血小板衍化生长因子及其受体在人胰腺癌局部浸润转移中作用的实验研究

观察胰腺组织及其癌变标本中血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）及其受体（ＰＤＧＦＲ）基因表达的变化关系,以探讨它们在人胰腺癌局部侵袭和转移过程中的作用。用诺真法（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ）和原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＩＳＨ）方法,采用ｃＤＮＡ探针（ＰＤＧＦＡ、Ｂ,ＰＤＧＦＲα、β）对两株胰腺癌细胞（Ｐａｔｕ８９８８、Ｐａｔｕ８９０２）、１５例胰腺癌手术切除标本和８例正常胰腺组织标本进行杂交检测。胰腺癌组织中,ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ在ＲＮＡ水平的表达与正常胰腺组织相近;而ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ尤其是ＰＤＧＦＲα在ＲＮＡ水平的表达,较正常胰腺组织相对提高。ＰａＴｕ细胞株中,有ＰＤＧＦＡ及其ＰＤＧＦＲβ的表达。ＩＳＨ结果显示：ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ阳性反应深浅不一,胰腺癌与正常胰腺组织无明显差异。胰腺癌细胞中ＰＤＧＦ和ＰＤＧＦＲ均有表达,而ＰＤＧＦＲβ则比较多地定位于结缔组织中的纤维细胞和内皮细胞。ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦＲ可能通过对胰腺癌细胞外基质蛋白降解代谢的调控,共同影响着肿瘤的侵袭和转移过程     

逆转录多聚合酶链反应检测排斥反应期移植肠基因的转录

排斥反应仍色是阻碍小肠移植成功的主要障碍,其机理、诊断及治疗均有待进一步研究。目前建立逆转录多聚合酶链反应方法,观察排斥反应期移植肠ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、穿孔素、粒细胞酶Ｂ的ｍＲＮＡ转录变化,取大鼠移植肠杆本提取总ＲＮＡ,并进行ＲＴ－ＰＣＲ检测ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ穿孔素、粒细胞酶Ｂ的ｍＲＮＡ转录,ＰＣＲ产物以内参基因β－ａｃｔｉｎ为内对照,应用ＳＸ－１００生物影像分析系统进行半定量分析。结果显示Ｒ     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

ORL1受体在SK-N-SH细胞中的功能性表达及其跨膜信号传导

一种新型的阿片受体ＯＲＬ１（ｏｐｉｏｉｄ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ）及最近发现的ＯＲＬ１的内源性激动剂（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ）在痛觉的调制机制中扮演着某种重要角色．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术在人的神经母细胞ＳＫ－Ｎ－ＳＨ中检测到ＯＲＬ１受体ｍＲＮＡ的天然高量表达；ｃＡＭＰ放射免疫测定技术发现，在经ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ处理的ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞中，由环甘酸环化酶激活剂（Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）引起的细胞内ｃＡＭＰ水平的升高受到抑制，其ＩＣ５０为６０±１５ｎｍｏｌ／Ｌ，最大抑制率为７０％．同时，用ｄｅｌｔａ阿片受体ＤＯＲ激动剂（ＤＰＤＰＥ）、Ｍｕ阿片受体ＭＯＲ激动剂（ＤＡＧＯ）分别处理ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞，也产生了不同程度的抑制，但抑制率均不如ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ．发现阿片受体的广谱拮抗剂（ｎａｌｏｘｏｎｅ），可使ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ及ＤＰＤＰＥ的抑制作用反转；用ＤＯＲ的特异性拮抗剂（ｎａｌｔｒｉｎｄｏｌｅ）只能使ＤＰＤＰＥ的抑制反转，而不能影响ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ的抑制作用．用５μｍｏｌ／Ｌ的ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ对ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞进行２０ｍｉｎ（３７℃）的预处理，可引起细胞对ｎｏｃｉｃｅｐｔｉ     

改性聚酯合成中直接酯化的研究

本文研究ＰＴＡ—ＡＤＡ（Ａｌｉｐｈａｌｉｃｄｉｈｙｒｉｃａｃｉｄ）－ＥＧ多组分非均相体系的酯化反应，测算其酯化反应速率，分析了影响非均相酯化反应的诸因素。研究结果表明，酯化反应速率随反应温度的增加而增加，５０３Ｋ时酯化速率为５．０２７０Ｈ２Ｏｍｏｌ×１０￣（－４）Ｓ￣（－１），５２３Ｋ时酯化速率增为１０．２６００Ｈ２Ｏｍｏｌ×１０￣（－４）Ｓ￣（－１），不同种类的ＡＤＡ及其加入量对酯化反应亦有影响；随着ＡＤＡ的碳链原子数增加及加入量增加，酯化反应速率减慢；采用不同的催化剂，酯化反应速率亦不相同。     

地高辛标记cRNA探针原位杂交检测大鼠脑NMDAR—L mRNA

采用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｎ Ｄｉｇ）标记神经递质受体ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｃＲＮＡ探针技术进行原位杂交，研究了Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠脑神经细胞ＮＭＤＡＲ－Ｌ的基因表达。光学显微镜观察结果显示，大脑皮层、海马等区有明显的ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｍＲＮＡ表达，胞浆着蓝色，胞核不着色，背景浅谈，反差显著。实验结果表明地高辛标记ｃＲＮＡ探针能快速、准确地检测出ＮＭＤＡＲ－Ｌ ｍＲＮＡ，为进一步研究这一拟受体在脑中表达和分     

P48L和D74N突变影响P16基因功能

应用ＰＣＲ技术，对Ｐ１６抑癌基因进行体外定突变。在Ｐ１６ｃＤＮＡ中引入第４８位密码子ＣＣＧ（Ｐｒｏ）→ＣＴＧ（Ｌｅｕ）和第７４位密码子ＧＡＣ（Ａｓｐ）→ＡＡＣ（Ａｓｎ）突变，构建了ｐ１６－Ｐ４８Ｌ和ｐ１６－Ｄ７４Ｎ突变体，并把它们导入纯合缺失Ｐ１６基因的人肺癌细胞株Ｈ４６０。     

羊生长激素在大肠杆菌中表达及分泌初探

利用ＰＣＲ方法,将羊生长激素（ｏＧＨ）成熟蛋白编码序列扩增,再将扩增产物接入分泌型表达载体ｐＥＴ１２ａ（ＳａｌＩ位点）中,利用宿主菌自身的ＯｍｐＴ信号肽引导羊生长激素在Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）中分泌,获得正向插入重组质粒ｐＥＴ１２－ｏＧＨ８,对重组子及对照菌进行诱导表达,薄层色谱扫描（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检测结果发现,ｏＧＨ在ＯｍｐＴ信号肽引导下未见明显分泌,推测ｏＧＨ自身的氨基酸序列可有是     

抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达

从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞３Ｆ５中提取总ＲＮＡ,逆转录成ｃＤＮＡ,用合成的寡核苷酸引物通过ＰＣＲ扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列,采用ＰＣＲ拼接法构建单链抗体基因,并插入原核表达载体ＰＥｔ－２８ａ,转化大砀杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,经ＩＰＴＧ诱导后表达,序 分析表明所克隆的ＶＬ、ＶＨ分别属于鼠ＩｇＫａｐｐａ轻链ＩＶ亚组和Ｉｇ重链Ⅱ亚组,ＶＨ、ＶＬ基     

钙对杂交水稻离体叶片衰老的影响

以叶绿素和蛋白质的质量分数下降作为衰老的生理指标,研究了Ｃａ２＋和Ｃａ２＋的螯合剂ＥＤＴＡ对杂交水稻离体叶片衰老的作用．结果表明,Ｃａ２＋能延缓杂交水稻离体叶片中叶绿素和蛋白质的质量分数的下降,提高超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、抗坏血酸过氧化物酶（ＡｓＡ－ＰＯＤ）和谷胱甘肽还原酶（ＧＲ）的酶活性;增加抗坏血酸（ＡｓＡ）和谷胱甘肽（ＧＳＨ）的的质量分数;降低膜脂过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）的质量摩尔浓度．１～２０ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ降低叶片中叶绿素和可溶性蛋白质的质量分数;降低ＡｓＡ－ＰＯＤ和ＣＡＴ的酶活性;降低ＡｓＡ、ＧＳＨ的质量分数;提高ＳＯＤ酶活性,但对ＧＲ酶活性的影响不大．外加Ｃａ２＋可使ＥＤＴＡ的抑制作用减轻．     

THE CURRENT DENSITY DEPENDENCE OF ACTIVATION ENERGY IN HIGH－Tc SUPERCONDUCTOR HgBa_2Ca_2Cu_3O_（8＋x） IN LOW CURRENT DENSITY

ＴＨＥＣＵＲＲＥＮＴＤＥＮＳＩＴＹＤＥＰＥＮＤＥＮＣＥＯＦＡＣＴＩＶＡＴＩＯＮＥＮＥＲＧＹＩＮＨＩＧＨ－ＴｃＳＵＰＥＲＣＯＮＤＵＣＴＯＲＨｇＢａ_２Ｃａ_２Ｃｕ_３Ｏ_（８＋ｘ）ＩＮＬＯＷＣＵＲＲＥＮＴＤＥＮＳＩＴＹＴＨＥＣＵＲＲＥＮＴＤＥＮＳＩＴＹＤＥ...     

香石竹斑驳病毒（CarMVsh）外壳蛋白基因克隆及原核表达

香石竹斑驳病毒上海分离株是从上海地区栽培的香石竹上分离并鉴定的,以提纯的病毒为材料,ＳＤＳ－酚法纯化的基因组ＲＮＡ作为模板,ＲＴ－ＰＣＲ合成并扩增外壳蛋白基因ｃＤＮＡ,ｃＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ－Ｔ ｅａｓｙ ｖｅｃｔｏｒ,转化为Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９。阳笥克隆ｐＴＣａＣＰ经序列分析,证明带有全长ＣＰ基因。     

血小板衍化生长因子及其受体在人胰腺癌局部浸润转移中作用的实验研究

观察胰腺组织及其癌变标本中血小板衍生长因子（ＰＤＧＦ）及其受体（ＰＤＧＦＲ）基因表达的变化关系,以探讨它们在人胰腺癌局部侵袭和转移过程的作用,用诺真法（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ）和原位杂交（ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＩＳＨ）方法,采用ｃＤＮＡ探针（ＰＤＧＦＡ,Ｂ,ＰＤＧＦＲα,β）对两株胰腺细胞（Ｐａｔｕ８９８８,Ｐａｔｕ８９０２）１５例胰腺癌手术切除标本和８例正常胰腺组织标本进行     

中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因的克隆及序列分析

根据小ＲＮＡ 病毒科（ Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ） 中病毒ＲＮＡ 所具有的结构特征, 采用ｍＲＮＡｃａｐｔｕｒｅ ｋｉｔ 提取纯化中蜂囊状幼虫病病毒（Ｃｈｉｎｅｓｅｓｃａｂｒｏｏｄ ｖｉｒｕｓ ＣＳＢＶ） 的ＲＮＡ, 并以之为ｃＤＮＡ合成的模板． 依据小ＲＮＡ病毒科中的脊髓灰质炎病毒结构蛋白基因序列设计了一对引物ＶＰ５和ＶＰ３ , 通过ＰＣＲ 扩增获得预期大小约为１ １００ ｂｐ的ＤＮＡ 片段, 将此片段克隆到ｐＧＥＭＴｅａｓｙ载体上并直接测序． 序列分析表明, 该片段为中蜂囊状幼虫病病毒部分结构蛋白基因, 与意蜂幼虫囊状病病毒结构蛋白基因序列的同源性为８６－８ ％ , 与之对应氨基酸序列的同源性高达９３－４ ％ ． 该病毒株为一种新型的蜜蜂囊状幼虫病病毒株     

带HSV－tk基因的重组腺病毒杀伤离体肺癌细胞的研究

带有单纯疱疹病毒脱氧胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的腺病毒结合ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ）对分裂细胞有很强的杀伤作用．在感染复数（Ｍ．Ｏ．Ｉ,ＭｕｌｔｉＰｌｉｃｉｔｙｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ）达到１０００时对人体肺腺癌细胞Ａ５４９的杀伤几乎达到１００％．四种人体肺癌细胞株（Ａ５４９,ＬＡＸ,ＳＰＣ,ＳＫＹ）对带ＨＳＶ－ｔｋ的腺病毒（ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ）的杀伤作用表现出不同的敏感性．另Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ（ＡＣＶ）和ＧＣＶ对感染了重组腺病毒ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞都有一定杀伤作用,但杀伤效果有很大差别;就Ａ５４９而言,ＧＣＶ的杀伤作用比ＡＣＶ高７～８倍．此外ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ结合ＧＣＶ杀伤肿瘤细胞时有“旁观者效应”,即感染了ＡＤＶ／ＲＳＶ－ｔｋ的细胞与未感染细胞混合后,后者也明显地遭到杀伤．     

二-(2-乙基己基)-膦酸与C_(5～7)羟肟酸自硫酸介质中协同萃取Ga~(3 )研究

研究了从硫酸介质中用二－（２－乙基己基）－磷酸（Ｄ２ＥＨＰＡ,Ｈ２Ａ２,Ｐ２０４）与 Ｃ５～７,羟肟酸（ＨＲ）协同萃取Ｃａ３＋的影响因素及其机理,经斜率法和饱和容量法确定了Ｃａ３＋萃合物的组成,计算了其表观平衡常数．并利用红外光谱探讨了萃合物的结构．结果发现,在高酸度Ｈ１ＳＯ４介质中体系有明显的正协萃效应．Ｇａ３＋离子的萃取率显著提高．其机理是以离子交换的形式进行的,萃合物的结构式为Ｇａ（ＨＡ２）Ｒ２．     

STR对幼鲤生长和肝脏IGF-ⅠmRNA表达的影响

通过以体质量６０～７０ｇ的幼年鲤鱼（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）,每ｋｇ体质量以２００ｍｇ的剂量体腔注射链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ,ＳＴＲ）或载体溶液２００ｍｇ,观察鲤鱼生长、血糖、血清生长激素（ＧＨ）水平和肝组织胰岛素样生长因子Ⅰ（ＩＧＦⅠ）ｍＲＮＡ水平的变化．注射ＳＴＲ的鱼生长速率比对照组显著减慢．在第１５天和第３０天实验组鲤鱼血糖水平以及血清ＧＨ水平皆无明显变化．在注射ＳＴＲ后的第１５天肝组织ＩＧＦⅠｍＲＮＡ的表达水平比对照组明显下降,第３０天两组鱼肝组织ＩＧＦⅠｍＲＮＡ含量则无明显差异．注射ＳＴＲ后鲤鱼出现胰岛遭受破坏的症状．实验结果提示ＳＴＲ可能通过破坏胰岛Ｂ细胞导致胰岛素（Ｉｎｓ）分泌下降,而后者则可能通过ＧＨ受体水平或ＧＨ受体以后水平的某种机制导致鲤鱼肝组织ＩＧＦⅠｍＲＮＡ表达的下降,进而引起鲤鱼生长减慢     

维持血透患者庚型肝炎病毒感染的临床研究

研究血液净化中心维持血液透析患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ） 感染率、影响因素和临床特点．应用反转录聚合酶链反应法（ＲＴＰＣＲ） ,检测了１４９ 例维持血透患者ＨＧＶ 感染情况．维持血透患者ＨＧＶＲＮＡ 阳性率为４ ．７ ％ ,与ＨＧＶＲＮＡ阴性患者相比,两组在人口统计学资料、维持透析时间、输血量、合并ＨＢＶ 和ＨＣＶ 感染率及肝脏酶谱等方面无统计学差异．维持血透患者ＨＧＶ 感染率高于普通人群,但无明显肝损害表现     

a2及5—HT2受体与甘氨酸受体之间的对话

在新鲜分离的神经细胞模型上,运用制霉菌素（ｎｙｓｔａｔｉｎ）穿孔膜片钳方法研究ａａ２及５－ＨＴ２与甘氨酸受体之间对话的分子机理,发现：刺激ａ２受体,抑制腺苷酸环化酶,减少ｃＡＭＰ的生成,合ＰＫＡ活性降低,从而增强甘氨酸受体的功能;刺激５－ＨＴ２受体,激活磷脂酶Ｃ（ＰＬＧ）,增加甘油二酯（ＤＡＧ）的生成．ＤＡＧ增强不依赖Ｃａ＾２＋的新型ＰＫＧ（ｎＰＫＧ）的活性,从而增强甘氨酸受体的功能,ａ２及５－Ｈ     

哮喘患者肺泡巨噬细胞中IL－6mRNA表达的研究

应用逆转录酶链反应及索氏转移杂交技术分析过敏性支气管哮喘患者（激素治疗组９例，非激素治疗组１２例）及正常对照组（１０例）肺泡巨噬细胞（ａｌｖｅｏｌａｒｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ＡＭ）中白细胞介素一６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－６／β－ａｃｔｉｎ比值表示。结果发现未用激素治疗的哮喘患者ＡＭ的ＩＬ－６／μ－ａｃｔｉｎ为０．６６±０．３２，显著高于正常对照者（０．３４±０．１３，Ｐ＜０．０１）及激素治疗组（０．４１±０．１５，Ｐ＜０．０５）。提示表达ＩＬ－６的ＡＭ在哮喘的发病机理中可能具有重要的作用，而皮质激素治疗哮喘的机制之一可能与其抑制ＡＭ表达及产生ＩＬ－６的能力有关。