2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建

通过生物信息学分析2型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2,S．suis2）中国强毒株05ZYH33的基凶组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子（Opacityfactor of S．suis,OFS）的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs^37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs^37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定．根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs^37-683基因敲除株．PCR、测序和RT—PCR分析结果均显示ofs^37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs^37-683基因敲除株构建成功．该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础．     

抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达

从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞３Ｆ５中提取总ＲＮＡ,逆转录成ｃＤＮＡ,用合成的寡核苷酸引物通过ＰＣＲ扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因,用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列,采用ＰＣＲ拼接法构建单链抗体基因,并插入原核表达载体ＰＥｔ－２８ａ,转化大砀杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,经ＩＰＴＧ诱导后表达,序 分析表明所克隆的ＶＬ、ＶＨ分别属于鼠ＩｇＫａｐｐａ轻链ＩＶ亚组和Ｉｇ重链Ⅱ亚组,ＶＨ、ＶＬ基     

人甲状旁腺素的基因表达及活性的初步研究

从人甲状旁腺瘤组织中分离到ｍＲＮＡ,逆转成ｃＤＮＡ后,设计带有突变碱基的引物,通过聚合酶链式反应,扩增ｈＰＴＨ基因,使Ｎ端前５氨基酸的碱基富含腺嘌呤核苷（Ａ）．将该基因克隆到表达载体ＰＥＴＩＣ上,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）表达,实验证实ｈＰＴＨ的表达量占菌体蛋白总量的１１％;细胞粗步处理产物经腺苷环化酶的生物鉴定实验证实,重组ｈＰＴＨ具有生物活性,粗产物５００倍稀释后,ｈＰＴＨ的放免活性为２０６．５ｎｇ／Ｌ,为对照的４１５倍     

母婴配对血清中TT病毒的分子鉴定

为了解TT病毒（TTV）在我国母婴间传播的可能及分子病毒学依据，合成引物（引物1：5′－ACAGACAGAGGAGAAGGCAACATG－3′；引物2：5′－CTGGCATTTTACCATTTCCAAAGTT－3′；引物3；5′－GGCAACATGTTATGGATAGACTGG－3′），采用半套式聚合酶链反应（hemi-nested PCR）方法，检测了40对母、婴母对血清中的TTV DNA，并对TTV DNA均阳性的一对母婴配对血清中PCR产物进行测序和序列分析，结果发现：（1）在40例产妇血清中，有5例经半套式PCR检出了TTV DNA，检出率为12.5%；40例脐血中，检出TTV DNA阳性血清1例，阳性率为2.5%，脐血呈阳性的新生儿母亲静脉血中TTV DNA也为阳性。（2）母婴同时检出TTV DNA的血清PCR产物经测序后进行序列比对，二者病毒核苷酸序列的同源性为1005；与日本G2b型代表株核苷酸同源性为98.6%，属于G2b亚型，研究结果表明：TTV存在母婴传播途径，TTV可经胎盘垂直传播。     

PCR扩增检测献血者中TT病毒DNA及部分TTV基因序列分析

目的：了解江苏地区献血者中新型肝炎相关病毒－－TT病毒的感染状况，探讨TTV感染与ALT异常的相关性，方法：设计通用引物，采用半套式聚合酶链反应（hemi-nested PCR)方法检测195份献血者血清标本，结果，在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常，HBsAg及抗HCV阴性的99份献血者血清标本中，检出TTV DNA阳性标本36份，TTV DNA的阳性检出率为36．3％，而在96份正常献血者血清标本中，检出TTV DNA阳性标本16份，TTV DNA阳性检出率为16．6％，明显低于ALT常献血者人群，对2株阳性株序列分析结果显示，一株与TX011（G1b日本代表株）的同源性为98．6％，属于G1b亚型，另一株虽可归属于G1，但与G1a ，Blb差异较大，可能为G1的新亚型，结论：江苏地区献血者人群中存在TTV感染，国内首次报告检出TTV G1b亚型及新的亚型，献血者ALT异常与TTV感染密切相关，输血可能成为传播TTV感染的途径之一。