苏芸金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌基因组DNA同源性及多态性的研究

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增到６１个标准株、生产用菌株及２４个蜡状芽孢杆菌参比菌株的全ＤＮＡ指纹图,通过计算多态性扩增片段的大小,利用ＮＴＳＹＳ软件进行聚类分析,蜡状芽孢杆菌菌株并未形成独立于苏芸金芽孢杆菌的聚群,这是此近缘种ＤＮＡ分子水平高度同源的新证据．６１个苏芸金芽孢杆菌的聚类结果表明：其ＤＮＡ指纹图与Ｈ－血清型有一定相关性．与引物０９５５－０３相比,引物０９４０－１２对苏芸金芽孢杆菌不同亚种及蜡状芽孢杆菌菌株具有更高的鉴别价值,大多数特异株ＤＮＡ全指纹图有菌株特异性,证实ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术是苏芸金芽孢杆菌及蜡状芽孢杆菌种下分类和鉴定的简便快速有效的方法     

从土壤分离苏芸金芽孢杆菌

从120个土壤样品检测了11790株芽孢杆菌,其中有81株是产生伴孢晶体的苏芸金芽孢杆菌。它们在生长和对昆虫的致病力上,彼此存在明显差异。从中筛选出了毒力较强的苏芸金芽孢杆菌菌株,从而认为从土壤中分离苏芸金芽孢杆菌有效菌株,是一条新的途径。     

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒的研究

从广西各地的八个温泉的水样中分离到２０株耐药的嗜热脂肪芽孢杆菌，用改良的ＢｉｎｇｈａｍＳＤＳ裂解法，从其中的１５株菌中检测到质粒。再用琼脂糖凝胶电泳法及电子显微镜技术对耐氨苄青霉素（２５μｇ·ｍｌ－１）的１２号菌株的质地作了较深入的研究。发现该质粒为共价闭合坏状ＤＮＡ分子（ＣＣＣＤＮＡ），共分子量为１４．６３×１０６，澳化乙锭（１μｇ·ｍｌ－１）和吖啶橙（２０μｇ·ｍｌ－１）共同作用可将该质粒消除掉。该质粒的功能有待进一步研究。     

一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌的研究

自济南郊区菜园土中,分离到一株产伴孢晶体的霉状芽孢杆菌。对其进行了形态、培养特征、生理生化反应、血清学反应以及 DNA 的 G+C 含量和 DNA-DNA 杂交率的试验测定。该菌有芽孢,其 DNA 中 G+C 含量为33. 9摩尔%(Tm)。由于该菌产典型的伴孢晶体,初步分析可将其归于苏芸金杆菌类(Baci-llus thuringiensis),并作为一种新亚种,命名为苏芸金杆菌霉状亚种(Baci-llus thuringiensis subsp.mycoides)。     

一株产脂肪酶蜡状芽孢杆菌的分离鉴定

从三角湖生活用水排污口取样,利用橄榄油培养基筛选产脂肪酶菌株。革兰染色结果为革兰氏阳性杆状菌;16SrDNA序列显示,该菌为蜡状芽孢杆菌;并从生理生化特征上进一步证实了是蜡状芽孢杆菌;对其生长曲线进行了测定;其生长规律与模式菌株大肠杆菌基本相同。对蜡状芽孢杆菌脂肪酶分解不同类型油脂的能力进行了评估,该菌脂肪酶对猪油分解能力强,橄榄油及花生油次之,对牛油分解能力差。     

枯草芽孢杆菌TY7210菌株的ERIC-PCR快速鉴别

以ER IC核心序列为引物,以2株枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,采用PCR对T aq DNA聚合酶用量、PCR退火温度及模板DNA浓度进行优化,建立了快速鉴别芽孢杆菌的ER IC-PCR方法,并对5株芽孢杆菌进行了分析.结果表明枯草芽孢杆菌TY 7210菌株与其他芽孢杆菌菌株具有不同的指纹图谱,尤其不同于枯草芽孢杆菌(ATCC 1.1849),为芽孢杆菌的快速鉴别奠定了基础.     

棉花增产菌和苏芸金芽孢杆菌原生质体的形成融合条件的探讨

本实验对两种不同属间的细菌棉花增产菌(一种芽孢杆菌Kan~rCan~(?))和苏芸金芽孢杆菌(Kan~(?)Can~r)原生质体的形成、再生及融合进行了研究,初步确定了适应这两种出发菌株的破壁、再生及融合的最佳条件.在此条件下,其破壁率均可达到98%;融合率可达2.15×10~(-5).试验结果证明,两种不同属间的细菌细胞融合是完全可能的.     

中国Btken-Ag cry1Ac杀虫毒素基因核心片段的克隆及核苷酸序列测定

用ＰＣＲ方法,将苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ａｇ菌体（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｋｅｎｙａｅ Ａｇ,简称Ｂｔｋｅｎ－Ａｇ）编码ｃｒｙ１Ａｃ杀虫毒素蛋白的Ｎ末端（１．８４ｋｂ）的基因片段扩增后,淫ＥｃｏＲⅠ消化成三个不同大小的片段,将原扩增片段及酶切片段分别连接到ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ克隆载体后转化进大肠杆菌,将每一克隆片段进行序列测定,在此基础上又设计出特异引物,再次以ｃｒｙ１Ａｃ的     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

饲料中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定

从西宁市某饲料厂随机采集饲料样品70份,进行蜡状芽孢杆菌的常规分离培养与鉴定。共检出阳性菌株31株,检出率44．29％（31／70）,31株分离株的生化试验结果与蜡状芽孢杆菌完全一致,且31株分离株都具有营养要求低、生长速度快的特点。     

蜡状芽孢杆菌对番茄青枯雷尔氏菌致病性的影响

青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）从其致病性上可分为能使植株发病的强致病力菌株和不能使植株发病的弱致病力菌株．利用蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）与致病性稳定的青枯雷尔氏菌强致病力菌株进行共培养，处理后的青枯雷尔氏菌在TTC平板上表现为弱毒株的菌落特征，出现了致弱现象．经过16S rDNA基因序列测定，证明了用蜡状芽孢杆菌处理前后的菌株为青枯雷尔氏菌，并非是其它的污染菌株，通过回接番茄盆栽苗发现致弱前的青枯雷尔氏菌能有效引起番茄发生青枯病，而致弱后的菌株丧失致病力．不能引起番茄发病，     

苏云金芽孢杆菌新分离株S11—11δ—内毒素基因在Btk.BE …

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌，以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体，用Ｐｓｔ Ｉ和ＥｏｏｒＩ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切，并将酶切片段用Ｔ４ ＤＮＡ连接酶连接，用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明，δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达，并具有较高的表达量。生物测定     

动物微生态制剂鸡肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

试验菌种由宁夏固原山区完全自然生长的土种健康产蛋母鸡的盲肠和大肠中分离获得,共分离出8株革兰氏染色阳性杆菌株,对其进行茼落形态观察和描述,及革兰氏染色、芽孢染色和生理生化鉴定,确定4株为芽孢杆菌（Bacillus）,其中3株为枯草芽孢杆菌（B、subtilis）,1株为蜡状芽孢杆菌（B．cereus）,各项鉴定结果均符合相对应的芽孢杆菌属和种的菌落形态,及革兰氏染色、芽孢染色特征和生理生化鉴定标准;另4株初步确定为不产芽抱的革兰氏阳性杆菌．     

蜡质芽孢杆菌超氧化物歧化酶稳定性研究

采用化学动力学方法首次测定了蜡质芽孢杆菌ＳＯＤ稳定性，结果表明，蜡质芽孢杆菌ＳＯＤ的ｔ０．９为５５．９７／ｍｉｎ，ｔ１／２为３６９．４０ｍｉｎ，该酶显示出具有良好的稳定性，提示可作为一种ＳＯＤ药用酶的重要资源，具有潜在的重要药用价值。     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

小麦根际拮抗性产芽孢细菌的鉴定

本文报导了３种从小麦根际分离的拮抗性产芽孢细菌，分别是枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌和短小芽孢杆菌，它们都对小麦全病菌和棉花枯萎病菌具有明显的拮抗作用。     

苏芸金杆菌187菌株的研究进展

苏芸杆菌１８７菌株自１９７８年发现以来，经近２０年的研究，现已在如下方面取得了重要成果：１．苏芸金杆菌１８７菌株的生物学特性；２．其毒力与对纹幼虫的致病机理；３．其伴孢晶体和芽孢的超微结构，生理生化与抗原特性，４．其发酵条件与特性，５．大田灭蚊应用研究。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S_(11-11)δ-内毒素基因在Btk.BE_(20)中的克隆和表达

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌,以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体,用ＰｓｔⅠ和ＥｃｏＲⅠ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切,并将酶切片段用Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接,用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明：δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达,并具有较高的表达量．生物测定表明,重组株对夜蛾科幼虫具有较高的毒性．此外,对质粒提取的方法也进行了讨论．     

枯草芽孢杆菌TF2磺胺胍抗性基因的克隆和表达

采用鸟枪法将枯草芽孢杆菌磺胺胍抗性基因克隆到质粒ｐＵＢ１１０中建成重组质粒,ｐＢＵＷ４,该质粒的分子量约８．１ｋｂ,标记为ＳＧ＾ｒ为Ｋｍ＾ｒ,将ｐＵＢＷ４转化到肌苷产生菌枯草芽孢杆菌Ｑ２９０１－４菌株中,得到的转化子产肌苷能力比受体菌提高２５．５％。     

He－Ne激光对地衣芽孢杆菌的诱变效应

用Ｈｅ－Ｎｅ激光处理碱性蛋白酶产生菌──地衣芽孢杆菌Ｆ－３５２３－３．实验结果表明，照射１０分钟，其正变率最高达１６．８％，经处理后获得变株Ｆ－８０１４发酵的酶活性比出发菌株提高３７％，生物学特性发生多方面变异。