息输出区.     

玻璃纤维素壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶的研究

以玻璃纤维素壳聚糖膜为载体,戊二醛为交联剂,进行乙酰胆碱酯酶(AChE)的固定,并对固定化酶的理化性质进行研究.结果表明,乙酰胆碱酯酶的较佳固定化条件为:150 U/mL AChE液50μL,体积分数为5%的戊二醛溶液50μL,质量分数为1%的BSA100μL,pH值为8.0的0.2 mol/L PBS缓冲液,配制成1 mL酶液,玻璃纤维素壳聚糖膜浸于此酶液4℃固定8 h.固定化酶的最适作用温度37℃,最适pH 8.0,能够重复利用4次以上,表明该固定化酶的稳定性较高.     

3种农药对花鲈抗氧化酶和乙酰胆碱酯酶影响的研究

采用体外方法,研究了敌敌畏(Dichlorvos)、丁硫克百威(Carbosulfan)和氯氰菊酯(Cypermethrin)等3种农药对花鲈(Lateolabraxjaponicus)肌肉中乙酰胆碱酯酶(AChE)和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽转移酶(GST)及超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化酶的急性毒性效应.浓度为50、200、500、1000mg/L的3种农药分别与花鲈肌肉和肝脏匀浆液在25℃孵育0、30、60、90min后,测定各酶的活性.实验结果表明,3种农药对AChE、GPx和GST活性有不同程度的抑制,但对SOD活性无显著影响.     

牛心朴子的杀线虫机理

基于牛心朴子甲醇提取物具有显著的杀线虫活性,本研究测定了该提取物对线虫体内总糖、蛋白含量、保护酶活性、神经靶标酶及解毒酶活性等8项指标的影响.结果表明,牛心朴子甲醇提取物干扰了线虫体内糖和蛋白的代谢,抑制SOD、AChE和GST活性,破坏了线虫保护酶系统及神经系统.这一结果为利用牛心朴子研究和开发植物源杀线虫农药或先导化合物奠定了理论基础.     

加热方式对鸡肉制品不同部位脂质氧化的影响

为探讨鸡肉制品在不同加热方式及冷藏期间的氧化情况,选取黄羽肉鸡的胸肉、腿肉、皮下脂肪为原料,对比3个部位脂肪含量和脂质组成；整鸡分别进行微波、烤制、煮制、蒸制处理,检测其初级代谢产物过氧化值与次级代谢产物丙二醛含量。结果表明:中性脂肪含量在皮下脂肪中含量较高,与腿部、胸部存在明显差异,与磷脂分布规律相反；腿部中的多不饱和脂肪酸与必需脂肪酸含量显著高于其他部位；加工与冷藏显著增加各部位丙二醛的含量。储藏4d,各部位过氧化值先上升后下降,煮制后的胸部、腿部与皮下脂肪氧化速度最快,腿部在烤制后丙二醛增长速度最慢,各加热方式间存在明显差异(P<0.01)。     

Tropic1808基因重组蛋白对损伤坐骨神经脊髓细胞凋亡的影响

探讨Tropic1808基因重组蛋白对损伤坐骨神经的新生大鼠脊髓细胞凋亡影响,将新生SD大鼠一侧坐骨神经切断后,用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧端,海绵内加入Tropic1808基因重组蛋白,阳性用神经生长因子、阴性用生理盐水作为对照;术后3、6、12h经TUNEL法染色,在光镜、电镜和图像分析系统下,了解L4－L5段脊髓细胞凋亡情况。得到生理盐水组的脊髓出现大量绸亡细胞;Tropic1808基因重组蛋白组凋亡细胞数量较生理盐水组显减少;Tropic1808基因重组蛋白组与神经生长因子组之间凋亡细胞数量的差别无显性意义。说明Tropic1808基因重组蛋白有保护受损神经组织,减少细胞凋亡的作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的研究

目的研究局灶性脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及其大鼠脑组织不同时间病理学改变情况.方法随机选取66只成年Wistatr大鼠,按照随机数字法分3组,对照组(假手术组,n=6)、观察1组(脑缺血组,n=24)、观察2组(脑缺血再灌注组,n=36).采用线栓法制造大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,手术后HE染色,并分别采用TUNEL法和电镜观察大鼠缺血灌注损伤后神经元凋亡情况和细胞凋亡形态的变化.结果大鼠缺血再灌注后0~63 h时其神经功能损伤最为严重,伴随时间的延长逐渐能得到轻微缓解和改善,再灌注24 h后神经功能明显好转,之后再次出现加重的趋势.研究发现:再灌注后神经元会出现凋亡,TUNEL阳性细胞集中在灌注后病灶中心的边缘区域以及皮层区.结论线栓法制备动物脑组织缺血灌注模型能有效用于脑组织缺血再灌注后的临床分析,局灶区的神经元以凋亡、坏死为主,其中轻度脑缺血主要以神经凋亡为主,中重度缺血主要以坏死为主.     

羚牛股骨密质骨力学性能的实验研究

为了对国家一级保护动物——羚牛的骨生物力学和临床医学提供必要的骨力学参数,对羚牛新鲜股骨密质骨的拉伸与压缩力学性能进行了实验研究,用光学显微镜和扫描电镜观测了其微观结构,并与同属牛科的家牛进行了比较。实验得到了羚牛新鲜股骨密质骨沿轴向压缩和拉伸弹性模量分别为5.41GPa和0.98GPa,密质骨的力学性能在股骨的不同位置差异不显著。扫描电镜的观察表明:羚牛股骨密质骨在微观结构上是由丛状骨和哈佛氏系统组成的,其中哈佛氏系统沿径向的分布比较平均。     

中蜂(Apis cerana Smith)和意蜂(Apismellifera Linnaeus)乙酰胆碱酯酶(AChE)性质比较研究

试验结果表明,中蜂(Apis cerana Smith)和意蜂(Apis mellifera Linnaeus)的乙酰胆碱酯酶(AchE)对底物乙酰硫代胆碱的反应性质具有明显的不同。中蜂的AchE的反应初速度和反应进程曲线的线性相关时间范围分别是0.027(OD_(412)值/min,0.8头)和0—10分钟,而意蜂则分别为0.012和0—15分钟。米氏常数值和最大反应速度值,中蜂分别为6.25mmol/L和0.105(OD_(412)值/min,0.4头),意蜂分别为0.862和0.015(仅为中蜂的13.8％和14.3％)。中蜂和意蜂AchE对残杀威的双分子速率常数值(K_i),氨基甲酰化常数(K_2)、解离常数(K_d)以及I_(50)值没有明显的差异。但是,对敌百虫的反应确明显不同,K_i、K_2、K_d和I_(50)值分别相差2.70、1.39、1.94和5.64倍。说明中蜂和意蜂AchE对氨基甲酸酯类化合物和有机磷类化合物的反应是不同的。     

乌鳢尾部神经分泌系统组织化学和HRP法研究

采用辣根过氧化物酶(HRP)法结合乙酰胆碱酯酶(AChE)和单胺氧化酶(MAO)组化方法,对乌鳢尾部神经分沁系统进行了研究。结果如下: 1.在尾部脊髓中可以观察到一些HRP标记的神经分泌细胞和HRP标记末梢。有些标记末梢终止于脊髓中央管,少量终止于腹面脊膜。尾垂体中也有许多HRP标记末梢。2.神经分泌细胞细胞体中的HRP颗粒在电镜下呈圆形、短管状和哑铃状。3.神经分泌细胞体显示AChE活性,并定位于核膜、粗面内质网上。4.神经分泌细胞体周围尚显示MAO活性。     

五味子萃取物对去卵巢小鼠行为习得及海马AChE活性的影响

探讨五味子改善去卵巢小鼠学习能力的有效化学部位及相关的作用途径.采用溶剂极性递增法萃取分离五味子的醇提物,小鼠卵巢摘除6周后灌胃同等剂量的五味子萃取物,三等分辐射式迷宫检测小鼠的行为习得能力,并测定小鼠海马乙酰胆碱酯酶的活性.结果显示,去卵巢使小鼠每日的正确反应率和达标率明显降低(P0.05,P0.01),且海马中AChE的活性降低(P0.05);苯甲酸雌二醇、五味子正丁醇萃取物及乙醇萃取物均能明显提高去卵巢小鼠的正确反应率和达标率(P0.05,P0.01),而苯甲酸雌二醇和五味子正丁醇萃取物显著提高去卵巢小鼠海马AChE的活性(P0.05,P0.01),提示五味子正丁醇萃取物及乙醇萃取物均能显著提高去卵巢小鼠的学习能力,其中五味子正丁醇萃取物的功效优于乙醇萃取物,可能是五味子改善学习记忆的主要有效部位,其作用的途径可能与胆碱能神经系统相关.     

景天属三种植物药不同提取部位及总黄酮抗肿瘤作用研究

利用MTT法检测景天属三种植物药垂盆草、佛甲草及凹叶景天的乙酸乙酯和正丁醇提取部位及总黄酮提取物对人肝癌细胞株HepG2、人食管癌细胞株EC109及人结肠癌细胞株SW480的体外增值抑制作用.结果表明,三种植物药的乙酸乙酯和正丁醇提取部位及总黄酮提取物都有显著的抗肿瘤作用,且各植物药总黄酮提取物的抗肿瘤活性最强.     

Nerve growth factor induces adrenergic neuronal differentiation in F9 teratocarcinoma cells

Teratocarcinoma cells have been used as a model to study differentiation and development in vertebrates. Treatment with retinoic acid (RA) and dibutyryl cyclic AMP can in some embryonal carcinoma (EC) cell lines lead to neural differentiation, as judged by neurofilament expression and by the induction of enzymes involved in cholinergic transmission. Short-term culture of F9 line cells with RA and dibutyryl cyclic AMP results in a biochemically demonstrable rise in acetylcholinesterase (AChE) activity. We now report that long-term culture of F9 cells with RA and dibutyryl cyclic AMP induces neurofilament expression, demonstrated by immunofluorescence with specific antibodies. Furthermore, if nerve growth factor (NGF) is also added, the developing neurone-like cells exhibit immunoreactivity to tyrosine hydroxylase, a rate-limiting enzyme of catecholamine synthesis specific for adrenergic neurones. Immunoreactivity for Leu-enkephalin-like peptides is also induced. These results suggest that F9 cells can differentiate into cells with adrenergic characteristics.