甘草炮制条件对18α-Gly和18β-Gly含量及比例的影响

研究甘草在炮制过程中不同炮制条件对甘草中主成分差向异构体18α-甘草酸(18α-Gly)和18β-甘草酸(18β-Gly)及杂质含量和比例关系变化的影响及其变化规律.采用Durashell-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.01mol/L高氯酸铵(氨水调节pH至8.20)-甲醇(体积比为48∶52)为流动相,流速0.80mL/min,检测波长254nm,柱温50℃,进样量10μL.观察炮制时间、炮制温度对甘草饮片中主成分和杂质的含量及对甘草酸2个差向异构体比例的影响.经炮制后的甘草主成分总含量较甘草饮片均有所下降,炮制时间的延长会使甘草饮片主成分的损失量逐渐增加,但对甘草饮片中主成分异构体18α-Gly和18β-Gly的比例关系无影响.当炮制温度小于90℃时,炮制温度和炮制时间对甘草饮片中的主成分异构体(18α-Gly和18β-Gly)和杂质含量的影响不明显;当炮制温度达到140℃后,炮制时间的延长会使18α-Gly和18β-Gly分解,主成分含量显著降低.甘草的主成分和杂质对各炮制因素具有一定敏感性,可考虑作为炮制程度的一个辅助质量指标引入甘草质量控制体系.     

对中国国家药品标准甘草酸单铵盐中有关物质及含量检测方法的改进

针对中国国家药品标准(WS1-XG-2002)中,甘草酸单铵盐含量测定方法分析时间长、效率低、不能实现对甘草酸主成分异构体18α-甘草酸(18α-Gly)和18β-甘草酸(18β-Gly)的有效分离,以及未对有关物质进行准确定量分析和质量控制等问题,改进并建立甘草酸单铵盐原料药及不同剂型制剂中有关物质及含量的检测方法.对色谱条件进行优化,采用Durashell-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.01 mol/L高氯酸铵(氨水调节pH至8.20)-甲醇(48∶52,V/V)为流动相,流速0.80 mL/min,检测波长254 nm,柱温50℃,进样量10 μL.18α-Gly,18β-Gly,甘草酸单铵盐杂质A和杂质B在0.5～100.0 μg/mL内线性关系良好(r=0.999 9),检出限分别为0.10,0.10,0.15,0.15μg/mL,平均回收率(n=3)为98.06％～101.61％.与中国国家药品标准(WS1-XG-2002)收载的甘草酸类制剂质量标准比较,本实验建立的方法能够实现对主成分异构体的有效分离,并能真实、准确地检测各有关物质的含量,方法精密度,重现性良好,灵敏度高,结果准确可靠,可用于甘草酸单铵盐原料药及其不同剂型制剂的检测分析及质量控制.     

不同配比18α-与18β-甘草酸对酒精性肝损伤大鼠肝功能的影响

探讨不同配比18α-与18β-甘草酸(Gly)对大鼠酒精性肝损伤的影响.健康SD大鼠,雄性,随机分组,每组10只,即正常对照组(生理盐水)、模型对照组(生理盐水)、阳性药物对照组(水飞蓟宾)、7个给药组(18α-Gly与18β-Gly不同配比组,配比为10∶0,8∶2,6∶4,5∶5,4∶6,2∶8,0∶10).给药4周后,检测不同组对血清酶、血清蛋白、总胆红素、胆汁酸及血糖调控的影响.结果显示:18α-Gly与18β-Gly各个配比均能降低血清酶ALT、AST、γ-GT、LDH活性,随着18β-Gly比例增加作用增强,当18α-Gly与18β-Gly配比小于4∶6时,对缓解酒精性肝损伤和心肌损伤效果更佳;当配比大于8∶2时,对酒精性肝损伤大鼠血清蛋白水平的改善作用更加显著.当配比小于4∶6时,明显降低TBIL和TBA水平,显著改善酒精性肝损伤大鼠对血糖的调控能力.研究结果为新药研发和临床治疗的制剂选择提供依据.     

qPCR检测全反式维甲酸对人胚肺成纤维细胞α-SMA基因表达的影响

采用体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-I)的方法,应用qPCR技术检测全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人胚肺成纤维细胞中α-SMA基因表达的影响.实验分为正常对照组、5μg/L TGF-β1组、10μmol/L ATRA组、5μg/L TGF-β1+0.1μmol/L ATRA组、5μg/L TGF-β1+1μmol/L ATRA组和5μg/L TGF-β1+10μmol/L ATRA组(TGF-β1和ATRA同时加入).处理24h后检测结果显示:与对照组细胞相比,TGF-β1诱导HFL-I中α-SMA基因表达明显上调(6.36倍).不同浓度ATRA干预后均可以明显抑制TGF-β1诱导的HFL-I中α-SMA基因表达(分别为正常组的3.89、1.94和1.42倍).以上结果表明,ATRA可以明显抑制TGF-β1诱导的α-SMA基因表达.ATRA对HFL-I细胞增殖和TGF-β1诱导分化的抑制作用可能是通过下调α-SMA基因表达实现的.     

可乐定对DRG神经元膜GABA激活电流的抑制作用

在新鲜分离大鼠DRG细胞上应用全细胞膜片钳记录证明:(1)绝大多数DRG细胞对GABA(10~(-5)～10~(-3)mol/L)敏感(72/75),产生有明显去敏感的、浓度依赖性的内向流;(2)大多数受检细胞对可乐定(10~(-8)～10~(-4)mol/L)无反应(60/72),仅少数细胞引起很小的内向流(12/72);(3)预加可定30～120sec后,GABA-激活电流受到明显抑制(51/72),此作用可被育亨宾(10~(-4)～10~(-5)mol/L)所阻断。如可乐定浓度为10~(-5)mol/L时,抑制为44.35％;(4)预加10~(-5)mol/L的可乐定使GABA激活电流的量效曲线明显右移,而Kd值相近,最大浓度时的GABA激活电流抑制30.5％;(5)预加β-受体激动剂异丙肾上腺素(10~(-4)～10~(-5)mol/L)对GABA激活电流无影响(n=9);(6)胞内预加H-7(10~(-4)mol/L),20个细胞中除1例以外,可乐定的抑制作用均明显地被阻断。本文结果提示:可乐定对GABA激活电流的抑制可能是由于α_2-受体激活后。通过胞内转导,而引起GABAa受体蛋白磷酸化的结果。     

巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法学建立

目的 建立巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法.方法 通过RT-PCR、TA克隆等技术制 备CYP3A29-pMD18-T和β-actin-pMD18-T实时荧光定量标准品,并以CYP3A29-pMD18-T标准品为模板,对不同浓度Mg2与探针组合的TaqMan反应体系进行筛选,TaqMan PCR方法,并对其有效性及重复性进行评价.结果 筛选到的TaqMan PcR方法为:PCR总体积10 μL,其中含1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L上下游引物、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L探针、1 μL模板.热循环条件为94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→读板).结论 建立了有效测定巴马香猪CYP3A29 mRNA拷贝数浓度的TaqMan PCR方法.通过该方法分别定量CYP3A29和β-actin mRNA的拷贝数浓度,即可求出CYP3A29mRNA的表达水平.     

β-环糊精对9,10-蒽醌的荧光增敏效应研究

研究β-环糊精和9,10-蒽醌在水相中形成的超分子体系的荧光光谱,得到不同浓度和不同pH值溶液中客体分子的荧光光谱.研究发现,在水相中,β-环糊精和9,10-蒽醌形成了1∶1的超分子体系,包合常数为1.35×102,与单体分子相比,空腔内9,10-蒽醌分子的荧光强度大大提高.在中性水溶液中,β-环糊精的浓度范围为4×10-4~3.2×10-3mol/L,9,10-蒽醌的荧光强度随着β-环糊精浓度的增加而增强.客体分子的荧光强度在酸性水溶液中具有很强的增强效应,而在中性和碱性介质中,其荧光增强效应大大降低.其中在pH=4.12的溶液中,客体分子9,10-蒽醌在β-环糊精空腔的荧光强度最大.9,10-蒽醌在4.99~66.56ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,回归方程为F=7.82C(ng/mL)+218.6,相关系数为0.998 5.利用荧光增强效应,得到该超分子体系对9,10-蒽醌的检测限为0.04ng/mL,该数量级是已经报道检测限(0.2μg/mL)的万分之一.     

2,4-二羟基苯乙酮缩三羟基甲基氨基甲烷的合成及其在稀土矿样中铽的痕量荧光分析中的应用

合成了一种新的席夫碱配体2,4-二羟基苯乙酮缩三羟基甲基氨基甲烷.该配体与铽(Ⅲ)的配合物的荧光强度在磷酸钠或六次甲基四胺的存在下可增强18或26倍.有机溶剂CH3CN,DMF,丙酮,THF,DMSO,CH3OH,C2H5OH的添加可使其荧光强度进一步增加3～19倍.其中,用CH3CN作溶剂时荧光增加倍数最大,Tb-HL-HMTM体系荧光最强.pH=6.0时,激发和发射波长分别是355和545 nm.在理想情况下,荧光强度与Tb3+离子浓度成正比.对于HL-Na3PO4-CH3CN体系,线性范围2.3×10-10～5.8×10-5 mol/L,检测限2.0×10-10 mol/L,对于HL-HMTM-CH3CN体系,线性范围9.8×10-11～7.2×10-5 mol/L,检测限9.0×10-11 mol/L.基于此对Tb3+进行定量测定,该分析方法简单、快速、灵敏、干扰小.同时对荧光增强的机理进行了分析和讨论.     

二氨基马来腈席夫碱Al~(3+)荧光分子探针

以2,4-二羟基苯甲醛和二氨基马来腈为原料合成了Schiff碱型荧光分子探针L,采用FT-IR、~1H NMR和MS对其结构进行了表征.结果表明:在V(乙醇)∶V(4-羟乙基哌嗪乙磺酸)=95∶5(pH=7.2)缓冲溶液中,L能够通过off-on荧光响应选择性识别Al~(3+),且几乎不受其他金属离子的干扰.在Al~(3+)浓度为0~2.4×10-5 mol/L时,溶液荧光强度与Al~(3+)浓度呈现良好的线性关系.L对Al~(3+)检出限为6.693×10~(-9)mol/L,二者的络合常数为2.146×10~4(mol/L)~(-1).     

甘草酸差向异构体不同配比对酒精性肝损伤脂质代谢的影响

研究18α-甘草酸和18β-甘草酸不同配比对酒精性肝损伤脂质代谢的影响,筛选最佳配比,为临床合理用药提供依据.大鼠随机分为正常组、酒精性肝损伤组、水飞蓟宾阳性组、甘草酸给药1~7组(18α-甘草酸和18β-甘草酸体积比依次为10∶0,8∶2,6∶4,5∶5,4∶6,2∶8,0∶10),造模4周后,麻醉处死.检测脂质代谢指标血清和肝脏中的甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和粪便中的TC,TG;氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽(GSH),丙二醛(MDA);进行HE染色以及油红O染色.与模型组相比,给药组的TC,TG,HDL及LDL水平均有显著性变化,其中给药5组的效果最佳.甘草酸对于酒精性肝损伤的脂质代谢有较好的治疗作用,18α-甘草酸和18β-甘草酸最佳体积配比为4∶6.     

黄山松松脂树脂酸少量成份研究

<正>用柱层析预富集我国黄山松松脂中树脂酸少量成份。经G C-M S鉴定出二种少量成份——8,15-异海松二烯酸(8,15-isopimaradien-18-acid)和8,15-海松二烯酸(8,15-pima-radien-18-acid)。并采用高效液相制备色谱,分离出微量未知物纯品,经鉴定为湿地松酸(Elliotinoic acid)。     

荧光假单胞菌株M18产吩嗪-1-羧酸的条件

在摇瓶发酵条件下，研究了产吩嗪—1—羧酸(PCA)的荧光假单胞菌M18在各种碳源、氮源、盐类、温度、接种量下PCA的分泌量，确定了适合PCA分泌的最佳培养基(1L)：葡萄糖20g，肉胨22g，KNO310g；最佳培养条件：温度28℃，起始pH7．0，装瓶量200／500(mL)，接种量5％；最佳培养时间72h．在此条件下，PCA在发酵液中的浓度可达到820mg/L．     

丹参酮ⅡA磺酸钠注射液与复方氨基酸(18AA)注射液的配伍稳定性研究

目的对丹参酮ⅡA磺酸钠注射液与复方氨基酸(18AA)注射液配伍稳定性进行实验研究。方法模拟临床浓度和使用方法,研究两种药物配伍后的p H值变化、配伍后的含量变化。结果配伍后各项结果均无明显变化。结论丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可与复方氨基酸(18AA)注射液可以配伍。     

豫南地区汉族人群类风湿关节炎患者IL-18基因启动子-607C/A多态性检测

采用序列特异性引物的聚合酶链反应技术(PCR-SSP)分析110例类风湿关节炎(RA)患者和100例健康体检者的IL-18基因启动子在-607位点的单个核苷酸多态性,检测豫南地区汉族人群白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)基因启动子单个核苷酸多态性与类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生是否存在关联.结果表明,RA患者组与健康对照组在IL-18基因-607位点的等位基因频率的分布及基因型频率的分布比较差异均有统计学意义(χ2=8.668、4.225,P<0.05),抗CCP抗体阳性组和阴性组在IL-18基因-607位点的基因型频率分布差异没有统计意义(χ2=0.941,P>0.05),说明IL-18基因启动子-607位点的多态性与RA患者类风湿因子存在关联.     

18F正电子药物自动化合成装置BNU F-A2的研制及应用

为满足北京日益增长的新型18F药物研究和应用的需要,研制多功能的自动化合成装置迫在眉睫.BNU F-A2型自动化合成装置是北京师范大学研制、以"多功能"和"自动化"为设计原则、一款用于自动化合成18F-放射性药物的装置.该装置可一次加载9种溶液,通过夹管式电磁阀控制流动,反应温度可在当前室温至最高150℃的范围内任意设定,满足单步、多步法18F药物标记及纯化的需要;装置控制程序采用模块化设计,将反应流程划分为若干步骤,通过在每步中设定装置动作和反应条件,完成相应的实验操作流程.装置可通过手动、无线遥控和工作站3种方式操作,以全自动和步进2种方式运行,这样可减少对操作人员的辐射损伤、更好地保护操作人员.应用该装置,自动化合成了乏氧组织显像药物[18F]FMISO和[18F]FET.结果表明:BNU F-A2型合成装置硬件结构设计灵活、控制程序友好、操作简单,满足了新型18F药物研究的需要,正在成为新型18F标记正电子药物研究的有力工具.     

泥鳅和黄鳝18S rRNA基因的克隆与序列分析

通过自行设计引物, 扩增且测定了泥鳅和黄鳝18S rRNA基因部分序列, 并讨论了后生动物18S rRNA基因的碱基含量变化情况. 结果表明, 泥鳅和黄鳝的18S rRNA基因部分序列长度均为1 204 bp, 泥鳅该基因序列GC含量为53.74%, 黄鳝该基因序列GC skew为0.082, 两条序列同源性为99.67%. 将它们和大西洋鲑3个物种的18S rRNA基因与其线粒体12S rRNA,16S rRNA,Cyt b和D loop区4基因进行序列比较, 发现核18S rRNA最保守, 而线粒体D loop区基因进化速率最快. 从GenBank中选择已测定的4种鱼纲动物和11种脊索动物的同源序列, 分别运用NJ法、 MP和ML法, 构建6种鱼纲动物和13种脊索动物的分
子系统树, 结果均显示, 在鱼纲动物系统树中, 6种鱼纲动物被分为软骨鱼类和硬骨鱼类两大支; 在脊索动物的系统树中, 鱼纲与脊椎动物的四足类形成姐妹群, 表明它们在系统发育过程中具有同等重要地位.     

一个小鼠睾丸特异表达新基因的克隆及表达谱分析

运用“数据库消减杂交”(digital diffrential Display)筛选出一个在小鼠睾丸中特异表达的新基因—mLrrc18(Genballk Accession No：AY775400),该基因的全长cDNA序列为2.7kb,小鼠多组织RT-PCR结果表明：该基因在睾丸中特异表达,而在其它组织中没有表达。该基因的睾丸特异性表达提示它可能在睾丸的的发育和性成熟过程中起重要作用。     

RNA干扰技术抑制SGIV ICP18绿色荧光融合蛋白表达的研究

 将含有新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus,SGIV）ICP18基因的真核表达载体pEGFP-ICP18转染到胖头鲤细胞（Fathead minnow cells,FHM）中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP18 GFP融合蛋白呈点状分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIV ICP18的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIV ICP18的siRNA（siRNA ICP18）,与pEGFP ICP18共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点的荧光强度变化。与序列非特异性siRNA（siRNA negative）阴性对照相比,转染后24~48 h,共转染siRNA ICP18和pEGFP ICP18的实验细胞中发荧光的细胞数量较阴性对照少60%~80%左右,说明体外化学合成的siRNA-ICP18可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP18基因的表达。     

一株渤海丝状海洋真菌的分子生物学复核鉴定

采用真菌形态观察的标准培养条件,结合18S rDNA—ITS片段克隆测序和序列特征GeneBank比较分析,对本实验室分离保藏的海洋真菌Penicillium sp．BH06进行了培养特征和显微形态的复核鉴定研究,依据分子生物学和形态结构特征,认定该菌株应修订为桔青霉（Penicillium citrinum）．研究结果提示,基于传统形态学观察并结合ITS序列分析,可为丝状真菌的分类鉴定提供可靠的分子生物学依据．     

磷钨酸季铵盐的制备、表征及催化合成己二酸

采用沉淀法制备了Dawson结构磷钨酸十六烷基三甲基铵((CTAB)6P2W18O62·nH2O)催化剂,通过FT-IR、SEM、XRD、EDS对催化剂进行表征,并用于催化30%H2O2氧化环己酮制备己二酸.通过正交实验确定了反应的最佳条件为:w(催化剂)=7.55%(相对环己酮的质量),反应温度为100℃,反应时间为6h,己二酸的平均收率达70.5%,催化剂重复套用5次,己二酸收率仍可保持在61.2%.本工艺具有绿色环保、安全、操作简单等优点.