东亚钳蝎抗神经兴奋肽在大肠杆菌中的表达

自从 1 96 4年以来Ｍｉｒａｎｄａ等人[1] 报道Ａｎｄｒｏｔｏｎｕｓａｕｓｔｒａｌｉｓ和Ｂｕｔｈｕｓｏｃｃｉｔａｎｕ中的神经毒素 ,蝎毒中一些神经毒素尤其是哺乳动物毒素和昆虫毒素已被广泛研究 .从新鲜蝎毒中制备和纯化天然神经毒素困难重重 ,1 988年Ｃａｒｂｏｎｅｌｌ等人[2 ] 首次由Ｂｕｔｈｕｓｅｕｐｅｕｓ蝎中昆虫神经毒素氨基酸序列推导并化学合成其基因序列 ,且在杆状病毒载体中得到表达 ,自此人们广泛试验将各种属的系列蝎毒素基因重组到大肠杆菌、酵母、杆状病毒、植物等表达载体进行表达 .在中国 ,蝎子及其组织或抽提物被…     

球孢白僵菌工程菌株构建及其环境安全性分析

以球孢白僵菌（Beauveriabassiana）Bb202作为出发菌株,同时引入外源毒力基因,即北非蝎（Androctonusaustralis）昆虫特异性神经毒素多肽基因AalT（GI：69545）,构建高毒力的工程菌株Bb202T-7,并用SPSS软件统计分析,结果显示,Bb202T-7对松墨天牛（Monochamusalternatus）的杀虫效率提高了11．11％。研究目的是为生物防治提供性能良好的出发茵株,为高效杀虫剂的研制提供基础资源,克服真菌杀虫剂击倒昆虫所需时间长,对环境条件要求高等缺点,加速真菌杀虫剂的产业化步伐。同时对基因工程重组菌株的安全性问题进行分析,并提出解决方案。     

抗昆虫蝎毒素多肽的重组表达研究

蝎毒素是蝎子自我防御和捕食的有力工具,属于活性短肽。抗昆虫蝎毒素多肽作用于昆虫细胞膜离子通道,调控通道动力学特性,是潜在的生物杀虫剂,具很高的研究价值。序列比对分析发现,抗昆虫蝎毒素多肽有高保守性,序列同源性达67%,其中有4个保守的半胱氨酸残基,这可能与其抗昆虫作用的结构有关。但天然蝎毒素蛋白获取较困难,致使抗昆虫毒素多肽的结构与功能研究受限,因此,利用基因重组技术获得高纯度高活性重组蝎毒素是有效途径之一。本文综述了抗昆虫蝎毒素多肽外源重组表达的研究现状,旨在更深入全面理解其结构及抗昆虫机理等,以助推后续相关研究。     

东亚钳蝎神经毒素的研究进展

蝎毒中的神经毒素是一类具有特异生物活性的多肽物质。开展对蝎神经毒素的研究是近几年国内外较关注的课题之一。东亚马氏钳蝎（ＢｕｔｈｕｓｍａｒｔｅｎｓｉＫａｒｓｃｈ，ＢｍＫ）是中国分布最广的一种。本文综述了近几年来Ｂｍｋ神经毒素的一级结构研究的一些进展概况     

植物抗虫基因工程研究进展

近年来 ,植物抗虫基因工程研究取得了令人瞩目的成果 .根据植物抗虫基因的来源 ,全面综述了利用Bt毒蛋白基因、蛋白酶抑制基因、外源凝集素基因、昆虫神经毒素基因等开展植物基因工程的研究概况 ,并且就其新进展、出现的问题和解决途径进行了讨论 .     

植物抗虫基因工程研究与应用

近年来,植物抗虫基因工程研究及应用进展喜人.本文综述了利用Bt杀虫蛋白基因、豇豆蛋白酶抑制素基因、昆虫特异性神经毒素基因以及外源凝集素基因等抗虫基因开展植物抗虫基因工程研究的概况,并探讨了植物抗虫基因工程中存在的主要问题及解决的途径.     

马氏正钳蝎β-肌动蛋白基因的克隆与系统进化分析（英文）

蝎子生物学研究主要包括蝎的解剖学,分类学,生物地理学以及与医学相关的毒液生物化学研究。在过去已构建的马氏正钳蝎(又称东亚钳蝎)毒腺c DNA文库的基础上,本研究克隆与鉴定了马氏正钳蝎的全长β-肌动蛋白基因的前体核苷酸序列。马氏正钳蝎全长β-肌动蛋白c DNA由1383个核苷酸组成,包括90个核苷酸5'非翻译区(5'UTR),147个核苷酸3'非翻译区(3'UTR)和1131个核苷酸的开放阅读框(ORF)。该马氏正钳蝎全长β-肌动蛋白前体核苷酸序列是首个从蝎目动物中分离鉴定的β-肌动蛋白c DNA序列。β-肌动蛋白基因系统进化分析显示蝎不仅是蛛形纲的原始类群,而且很可能是节肢动物的原始物种。该研究结果为蝎目的系统进化地位、甲壳-昆虫近缘假说提供了新的分子证据。     

蝎神经毒素与昆虫电压门控钠通道相互分子识别的结构因素研究--设计环保型生物杀虫剂的序章

以蝎神经毒素的应用为例,简要介绍运用现代生物学技术通过解析毒素与靶通道相互分子识别和作用的结构因素,设计高选择性和安全性的环保型生物杀虫剂的一些研究进展,并对其应用前景做些展望.     

两个东亚钳蝎神经毒素cDNA的克隆和序列分析

构建了东亚钳蝎毒腺组织ｃＤＮＡ库，用ＰＣＲ筛选到两个新的神经毒素全长ｃＤＮＡ，其开放阅读框（ＯＲＦ）包括：信号肽、成熟毒素和／或额外氨基酸序列，它们编码的成熟毒分别命名为ＢｍａＴＸ９和ＢｍＩＴ（ｃｐ）２。序列分析表明，ＢｍａＴＸ９为抗哺乳动物神经毒素；ＢｍＩＴ（ｃｐ）２为痉挛型昆虫毒素。章还对东亚钳蝎神经毒素的命名，分类以及进化等问题进行了初步的探讨。     

东亚钳蝎人工饲养的生态特点及养殖技术的初步研究

东亚钳蝎在人工饲养的条件下,明显表现了怕强光、怕强风、怕噪音、喜欢弱光和相互残害的生态特点。蝎子是肉食性动物,我们选取了38种昆虫和26种动物肉进行了饲喂试验,其中有18种昆虫,11种动物肉喜欢吃;18种昆虫,11种动物肉较喜欢吃:有2种昆虫和4种动物肉不喜欢吃。饲养蝎子的方法,包括池养、缸养、盆养及瓶养等。饲养密度每平方米养成蝎500～600条,仔蝎3000～5000条,孕蝎200～300条。蝎子的繁殖为卵胎生,每年产仔一次,平均每只母蝎一胎产仔28.16个。对蝎子的求偶、交配、产仔及母蝎保护仔蝎的行为均作了观察。近几年来,东亚钳蝎生存的自然条件受到破坏,影响了蝎子的繁衍。随着医药业的发展,对中药全蝎的需要量增加,群众大量捕获,致使蝎子种群的生长、繁殖受到干扰,数量大大下降。为此,应加强蝎子自然资源的保护,合理开发利用,发展人工养殖,以满足社会的需要。     

Construction of an improved baculovirus insecticide containing an insect-specific toxin gene

Baculoviruses provide alternatives to chemicals for controlling insect pests and can be applied by spraying. Baculoviruses have a limited host range, but work relatively slowly. They are dissolved in the midgut of insect larvae to release infectious virions which enter gut epithelial cells and begin to replicate. Replication in other organs causes extensive tissue damage and eventually death. This process can take 4-5 days, but in the field may last for more than a week, allowing the larvae to feed for longer and thereby damaging the host plant. Baculovirus expression vectors expressing foreign genes, such as those for insect-specific toxins, hormones or enzymes, might alleviate this problem. We have now constructed a recombinant baculovirus derived from Autographa californica nuclear polyhedrosis virus containing an insect-specific neurotoxin from the venom of the North African (Algerian) scorpion, Androctonus australis Hector. The neurotoxin acts by causing specific modifications to the Na+ conductance of neurons, producing a presynaptic excitatory effect leading to paralysis and death; it has no effect in mice. Expression of the neurotoxin by the virus causes a reduction in the time required to kill the host insect.     

蝎毒素成分、应用价值及其研究进展

对蝎子的分类、蝎毒素的组成成分及其性质、蝎毒素应用价值、蝎毒素研究进展及蝎毒素研究方向四个方面进行了阐述，说明蝎毒素是一种进行分子生物学研究的良好材料。     

A型肉毒杆菌毒素的基因测序与分析

对国内A型肉毒杆菌毒素基因测序,分析了解毒素基因结构并推测其氨基酸序列。提取肉毒杆菌总DNA,利用自行设计的引物对目的基因进行PCR扩增,把目的基因导入E.Coli JM109,筛选含目的基因的阳性克隆菌进行测序和分析,从而了解毒素基因结构并推测其氮基酸序列。对A型肉毒杆菌毒素基因的核苷酸序列成功测序并与GenBank中的相应序列比较,其序列同源性为96％。推测其氨基酸序列同源性为100％。成功地对A型肉毒杆菌毒素的基因进行了测序,这为肉毒杆菌毒素中毒的快速诊断,以及进一步探求以基因工程方法生产此毒素奠定基础。     

Toxin-induced conformational changes in a potassium channel revealed by solid-state NMR

The active site of potassium (K+) channels catalyses the transport of K+ ions across the plasma membrane--similar to the catalytic function of the active site of an enzyme--and is inhibited by toxins from scorpion venom. On the basis of the conserved structures of K+ pore regions and scorpion toxins, detailed structures for the K+ channel-scorpion toxin binding interface have been proposed. In these models and in previous solution-state nuclear magnetic resonance (NMR) studies using detergent-solubilized membrane proteins, scorpion toxins were docked to the extracellular entrance of the K+ channel pore assuming rigid, preformed binding sites. Using high-resolution solid-state NMR spectroscopy, here we show that high-affinity binding of the scorpion toxin kaliotoxin to a chimaeric K+ channel (KcsA-Kv1.3) is associated with significant structural rearrangements in both molecules. Our approach involves a combined analysis of chemical shifts and proton-proton distances and demonstrates that solid-state NMR is a sensitive method for analysing the structure of a membrane protein-inhibitor complex. We propose that structural flexibility of the K+ channel and the toxin represents an important determinant for the high specificity of toxin-K+ channel interactions.     

Molecular evolution of scorpion a-toxins----Accelerated substitutions and functional divergence

Scorpion a-toxins are a family of toxic proteins with similar scaffold, but possess divergent pharmacological properties. Analysis of cDNA sequences reveals that the numbers of nucleotide substitutions per site ( K ) for 5' and 3' UTRs are smaller than those per synonymous site ( Ks) for the mature peptide-coding sequences, whereas the numbers of nucleotide substitutions per nonsynonymous site (-Ka) are close to or larger than Ks values for relevant pairs of cDNAs. These results, together with phylogenetic analysis, indicate that scorpion a-toxins have evolved by accelerated substitutions in the mature toxin regions. In addition, the 15 amino acids, absolutely conserved in all the scorpion a-toxins described so far. are mostly located in molecular interior, which may be involved in structural constraints for stabilizing the CSa(3 fold in evolution of these molecules. Four hot spot mutation sites in the molecular surface are found to distribute in the putative functional regions of a-toxins. suggesting that positive Darwinian selection drives the accelerated evolution of scorpion a-toxins. These findings reasonably explain the relationship between three-dimensional structure conservation and functional divergence of scorpion a-toxins and are of important value in guiding us in our engineering experiments to obtain higher affinity ligands to Na+ channels.     

平颏海蛇毒腺cDNA表达文库的构建

以直接表达载体质粒pc DNA3为载体,成功构建了一个高质量的平颏海蛇毒腺cDNA表达文库,这是国内首个海蛇cDNA文库,通过对亚文库克隆的大规模序列测定和分析,发现了38个海蛇新基因序列,其中包括神经毒素基因,磷酸脂酶A2基因和半胱氨酸丰富毒蛋白基因共10个编码海蛇毒素蛋白的新基因。     

东亚钳蝎蝎毒蛋白的免疫学研究

应用电泳技术和免疫检测技术对我国分布最广、数量最多的东亚钳蝎的蝎毒蛋白进行了试验研究。结果表明：各蛋白组分能够有效地刺激家兔产生特异性抗体。应用琼脂扩散试验、免疫电泳试验、琼脂单相辐射免疫扩散试验、对流免疫电泳试验等试验方法对东亚钳蝎蝎毒进行检测是可行的。本研究可成为快速、灵敏、准确的东亚钳蝎蝎毒蛋白检测技术。     

秦岭蝮蛇毒的急性毒性实验研究

秦岭蝮蛇毒的急性毒性实验研究杨章民，王德林，王子浩，方荣盛（陕西师范大学实验中心陕西师范大学生物学系西安７１００６２１第一作者，男，２８岁，硕士）蜂蛇毒是以血循毒为主的混合毒，其成分非常复杂，为酶类、毒素及非蛋白物质构成的混合物，能够使动物出现一系列...