哮喘患者血清基质蛋白酶的测定及临床意义

探讨了发作期哮喘患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的水平及其在哮喘病机制中的作用.使用ELISA法分别测定了发作期门诊哮喘患者40名、健康对照20名的血清MMP-9的浓度并测定了外周血嗜酸粒细胞计数(Eos).哮喘患者血清MMP-9的浓度(160.57士76.17ng/mL)明显高于健康对照组(107.51±70.85ng/mL)(t=2.523,p＜0.05),哮喘患者的血清MMP一9水平与Eos(r=0.253,0.10＞p＞0.05)成较弱的相关关系.哮喘发作期血清MMP-9水平明显增高,MMP-9参与了哮喘的气道炎症及气道重构.     

慢性阻塞性肺疾病痰白细胞介素-16的测定及其意义

收集１９例急性期慢性阻塞性肺疾病者,６例ＣＯＰＤ缓解期患者以及１０例正常对照者的痰液,以酶联免疫吸附法测定其痰液白细胞介素－１６水平,以探讨ＩＬ－１６在ＣＯＰＤ发病机制中的作用及其对ＣＯＰＤ气道为症的临床意义。结果,ＣＯＰＤ患者急性发作期痰ＩＬ－１６水平和缓解期均明显高于正常对照者。     

木犀草素抑制哮喘大鼠气道炎症的机制研究

目的探讨木犀草素抑制哮喘大鼠气道炎症的可能机制.方法取健康清洁级Wistar大鼠60只,随机分为木犀草素组、哮喘组、对照组,每组各20只.木犀草素组、哮喘组建立大鼠哮喘模型,建模过程中每次激发后1h给予哮喘组和对照组腹腔注射生理盐水,木犀草素组腹腔注射1 mg/kg的木犀草素.光镜下观察大鼠肺组织病理变化,测定支气管肺泡灌洗液中的细胞数及IL-4水平;免疫组化法检测p38MAPK,PPARγ蛋白表达情况;RTPCR检测p38MAPK,PPARγ的相对表达量.结果 3组大鼠支气管基底膜周径之间差异无统计学意义(P0.05);哮喘组大鼠平滑肌厚度、管壁厚度均明显高于对照组及木犀草素组大鼠(P0.05).哮喘组大鼠细胞总数、嗜酸粒细胞数、中性粒细胞数均明显高于木犀草素组和对照组(P0.05);木犀草素组细胞总数、嗜酸粒细胞数、中性粒细胞数均明显高于对照组(P0.05);哮喘组IL-4含量明显高于木犀草素组及对照组(P0.05);哮喘组大鼠p38MAPK蛋白表达明显高于对照组,PPARγ蛋白表达明显低于对照组(P0.05);木犀草素组大鼠p38MAPK蛋白表达明显低于哮喘组,PPARγ蛋白表达明显高于哮喘组(P0.05).哮喘组大鼠p38MAPK mRNA相对表达量明显高于对照组,木犀草素组表达量明显低于哮喘组(P0.05);哮喘组大鼠PPARγmRNA相对表达量明显低于对照组,木犀草素组表达量明显高于哮喘组(P0.05).结论木犀草素可能通过影响PPARγ表达和p38MAPK信号通路而发挥抑制哮喘大鼠气道炎症的作用.     

太子健II缓解期防治小儿哮喘作用机理的实验研究

运用鸡卵蛋白致敏和反复诱喘的哮喘豚鼠模型,将豚鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、高剂量和低剂量组5组,观察太子健II对其血及气道内嗜酸细胞浸润和血中白介素-5(IL-5)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)含量的影响.结果表明太子健II可减少哮喘豚鼠血及气道内EOS浸润,降低血中白介素-5(IL-5)和ECP的水平.说明太子健II可以减轻气道慢性变应性炎症,具有一定的抗哮喘复发的作用.     

吸入白细胞介素-5对支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞数及其活化状态的影响

随机选择8例哮喘患者雾化吸入人重组IL-5,分别吸入前、吸入后2 h、24 h和48 h进行外周血有核细胞计数和分类,以放射免疫法测定血清中嗜酸性阳离子蛋白(ECP)及总IgE水平.结果,吸入IL-5后嗜酸性粒细胞(EOS)占细胞总数的百分比、EOS绝对细胞数以及ECP水平均随时间而明显升高,至24 h达最高值,48 h后仍维持在较高水平;IL-5在整个实验过程中对血清总IgE水平无明显影响.表明,吸入IL-5不仅可以促使循环中EOS数明显增多,且还能招致其活化从而参与哮喘的发病过程.     

趋化素对肥胖哮喘小鼠气道IL-17表达的影响

为了研究趋化素（chemerin）对肥胖哮喘小鼠气道中IL-17表达的影响。通过酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学染色等方法研究了小鼠体内chemerin和IL-17的表达,选取了36只雄性C57BL/C小鼠随机分至6组,每组6只,分别为正常对照组,肥胖对照组,哮喘模型组,肥胖哮喘组,二甲双胍哮喘组,二甲双胍肥胖哮喘组。造模完毕后,收集各组小鼠血清、支气管肺泡灌洗液（BALF）、肺组织,检测血清及BALF中chemerin及IL-17浓度,进行BALF细胞计数与分类以及肺组织免疫组化染色。结果表明：与正常对照组、肥胖对照组及哮喘模型组相比,肥胖哮喘组小鼠血清及BALF中chemerin、IL-17浓度明显升高,BALF中嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数增多;经二甲双胍干预后,二甲双胍肥胖哮喘组小鼠chemerin及IL-17浓度较肥胖哮喘组小鼠降低,且各分类细胞计数减少。可见随着chemerin表达的减少,肥胖哮喘小鼠气道IL-17水平降低,chemerin可能参与了肥胖哮喘小鼠气道IL-17的表达。     

CD40在支气管哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞的表达

探讨过敏哮喘患者和正常人外周血嗜酸性粒细胞（EOS）表达CD40的差异,采集10例过敏性哮喘患者和8例正常对照者静脉血用于纯化EOS,以流细胞仪检测CD40在EOS表达的表达,EOS胞浆中的CD40蛋白则以铭疫细胞化学方法显示,结果表明,哮喘患者EOS表面存在CD40表达,但CD40并不表达于正常人EOS的表面,无论是哮喘患者还是正常人,其EOS的胞浆均可检测到CD40蛋白,人EOS均能合成和储存CD40,CD40分子可以移行到哮喘患者EOS的表达而不能移行到正常人EOS的表面,揭示CD40在哮喘的发病机理中具有某种作用。     

哮喘患者嗜酸性粒细胞富集群中P物质表达上调

检测哮喘患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中SP和NK1R的表达,并探讨了其在哮喘中的可能作用.收集志愿者的静脉血液,用过敏源粗提液刺激,流式细胞术检测SP和NK1R的表达.结果发现,哮喘患者SP~+嗜酸性粒细胞的比例升高了4倍,0.1μg/ml尘螨过敏源可诱导SP~+嗜酸性粒细胞的比例升高0.5倍,而NK1R~+嗜酸性粒细胞的比例降低了78%.上述结果提示嗜酸性粒细胞源的SP可能在哮喘中起作用,嗜酸性粒细胞表达的NK1R可能不参与哮喘发病或作用很小.     

哮喘小鼠骨髓DC细胞因子mRNA的分析

通过体外诱导和扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),研究其中的细胞因子mRNA表达,探讨DC在哮喘中可能的作用机制.为此,利用rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导骨髓细胞分化为DC,采用多探针模板的核酸酶保护分析检测骨髓来源的DC中细胞因子mRNA的转录.结果表明,在两种细胞因子的作用下,从骨髓中可以诱导出大量的DC;核酸酶保护分析显示骨髓来源的DC中有IL-13,IL-9和IL-3mRNA的转录,并且哮喘组表达IL-13mRNA和IL-9mRNA的相对水平与对照组相比有明显的差异性,P<0.05;而IL-3mRNA的表达在两组鼠中的表达水平没有差异性,P>0.05.可以认为DC在哮喘的形成和发展中起重要作用,提示了靶向于DC的治疗可能成为哮喘治疗的新目标.     

流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平.方法:采用BD CBA Flex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平.结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05).在ANLL亚型中,Ml型IL-6水平最高.结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性.     

大承气汤对支气管哮喘及肺肠合病Treg/TH17免疫机制的作用

目的 从“肺与大肠相表里”理论出发，以大承气汤通肠利肺作用为切入点，观察支气管哮喘（简称哮喘）及肺肠合病大鼠动物模型及在大承气汤方药干预下，肺与大肠之间共同免疫物质TH17/Treg的变化，探讨“肺与大肠相表里”的免疫机制.方法 建立哮喘组、肺肠合病组、大承气汤组哮喘干预组与肺肠合病干预组动物模型，检测各组大鼠外周血淋巴细胞中Th17/Treg亚群分布表达,及血清中 IL-17，IL-6，IL-2的水平.结果 与正常对照组比较，哮喘组及肺肠合病组大鼠外周血中Th17细胞比例升高，Treg细胞比例降低，血清中IL-6，IL-17水平升高，IL-2水平降低，有差异具有统计学意义（P＜0.005）；肺肠合病组大鼠组更明显（P＜0.005）.在大承气汤干预下，与哮喘组比较，哮喘干预组与肺肠合病干预组Th17细胞比例降低，Treg细胞比例升高，血清IL-6，IL-17水平下降，IL-2水平升高，差异有统计学意义（P＜0.005）.结论 哮喘发病时肠道功能的变化可能导致肺、肠TH17/Treg的免疫失衡，免疫反应向呼吸道粘膜等部位迁移，加重哮喘的发病.大承气汤是可以通过调节肠道TH17/Treg免疫，提高黏膜屏障功能，降低淋巴细胞的“归巢”作用，减轻哮喘发病.     

结肠癌患者血清中IL-8和VEGF的检测及临床意义

目的探讨白介素-8（IL-8）和血管内皮生长因子（VEGF）血清水平与结肠癌的关系．方法选择结肠癌住院患者64例,所有病例均经病理检查确诊．用ELISA法测定结肠癌患者术前、术后与健康者血清中IL-8和VEGF含量,采用方差分析进行组间两两比较．结果结肠癌患者血清IL-8和VEGF含量明显高于正常对照组（P〈0．05）,DukesC,D期结肠癌患者血清IL-8和VEGF含量明显高于A,B期（P〈0．05）;肿瘤根治术后血清IL-8和VEGF含量较术前明显降低（P〈0．05）,但仍高于正常对照组（P〈0．05）．结论检测血清IL-8和VEGF含量对于结肠癌病情估计和预后判断有重要意义．     

丙肝患者PBMC mIL-2R及T细胞亚群检测

为了探讨丙型病毒性肝炎( 丙肝)患者膜白介素- 2 受体( mIL- 2R) 和 T 细胞亚群的表达水平及其在丙肝发病机理中的作用,用生物素- 链霉亲和素法对 203 例抗- HCV 阳性患者外周血单个核细胞进行 T 细胞亚群及植物血凝素( PHA) 诱导前后mIL- 2R 的检测. 总体结果显示丙肝患者外周血单个核细胞( PBMC) mIL- 2R 和 T 细胞亚群表达水平降低,与正常对照组相比,差异显著( P < 0. 01) .其中, 在静息状态和在 PHA 诱导状态,其 mIL- 2R 表达水平与正常对照组相比均低下( P < 0. 01) , 但急慢性丙肝患者中T 细胞亚群及 mIL- 2R 表达水平类似( P > 0. 05) . 急慢性丙肝患者与正常对照组相比,外周血 CD⁺₃ , CD⁺₄ 百分率降低, CD⁺₈ 百分率增高, CD⁺₄ / CD⁺₈ 比值下降( 从 P < 0. 05 降至 P< 0. 01) .说明丙肝患者体内存在明显的细胞免疫功能紊乱, T细胞活化障碍, 并与肝病的慢性化有关.     

大鼠急性脑缺血及再灌注时白细胞介素(IL-6、IL-8)的变化及意义

目的 :探讨大鼠急性脑缺血及再灌注后白细胞介素 (IL - 6、IL - 8)含量的变化。方法 :制备大鼠急性脑缺血及再灌注模型 ,采用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测血清IL - 6、IL - 8含量。结果 :在脑缺血及再灌注过程中 ,IL - 6、IL - 8水平显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,并且IL - 6水平有着逐步升高的现象 ,而IL -8在脑缺血后 2 0min及再灌注 1h后其含量呈持续性显著增高 (P <0 .0 1) ;再灌注 1～ 48h内虽有所降低 ,但仍维持在一个相当高的水平。结论 :IL - 6、IL - 8参与了脑缺血再灌注的损伤过程     

维药神香草乙酸乙酯部位对大鼠实验性哮喘炎症反应的影响

 通过观察哮喘大鼠肺组织病理学改变,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中内皮素-1(ET-1)水平及细胞总数、淋巴细胞(Ly)、嗜酸性粒细胞(Eos)、中性粒细胞(Neu)的百分比,血清中的内皮素-1(ET-1)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,探讨神香草乙酸乙酯部位对哮喘炎症反应的影响,阐明维药神香草抗哮喘的部分作用机制。将大鼠随机分为正常对照组,哮喘模型组,氨茶碱阳性对照组,神香草乙酸乙酯部位高、中、低剂量治疗组。采用卵清白蛋白(OVA)、氢氧化铝及百白破疫苗联合致敏和OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘模型。测定BALF中细胞总数,Ly、Eos、Neu的百分比;采用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测血清及BALF中ET-1水平,放射免疫法检测血清中ET-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平。结果显示,与模型组相比,各治疗组大鼠BALF中细胞总数,Ly、Eos,Neu的百分比,ET-1水平及血清中的ET-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);神香草乙酸乙酯部位各剂量组之间相互比较,BALF及血清中的以上指标差异均有统计学意义(P＜0.05),呈剂量依赖性趋势。由此推测,维药神香草可能通过抑制IL-2、IL-6、ET-1、TNF-α、Ly、Eos、Neu的分泌,减轻哮喘的炎症反应。     

白介素-8与支气管哮喘之间关系的研究

支气管哮喘目前认为是由多种炎性细胞参与的气道慢性炎症，多种细胞因子在气道炎症发展过程中起重要作用。研究表明，白介素-8与支气管哮喘的发病密切相关。     

The PI-linked receptor FcRIII is released on stimulation of neutrophils

Human phagocytic cells express receptors for the constant (Fc) region of immunoglobulin G. Neutrophils carry Fc receptor II (FcRII; CDw32) and FcRIII (CD16) which both bind IgG-containing immune complexes, leading to phagocytosis of the complex and activation of the neutrophil. We find that patients with paroxysmal nocturnal haemoglobinuria (PNH) have only about 10% of the normal levels of FcRIII on their neutrophils, whereas the expression of FcRII is unaffected. We show that FcRIII is a phosphatidyl inositol (PI)-anchored protein in neutrophils. Analysis of FcRIII expression in cells of PNH patients, known to be deficient in PI-linked proteins, suggests FcRIII is not PI-linked in monocytes. We find that the synthesis of FcRIII in neutrophils from PNH patients appears normal, indicating that the defect lies in the PI linkage. This lipid linkage of the receptor on neutrophils suggests that its release may be important for its function, and indeed FcRIII release was observed on stimulation of neutrophils by an inflammatory bacterial peptide (f-Met-Leu-Phe), suggesting a role for FcRIII shedding in inflammatory reactions. Activation of the PNH neutrophils with IgG-coated latex beads appeared normal (although binding of dimer IgG complexes was reduced), indicating that FcRII, rather than FcRIII, is involved in neutrophil stimulation.     

Neutrophil elastase targets virulence factors of enterobacteria

Shigellae cause bacillary dysentery, a bloody form of diarrhoea that affects almost 200 million people and causes nearly 2 million deaths per year. Shigella invades the colonic mucosa, where it initiates an acute inflammation, rich in neutrophils, that initially contributes to tissue damage and eventually resolves the infection. Neutrophils are phagocytic cells that kill microorganisms but it is unclear how neutrophils control pathogenic bacteria expressing virulence factors that manipulate host cells. In contrast to other cells, neutrophils prevent the escape of Shigella from phagocytic vacuoles in which the bacteria are killed. Here we identify human neutrophil elastase (NE) as a key host defence protein: NE degrades Shigella virulence factors at a 1,000-fold lower concentration than that needed to degrade other bacterial proteins. In neutrophils in which NE is inactivated pharmacologically or genetically, Shigella escapes from phagosomes, increasing bacterial survival. NE also preferentially cleaves virulence factors of Salmonella and Yersinia. These findings establish NE as the first neutrophil factor that targets bacterial virulence proteins.     

IL-12在哮喘动物模型BALF中的动态变化及意义

目的观察哮喘动物模型支气管肺泡灌洗液（branchoalveolar lavage fluids，BLAF）中白介素-12（interleukine-12，IL-12）的动态变化及对嗜酸性细胞（eosinophile，EOS）凋亡指数的影响。方法将62只Wistar大鼠喂养7d后，随机分为正常对照组（6只）、哮喘组（56只），哮喘组又随机各取8只分为7个不同的时相组。哮喘各时相组于第1天及第7天用蛋白粉（ovalbumin，OVA）10mg、氢氧化铝20mg和生理盐水制成的2ml悬液腹腔注射致敏，对照组用生理盐水2ml腹腔注射；哮喘各时相组第15d开始均用1％OVA悬液雾化吸入激发，1次／d，1h／次，共7d，正常对照组用生理盐水代替1％OVA悬液，余同哮喘组。末次激发后，对照组1h麻醉，哮喘组分别于1h、8h、24h、48h、96h,7d和14d麻醉，各组麻醉后行支气管肺泡灌洗（branchoalveolar lavage，BAL），用流式细胞仪测定BLAF中EOS凋亡指数，用酶联免疫吸附法（enzynle linked immunosorbent assay，ELISA）测定IL-12浓度。结果哮喘各时相组BALF中，IL-12浓度的动态变化呈双峰，1h上升，8～24h迅速回落到低峰，48h再次上升，96h达到高峰，此后下降，14d降至对照组水平；而EOS凋亡指数的动态变化呈双峰，1h上升，而8h下降，24h降至低峰，48～96h快速上升，达到高峰，随后下降，14d降至对照组水平；IL-12与EOS凋亡指数呈同步变化，两者作直线相关分析呈正相关。结论在哮喘大鼠气道中，IL-12可能通过调节EOS凋亡指数，从而调节气道的炎症反应。