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本文探讨了在大鼠背根神经节(DRG)细胞上记录离子单通道电流的方法,研究了膜片钳实验的各个环节,研究了提高封接电阻的方法。研究结果表明,单通道记录的背景噪声取决于电极与细胞的封接水平。文中还讨论了实验系统的组装,电极制备和细胞分离等技术。 相似文献
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在新鲜分离大鼠DRG细胞上应用全细胞膜片钳记录证明:(1)绝大多数DRG细胞对GABA(10~(-5)～10~(-3)mol/L)敏感(72/75),产生有明显去敏感的、浓度依赖性的内向流;(2)大多数受检细胞对可乐定(10~(-8)～10~(-4)mol/L)无反应(60/72),仅少数细胞引起很小的内向流(12/72);(3)预加可定30～120sec后,GABA-激活电流受到明显抑制(51/72),此作用可被育亨宾(10~(-4)～10~(-5)mol/L)所阻断。如可乐定浓度为10~(-5)mol/L时,抑制为44.35％;(4)预加10~(-5)mol/L的可乐定使GABA激活电流的量效曲线明显右移,而Kd值相近,最大浓度时的GABA激活电流抑制30.5％;(5)预加β-受体激动剂异丙肾上腺素(10~(-4)～10~(-5)mol/L)对GABA激活电流无影响(n=9);(6)胞内预加H-7(10~(-4)mol/L),20个细胞中除1例以外,可乐定的抑制作用均明显地被阻断。本文结果提示:可乐定对GABA激活电流的抑制可能是由于α_2-受体激活后。通过胞内转导,而引起GABAa受体蛋白磷酸化的结果。 相似文献
3.
在大鼠新鲜分离DRG神经元标本上应用全细胞膜片作记录,观察了多巴胺D_1受体的选择性激动剂(±)SKF38393HCI对GABA-激活电流的作用。大部分受检细胞(60/70)对GABA敏感。10~(-6)～10~(-3)mol/L GABA可引起呈剂量依赖性的明显去敏感作用的内向电流。在60个对GABA敏感的细胞中,预加SKF38393引起的膜反应如下:(1)外向电流(7/60);(2)内向电流(5/60);(3)无反应(48/60)。与GABA激活的内向电流相比,SKF38393激活电流幅值较小,无明显去敏感现象。预加SKF38393 30秒对GABA-激活电流幅值的影响如下:产生抑制作用的为88.33％(53/60),增强的为1.66％(1/60),无明显作用的为10.0％(6/0)。SKF38393对10~(-4)mol/L的GABA-激活电流的抑制作用依赖于SKF38393的浓度,在其浓度为10~(-4)、10~(-5)、10~(-6)、10~(-7)mol/L时对GABA-激活电流的抑制(±)分别为46.5％±2.3(n=8)、35.5％±1.2(n=8)、26.8％±1.5(n=7)、24.8％±2.6(n=7)。通过应用二次膜片作(repatch)技术在同一细胞(n=2)以及不同细胞组间(n=14)进行对比,证明:细胞内加蛋白激酶抑制剂H-7后,SKF38393对GABA的抑制作用完全清除。结果提示:SKF38393对GABA-激活电流的抑制作用可能是由于SKF38393激活D_1受体后通过胞内转导机制,使GABA受体通道复合体胞内磷酸化所致。 相似文献
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