杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生的扫描电镜观察

利用电子扫描显微镜(SEM)对杂交鹅掌楸体细胞胚胎发生发育途径进行观察研究。结果表明,非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织在表面结构上存在着明显的差异。胚性愈伤组织细胞体积较小,大小均一,多以细胞团形式存在,呈球形;非胚性愈伤组织细胞体积较大,不易成团,细胞之间孔隙较多。胚性细胞迅速增殖,其中一些细胞形成体胚的原始细胞,依次经历球形胚、心形胚、鱼雷胚和子叶胚发育成完整植株,在体胚发育过程当中保持较好的同步性和独立性。杂交鹅掌楸组织培养产生的胚状体具有明显的两极性和相对的独立性,体细胞胚尤其是成熟体胚与愈伤组织结合较松,易自行脱落。     

小麦体细胞胚胎发生过程的研究

以小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ）幼胚愈伤组织为材料，研究了小麦的体细胞胚胎发生过程．切片观察表明：小麦的胚状体发生有两种方式，表面发生和内部发生．胚状体来源于愈伤组织中的单个原始胚性细胞．胚状体的发育经历了单个胚性细胞、胚性细胞团、球形胚、心形胚、成熟胚阶段．木实验支持胚状体单细胞起源的学说．     

PSK对杂交鹅掌楸悬浮培养细胞生长的影响

以杂交鹅掌楸悬浮培养胚性细胞为材料,在培养过程中添加不同浓度的新型植物肽类生长调节物质植物磺肽素(PSK),研究PSK对悬浮细胞生理的影响,分析其在细胞培养中的作用。结果表明:PSK能够促进细胞分裂和增殖,0.8 mg/L的PSK处理后能够使杂交鹅掌楸胚性愈伤组织细胞结构致密、胚性细胞小、直径一致性增加、细胞质变浓,细胞内大量积累淀粉等,同时PSK显著提高了细胞的活力,促进了培养细胞低密度的增殖,并且能够促进蛋白质的积累,有利于杂交鹅掌楸体细胞胚胎的发生。     

小麦体细胞胚胎发生的细胞组织学研究

以小麦的幼穗为外植体，接种于Ｎ６Ｂ５ＭｓＩ培养基上，３０ｄ后可形成大量愈伤组织．该愈伤组织继代１次后即产生淡黄色颗粒状的胚性愈伤组织和白色致密状的非胚性愈伤组织．将此两种愈伤组织分别转入Ｎ６Ｂ５ＭｓⅡ培养基上，２５ｄ后胚性愈伤组织分化形成大量体细胞胚．本实验从外植体接种后的０～２５ｄ及胚性愈伤组织转入Ｎ６Ｂ５ＭｓⅡ培养基后的０～２６ｄ各分期取样固定，切片观察表明：小麦的幼穗诱导体细胞胚亦为间接发生，且多为外起源．但体细胞胚的发生既有来自于单个胚性细胞的，也有可能来自于多个胚性细胞或分生细胞团，经细胞分裂和分化发育而形成体细胞胚     

不同活性炭对杂交鹅掌楸体胚发生的影响

活性炭在体胚发生过程中能够促进细胞的生长及发育。为进一步提高杂交鹅掌楸体胚发生效率,以两个基因型的杂交鹅掌楸愈伤组织为材料,在培养过程中添加磷酸碳、针剂碳和Sigma公司活性炭,通过统计体胚总数及子叶胚数量,测定培养基的pH和渗透压,分析活性炭的吸附性能等,以筛选适合杂交鹅掌楸体胚发生的活性炭类型,并探索不同活性炭影响杂交鹅掌楸体胚发生效率差异的原因。研究结果表明:针剂碳、磷酸碳处理下诱导获得的杂交鹅掌楸体胚总数和子叶胚数显著高于Sigma公司活性炭,且针剂碳的效果最佳。针剂碳的吸附性能适中,添加针剂碳的培养基高压灭菌后其pH和渗透压也适中,说明活性炭的吸附性能会影响培养基的pH和渗透压,从而影响杂交鹅掌楸的体胚发生。     

胡萝卜体细胞胚胎发生 Ⅱ胡萝卜体细胞胚的组织学和细胞起源

通过大量的叶柄外植体培养系统切片观察及悬浮细胞和平板培养证明,胡萝卜体细胞胚一般是由单个胚性细胞分裂经2,3,4细胞的原胚阶段发育为胚状体的,进一步证明了其单细胞的起源。实验中也观察到有由愈伤组织细胞团内部的多个细胞共同形成胚状体的现象,和文献中所述的多细胞起源十分类似。     

石防风胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚的发生

石防风幼苗的根在含0.1-50mg/L 2,4-D的 MS 培养基中能诱导产生愈伤组织,最适浓度为0.5mg/L.愈伤组织来源于中柱内部的细胞。在0.5mg/L2,4-D 存在下,细胞分裂生长并发育至胚性细胞团或原胚,转移至无激素培养基后,愈伤组织表面及内部分化出发育阶段不同的体细胞胚,最后发育成为完整植株。在初生幼苗的胚轴上(有时在根或叶)常有次级胚的发生,它们能继续长成次级苗,并在苗上再次长胚,如此不断,直至多次。由此可见石防风体细胞胚发生的能力,是十分强大的。     

关于虎眼万年青体细胞胚的细胞起源和发育过程的初步研究

本文以虎眼万年青鳞片小切段为外植体，对体细胞胚的发生途径，起源模式及发育过程作了系列切片和扫描电镜观察，结果表明大量体细胞胚直接发生于外植体近轴面的表面细胞或薄壁细胞。有些体细胞胚起源于单细胞，另一些起源于几个细胞构成的胚胎发生单元，但始终未见起源于十多个甚至几十个细胞的细胞学证据。有不少体细胞胚发生于肿块样突起物上，这地局部区域表皮细胞的增生加厚。明显不同于胚性愈伤组织，在胚胎发育过程中胚体侧面     

刺槐不同愈伤组织的酯酶和过氧化物酶同工酶的差异分析

本研究以刺槐体细胞分化、发育过程中采用的垂直平板聚丙烯酰胺电泳方法分析了不同类型的愈伤组织之间表现出的多态性,结果表明,酯酶同工酶和过氧化物同工酶可用来区分刺槐胚性与非胚性愈伤组织及绿色愈伤组织.     

小麦体细胞胚发生中蛋白质组分和过氧化物酶同工酶的变化

用PAGE及薄层找扫描方法分析了小麦体细胞胚发生和发育的不同阶段蛋白质组分和过氧化物酶酶谱的变化。胚性愈伤组织,从球形胚、梨形胚,盾片胚到成熟胚不同发育时期蛋白质电泳图谱相似,与对照(非胚性愈伤组织)明显不同。前者有18KD,49KD,78KD的蛋白质组分,其含量随发育进程而上升。对照则无这些蛋白质组分或含量很低,但含有特异的14KD蛋白质。胚性愈伤组织和体细胞胚的不同发育时期过氧化物酶同工酶酶谱极其相似,都具有C_2、C_6、C_93条特异酶带,但活性有差异。对照不存在这3条酶带。再生苗的蛋白质电泳图谱和过氧化物酶同工酶酶谱介于胚性和非胚性组织之间。     

玉米茎尖培养研究(Ⅱ)--体细胞胚胎发生的组织细胞学研究

以玉米茎尖分生组织为外植体，在离体培养条件下诱导体细胞胚胎(胚状体)发生。组织细胞学观察表明，玉米茎尖分生组织在离体培养条件下可直接产生胚性愈伤组织，后者在继代培养中发生胚状体。多数胚状体起源于愈伤组织的表层细胞和表层之下的几层细胞，少数产生于愈伤组织的较深层。胚状体发生于单细胞，发育过程与合子胚大致相似。多数胚状体发育正常，具有一个芽端和一个胚根端。少数胚状体形成具多个芽端而共用一个胚根端的次生连体胚。胚状体发生不同步。胚状体只有在分化培养基上才能发育成熟。     

手性固定相合成中原料YWG-NH_2与Spher-NH_2性能的比较

利用液相色谱手性固定相进行手性分离的研究越来越多，因此手性固定相的合成也就成了该项研究中必不可少的关键问题．在手性固定相的合成中氨丙基硅胶作为手性固定相的键合基体，其性质的好坏直接影响手性固定相的手性分离能力．分别利用国产和进口分装的氨丙基硅胶作基体，合成结构完全相同的手性固定相，结果表明进口的氨丙基硅胶合成的手性固定相的性能优于用国产氨丙基硅胶合成的手性固定相，并论述了可能产生这种差别的原因．     

甘薯不同类型愈伤组织的比较

不同激素浓度配比下,徐薯１８叶片外植体愈伤组织的类型和频率不同;在２,４－Ｄ浓度为２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上获得３种愈伤组织（Ｅ型、ＮＥ型、Ｇ型）,其色泽、质地、细胞的形态结构,分化途径显著不同,其过氧化物同功酶少酯酶同功酶酶谱也表现出显著特异性。     

宁夏枸杞愈伤组织器官发生和体细胞胚发生过程中过氧化物酶和酸性磷酸酶同工酶的研究

利用已建立的宁夏枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）叶愈伤组织器官发生和体细胞胚发生体系,比较研究了两条离体再生途径早期阶段愈伤组织的生长特性、过氧化物酶（ＰＯＤ）和酸性磷酸酶同工酶的活性及酶谱的变化。结果表明：（１）与继代愈伤组织的“Ｓ”形生长曲线不同,器官发生和体细胞胚发生过程的愈伤组织生长延迟期不明显,且第３ｄ后一直处于指数生长期,培养后期器官发生的愈伤组织生长速率快于体细胞胚发生;     

从白羊草成熟胚和幼穗培养诱导再生植株

由生长在北京地区的无融合生殖白羊草的成熟胚和幼穗诱导出愈伤组织，并由愈伤组织分化出植株．来源于成熟胚和幼穗的胚性愈伤组织的植株分化频率分别为４０％和８５％．     

珍稀濒危植物四合木体细胞胚胎发生的组织学观察

通过对四合木愈伤组织诱导和体细胞胚胎形成过程中组织学观察的研究,得出以下结果：１）茎尖、茎段、肉质叶和花蕾四种外植体中花蕾的愈伤组织诱导率最高,其中花蕾的肉质花托是四合木体细胞胚胎发生的良好外植体来源;２）基本２基为改良Ｍｓ固体培养基;ａ．附加０．１ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．５ｍｇ／Ｌ,２,４－Ｄ可诱导产生大量的淡黄色疏松状愈伤组织;ｂ．愈伤组织在去除外源植物生长调节物质的条件下,经一年左右继代培养     

红皮云杉体胚发生体系优化和超低温保存技术研究

【目的】通过对红皮云杉(Picea koraiensis)体细胞胚胎发生条件的筛选和超低温保存技术研究, 建立其完整的体胚发生体系及超低温保存条件,为红皮云杉优良种质资源的大量繁殖及保存提供基础。【方法】以红皮云杉合子胚为外植体,以两种基本培养基、6种植物生长调节剂组合为培养条件,筛选胚性愈伤组织诱导的适宜条件。并将获得的胚性愈伤组织进行超低温保存和体胚发育与成熟萌发试验,以3种脱落酸(ABA)和Gelrite浓度以及4种基本培养基为培养条件,筛选出体胚成熟和萌发的适宜培养条件。【结果】①两种基本培养基相比较,改良RJW(诱导率为30.00%)优于1/2 LV(诱导率为22.50%)基本培养基。当萘乙酸(NAA)质量浓度为3.0 mg/L、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)质量浓度为0.5 mg/L时胚性愈伤组织诱导率最高为50.00%;② 胚性愈伤组织增殖培养3个月后进行超低温保存试验,经恢复培养10 d 左右可以清晰地观察到成活的胚性愈伤组织,3个细胞系的胚性愈伤组织均可成活;③ 体胚发育阶段,改良RJW培养基添加Gelrite 6.0 g/L和ABA 20 mg/L时,3个细胞系体胚数量均较高,但是畸形胚比例也偏高,特别是HY-1细胞系畸形胚比例高达77.14%;当Gelrite质量浓度增加到8.0 g/L时,3个细胞系畸形胚比例均降低, 其中HY-2细胞系体胚数量为396.00个/g,畸形胚比例为10.33%;④ 红皮云杉体胚成熟培养两个月进行体胚萌发,在1/2 LM上体胚萌发能力最弱,其次是LM基本培养基,改良RJW体胚萌发能力最佳。不同细胞系体胚萌发能力也不同,体胚萌发能力最高为65.00%。【结论】① 胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为改良RJW基本培养基,适宜的激素组合为NAA 3.0 mg/L + 6-BA 0.5 mg/L;② 本试验进行超低温保存的细胞系均可成活;③ 体胚发育与成熟适宜的ABA质量浓度为20 mg/L,适宜Gelrite质量浓度为8.0 g/L;④ 体胚萌发的适宜基本培养基为改良RJW基本培养基。本研究建立了红皮云杉体胚发生体系并成功进行胚性愈伤组织的超低温保存条件,该技术体系可用于红皮云杉优良种质的快速繁殖。     

银杏胚乳不同发育时期生理代谢变化与其胚性感受态的相关性研究

【目的】探究银杏胚乳发育时期生理变化与其胚性感受态之间的关系,筛选出高感受态的银杏胚乳外植体,为开展银杏体细胞胚发生的研究及建立银杏体胚发生体系提供支持。【方法】以6月10日—9月15日不同时间段的银杏胚乳为材料,研究各时间段银杏胚乳的抗氧化酶活性、可溶性蛋白、黄酮、内源激素含量变化及与其愈伤组织诱导率的相关性。【结果】银杏胚乳发育及其胚性感受态可以分为3个阶段:第1阶段为6月10日—6月30日,此时胚乳虽然细胞生理代谢旺盛,含水率和超氧化物歧化酶(SOD)活性较高,吲哚乙酸(IAA)与脱落酸(ABA)比值较高,易诱导愈伤组织,但其愈伤组织为松散易褐化的非胚性愈伤组织,胚性感受态水平较低。第2阶段为6月30日—8月10日,期间的胚乳抗性酶活性、黄酮含量、IAA与ABA比值都处于较低水平,而玉米素核苷(ZR)+异戊烯基腺苷(iPA)与ABA的比值处于较高水平;第3阶段为8月17日—9月15日,其胚乳可溶性蛋白含量以及过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性较高,黄酮含量达到峰值,IAA与ABA的比值处于较高水平,且ZR+iPA与ABA的比值处于较低水平,胚性感受态水平高,胚性愈伤组织发生率最高。第2阶段愈伤组织诱导率比第1和第3阶段都低,胚性感受态也较第3阶段低。【结论】3个不同阶段胚乳发育时期胚性感受态强弱和胚性愈伤组织诱导能力的排列顺序为第3阶段>第2阶段>第1阶段,7月20日—9月15日的胚乳胚性感受态较高,是诱导胚性愈伤组织较好的时期。     

玉米茎尖培养再生体系的建立

不同基因型的玉米茎尖分生组织在添加不同浓度6-BA(6-苄基嘌呤)的MS培养基上,经过4周愈伤组织诱导培养和4周芽发育培养,获得高频率的丛生芽和再生植株,芽尖倍增数可达3~8芽/茎尖.通过比较试验,确立了诱导丛生芽发生的适宜培养条件和程序,反映了不同基因型的茎尖形成愈伤组织和再生植株的能力不同,从而初步建立了利用玉米茎尖分生组织再生植株的培养体系.     

仙客来(Cyclamen persicum Mill)体细胞胚的发生及组织细胞学的研究

以仙客来开花植株新生叶片为外植体,成功诱导、筛选出体细胞胚发生的胚性愈伤组织,胚性愈伤组织的形态有两种：微棕红色松软愈伤和松脆愈伤.显微镜下观察松软胚性愈伤多为含有数十个胚性细胞的胚性细胞团,而松脆胚性愈伤的胚性细胞团的胚性细胞数目只有几个或十几个.细胞学观察二者均包含前胚性细胞团、二细胞、四细胞、八细胞,进一步继代培养2周可观察到多细胞原胚、球形胚、梨形胚、心形胚、鱼雷胚的出现,大多数体胚60～90 d可发育成完整的小植株.