花生四烯酸产生菌的原生质体诱变育种

采用化学诱变剂硫酸二乙酯（ＤＥＳ）对由高山被孢霉出发菌株Ｍ３－１８制备的原生质体进行诱变育种,实验结果表明,采用体积分数为１０％的ＤＥＳ诱变３ｍｉｎ,可获得高产突变株Ｍ２０,其花生四烯酸产量比对照株Ｍ３－１８提高了４．４倍,而且突变株的继代遗传稳定。说明采用原生质体诱变育种是获得花生四烯酸高产菌株的有效方法。     

花生四烯酸产生菌的原生质体诱变育种

采用化学诱变剂硫酸二乙酯(DES)对由高山被孢霉出发菌株M3-18制备的原生质体进行诱变育种.实验结果表明,采用体积分数为10%的DES诱变3min,可获得高产突变株M20,其花生四烯酸产量比对照株M3-18提高了4.4倍,而且突变株的继代遗传稳定.说明采用原生质体诱变育种是获得花生四烯酸高产菌株的有效方法.     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,经摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（ＴｈｉｎＬａｙｅｒＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,ＭＣＲ百分含量达到９０％,效价１０７６ｕ／ｍｌ,分别比亲株提高１５％和１１％,     

高能电子诱变选育雷帕霉素产生菌

利用高能电子束对雷帕霉素产生菌进行诱变处理。照射时间分别选用10s、20s、30s,在诱变株中筛选高产突变株。最终获得一株高产菌株NP09-62#,其效价比出发菌株提高了33.3%,且遗传性能稳定。     

棘孢小单胞菌原生质体的融合育种

以小诺霉素（Ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ,ＭＣＲ）产生棘孢小单胞菌（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｓｐｏｒａｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）为出发菌株,诱变筛选得到一株链霉素抗性菌株,抗性菌株的原生质体分别用紫外线照射和热处理致死,通过单亲致死原生质体融合,以链霉素为选择条件选出融合株,以摇瓶发酵并结合薄层层析扫描（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏ－ｇｒａｐｈｙ,ＴＬＣ）分析,筛得４株ＭＣＲ百分含量高于亲株的融合子,     

棘孢小单孢突变株原生质体制备及再生

以棘孢小单孢突变株（Ｍｉｃｒｏｎｏｚｐｏｒａ ｅｃｈｉｎｏｚｐｏｒａ ＪＩＭ－４０１）为出发菌株,进行原生质体制备及再生条件的研究,结合ＵＶ照射及高能电子流诱变,筛选出ＭＳ－１１６菌株,３０吨发酵罐试验,其Ｃ２ｂ组分达８５．６％。     

利用抗自身代谢物特性进行西索霉素菌种选育

经过诱变处理西索霉素产生菌，利用菌株抗自身代谢物特征，在添加高浓度的西索霉素的分离培养基上选育获得产生西索霉素比出发菌株单位高的突变株ＭＥ９７，经过薄层层析，生物效价测定，该突变株所产抗生素主要组份是西索霉素，总有抗生素效价提高，并且其它发酵特征也发生了改变。     

他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件

以褐色高温单孢菌（Thermomonospora fusca)为出发菌株，通过60s和80s的紫外线交替诱变孢子悬液，采用透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法，获得了一株高产纤维素酶的突变株PE－211。与原始菌株相比，该突变株的产酶活力提高了1倍多。文中还对PE－211的产酶条件进行了研究。     

高产纤溶酶的脉孢霉诱变育种研究

本文利用紫外线-氯化锂复合诱变脉孢霉,选用制霉素抗性作筛选标记,抗性突变率为2.308×10~(-6),采用固态发酵法筛选纤溶酶高产突变株,正突变率为2.307×10~(-7)。获得较出发株产酶活性提高95.1％,82.71％和424.30％的三个正突变株。产酶稳定性考察表明,一突变株的产酶量较出发株提高70％以上,且稳定性好。     

紫红曲的原生质体紫外线诱变育种

对紫红曲原生质体进行不同时间紫外线照射诱变,实验表明,采用紫外线（ＵＶ）照射６０ｓ,可获得高产突变株,该突变株Ｍ１－１的红曲色素产量是亲本株的红曲色素产量的２．２７倍,说明原生质体进行诱变处理是简单易行的较好方法。     

用原生质体融合法优化啤酒酵母的凝絮性和发酵性能

以发酵度较高、凝絮性较差的啤酒酵母菌株H38的原生质体为受体,以凝絮性较强、发酵度较低的啤酒酵母菌株N1热灭活的原生质体为供体进行融合.用正交试验法分别优化两亲株的原生质体制备和再生的条件以及原生质体融合的条件.用制霉菌素抗性为遗传标记选择融合子.融合子初筛时以凝絮性为指标,复筛时以发酵度和发酵液中的主要风味物质的含量为指标.对得到的融合子进行了异核体和遗传稳定性的检验,结果得到两株凝絮性以及发酵特性较好的菌株HN31和HN40.     

柱状田头菇原生质体制备条件的实验研究

对影响柱状田头菇菌株原生质体制备的条件进行了研究,这些条件包括不同的培养基、不同的温度、不同的pH、不同的酶解时间、不同的菌龄以及不同的渗透压稳定剂.结果表明:液体摇瓶振荡培养5 d的菌丝,以0.6 mol/L的甘露醇或MgSO4作为渗透压稳定剂,采用2%的真菌溶壁酶,在pH为6、温度为31℃的条件下酶解2 h,柱状田头菇菌株的原生质体制备率最高,可达到2.31×106个/mL.     

应用原生质体融合技术选育L-异亮氨酸生产菌

以黄色短杆菌WY10和ASL495为亲本菌株，分别摸索了其原生质体形成和再生的条件，并在此基础上，进行了原生质体融合试验，考察了PEG浓度、融合时间等条件对原生质体融合的影响；最后利用所确定的条件对两亲株进行了融合，筛选出目的融合子WYA09和WYA17，带有双亲株标记Met^-和Leu^-。经产酸验证后，产酸量没有大幅提高，但副产氨基酸(主要是亮氨酸)减少，对工业生产中分离提纯工作和下一步的筛选高产菌工作都大有益处。     

L－谷氨酰胺生产菌定向选育的初步研究

以天津短杆菌ＴＧ－８６６为出发菌株，利用亚硝基胍、硫酸二乙酯等常规诱变方法以及原生质体融合法最终筛选出一株谷氨酰胺生产菌ＧＭＮ－１８［ＭＳＯ~Ｒ＋８－ＡＧ~Ｒ＋ＳＧ~Ｒ＋（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４~Ｒ］，在适宜条件下平均积累谷氨酰胺２７．３ｇ／Ｌ。     

抗药标记酿酒酵母菌株间原生质体融合的研究

酵母属中的一些种是生产单细胞蛋白的主要菌株,通过遗传工程选育高赖氨酸酵母有重要的理论意义和价值,采用100mg/ml蜗牛酶制备亲株的原生质体,在35%聚乙二醇(MW6000)的作用下,成功地获得了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的株间融合重组子,融合频率为10~(-8)-10~(-7),经过五代的移接验证,融合子稳定,融合子抗药性产生叠加效应,个体形态发生了变化,DNA含量加倍,赖氨酸含量有所提高.     

杜氏藻DNA酶活性比较研究

杜氏藻(Dunaliella,常称盐藻)是一属耐高盐度的单细胞绿藻,生长迅速,不具纤维素细胞壁,是基因工程潜在的DNA(基因)受体,而其DNA酶活性高低是衡量能否作为受体细胞的重要指标,越低越好。本研究中,DNA酶指能降解DNA的多种酶的总称。 采用三聚乙醛-二苯胺法分别测定了杜氏藻属6个种的DNA酶活性。从测定结果(Tab.1)看出,杜氏藻细胞的DNA酶活性偏低,并且不同种之间存在明显差异。其中D.minuta,     

荷伯生氏斜盖伞的同核体菌株制备

【目的】笔者前期从栎树外生菌根根尖组织中分离得1株真菌:荷伯生氏斜盖伞(Clitopilus hobsonii),发现其对苗木具有促生效应。研究旨在获得该菌的同核体菌株,为荷伯生氏斜盖伞高质量基因组数据的获得及其对植物的促生作用机制研究奠定基础。【方法】通过原生质体再生技术得到候选菌株,基于候选菌株与出发菌株的生长性状及菌落形态特征比较、RNA聚合酶Ⅱ基因(RNA polymerase Ⅱ gene,rpb2)和翻译延伸因子基因(translation elongation factor 1-α gene,tef)两个单拷贝保守基因片段的杂合性分析,以及DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)细胞核荧光染色观察,确定获得的再生菌株为同核体。【结果】经分离培养发现:其中一类再生菌株与出发菌株的菌落形态特性相比差异明显,且该再生菌株生长速度较慢;镜检结果表明,再生菌株与出发菌株均不存在锁状联合结构;DAPI细胞核荧光染色结果表明出发菌株菌丝细胞中均含有两个细胞核,而再生菌株初生菌丝中可观察到仅含1个细胞核的细胞结构,后期则发生双核化;rpb2和tef片段序列比对结果进一步表明出发菌株存在多个杂合位点,而在再生菌株中则未发现。【结论】本研究制备的再生菌株为荷伯生氏斜盖伞同核体菌株,具有单一、稳定的遗传信息,可为异核体真菌基因组数据的获得提供材料基础。