肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸提取方法比较与改进

为了得到一种高效的肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸(DNA)提取方法,比较OMEGA、天根、宝生物、全式金4种细菌基因组DNA提取试剂盒对肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA的提取效果,并对宝生物、全式金试剂盒提取方法进行优化;测定所提取的基因组DNA的纯度及浓度,并进行基因组完整性检验及特征基因检测。结果表明,使用全式金细菌基因组DNA提取试剂盒提取肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA时,通过增加溶菌酶孵育时长至40 min,同时蛋白酶K的用量增加1倍,基因组DNA提取浓度可提高约14.5倍。     

不同类型DNA提取试剂盒提取牦牛乳粉DNA效果的比较

以牦牛乳粉为材料,采用了细胞/组织/血液基因组提取试剂盒、植物基因组提取试剂盒及食物核酸提取试剂盒3种不同类型的DNA提取试剂盒提取牦牛乳粉的基因组DNA,使用核酸和蛋白质分析仪检测后表明3种提取方法获得的DNA浓度相近;使用牦牛线粒体中细胞色素b的DNA序列特异性探针引物对所得的3种DNA进行实时荧光PCR,都获得了特异性扩增。结果表明3种类型的DNA提取试剂盒提取的牦牛乳粉基因组DNA都可以用于牦牛乳粉的分子特异性研究,综合提取操作的难易程度、耗时长短、成本高低及提取DNA的浓度分析,细胞/组织/血液基因组提取试剂盒为最佳选择。但食物核酸提取试剂盒的提取步骤简单,消解更彻底,更适用于一次性提取较多样本的基因组DNA。     

唇鱼骨基因组DNA提取与ISSR-PCR的优化

以唇鱼骨为材料,分别采用4种不同方法(CTAB法、SDS法、ROSE法及试剂盒)提取基因组DNA,并对影响PCR反应的模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+、Taq酶浓度等主要因子进行了优化,建立了适合唇鱼骨基因组DNA的ISSR-PCR反应体系.25μL的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:约60 ng模板DNA,1.2 U Taq酶,0.4 μrnol/L引物,2.0 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,2%甲酰胺.结果表明,利用优化反应体系对4种不同方法提取的DNA进行PCR扩增,均能得到较好的PCR扩增条带,以试剂盒法最佳,为淡水溪流性同属鱼类遗传多样性分析奠定了技术基础.     

羊猪鸭基因组DNA提取及DNA条形码分子鉴定

筛选羊肉、猪肉及鸭肉基因组DNA提取方法,并进行DNA条形码鉴定.以羊猪鸭三种肉类为实验材料,采用传统法(SDS法)、chelex-100法、异硫氰酸胍法、试剂盒法提取基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和COI序列扩增法对提取的效果进行检测和比较,利用建立的方法提取DNA并进行DNA条形码鉴定.四种方法均能从样品肌肉组织提取到基因组DNA,其中SDS法和试剂盒法得到的DNA质量最佳;异硫氰酸胍法DNA质量较好,操作时间长; chelex-100法简单、快速,但DNA含杂质较多,质量较差.四种方法均可提供满足DNA条形码分子鉴定的要求DNA,实际应用中可根据条件选择相应的方法.     

不同方法提取水溞基因组DNA的比较

为获取抽提水溞基因组DNA的最适方法,本研究采用酚-氯仿法,CTAB法和试剂盒法3种方法提取水溞基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取的效果.结果表明3种DNA提取方法均获得较好的DNA,其中试剂盒方法提取的DNA最为理想,完全可满足后续分子生物学实验.     

摇蚊基因组DNA的提取方法研究

采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaCl法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).     

3种提取淡水涡虫基因组DNA方法比较

分别用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的酚-氯仿抽提法提取活体涡虫和95%酒精固定的涡虫标本的基因组DNA.结果显示:试剂盒法提取的基因组DNA质量最好,主要表现在分子完整,几乎无降解,并且该方法所得DNA的产率也比另外两种方法的产率要高,试剂盒法是最适合涡虫基因组DNA制备的方法.相同起始物质量条件下,3种方法从活体涡虫中提取的DNA量和纯度均高于95%酒精固定的涡虫标本,但试剂盒法提取95%酒精固定半年以上的涡虫标本,所得DNA产率较高、质量较好,可满足PCR扩增等分子生物学实验的要求.     

适于蓖麻遗传多样性分析的RAPD引物筛选

采用CTAB法提取蓖麻基因组DNA,对RAPD随机引物进行了筛选,从120条引物中筛选出多态性好、稳定性高的引物48条作为蓖麻RAPD分析引物,为进一步进行蓖麻分子遗传育种提供依据．     

菠菜基因组DNA提取方法与条件的研究

分别采用CTAB、SDS、高盐低pH三种方法从菠菜叶片中提取基因组DNA,通过A260/A280值、A260/A230值和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。研究提取缓冲液用量、水浴时间、蛋白质沉淀剂(氯仿-异戊醇)用量、DNA沉淀剂(异丙醇)用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响。并对CTAB法的提取条件进行了正交试验,优选出菠菜基因组DNA提取的适宜条件。     

三种血液基因组 DNA 提取方法的比较研究

摘要: 目的 比较采用 3 种不同 DNA 提取方法提取豚鼠血液基因组 DNA 之间的差异。方法 分别用新鲜抗凝血 NaI 手提法、血凝块手提法和试剂盒 DNA 提取法提取 20 只豚鼠血液基因组 DNA,用分光光度计测定、琼脂糖凝胶 电泳、PCR 扩增等方法对提取的 DNA 片段的完整性、浓度、纯度和用于 PCR 扩增的效果等方面进行比较研究。结 果 新鲜抗凝血 NaI 手提法提取的 DNA 完整性、浓度和纯度均为最高; 血凝块法提取的 DNA 浓度和抗凝血提取的 DNA 浓度接近但纯度最低,有一定程度的断裂和降解; 试剂盒法提取的 DNA 浓度最低,纯度和完整性处于中间,但 三种方法提取的 DNA 都可用于 PCR 扩增反应。结论 3 种方法都可以提取基因组 DNA 并且所提取的 DNA 均能 满足后续 PCR 扩增实验的要求,但每种方法各有利弊,可根据具体的条件选择适宜的方法。     

蓖麻的花粉形态及营养成分研究

本文采用扫描电子显微镜及透射电子显微镜对蓖麻的花粉形态、外壁的层次及表面纹饰进行了系统观察，报道花粉的氨基酸、维生素、矿质元素等营养成分的分析测定结果，为蓖麻花粉的开发利用提供科学依据。     

PEG胁迫对蓖麻种子吸胀萌发的影响

本试验采用PEG-6000模拟干旱条件,研究渗透胁迫对蓖麻种子吸胀和种子萌发的影响.结果表明,蓖麻种子吸胀速率均随PEG处理浓度的增加而降低;5%的PEG处理能促进蓖麻种子萌发,10%和15%浓度的PEG处理对蓖麻种子萌发起到明显抑制;蓖麻种子萌发期可溶性糖和脯氨酸含量的变化均随着PEG浓度的增加先升高后降低,5%的PEG处理蓖麻种子可溶性糖含量最高,10%的PEG处理蓖麻种子脯氨酸含量为最高;哲蓖3号种子的抗渗透胁迫能力强于其它3个品种.     

异质生境芦苇叶片的生长规律

对沈阳丁香湖湿地和武汉湿地芦苇的叶片生物量和生长规律进行比较分析.结果表明,沈阳湿地芦苇叶宽与叶长、叶长与叶重、叶宽与叶重之间的生长关系均呈现幂函数的变化规律,达到极显著相关.武汉湿地芦苇叶宽与叶重间生长关系呈线性函数规律,达到极显著相关水平.武汉地区芦苇叶重大于沈阳湿地样本.沈阳地区芦苇叶长和叶宽都大于武汉地区芦苇样本,说明沈阳和武汉湿地芦苇叶片生长具有明显的生态可塑性,沈阳地区芦苇叶片长度、宽度、重量等特性的生长为异速生长,而武汉地区芦苇叶片特性为同速生长.本研究为深入了解植物叶片生长规律提供了依据.     

沪苏皖主要非粮生物柴油能源植物资源的调查与含油量分析

通过对沪苏皖三地非粮生物柴油能源植物的调查及种子含油量的测定,初步了解了沪苏皖现有非粮生物柴油能源植物的资源特点和分布状况.结果显示:沪苏皖三地非粮生物柴油能源植物含油量在10%以上的有59科123属151种.其中高含油量(50%以上)的能源植物主要包括樟科的江浙山胡椒Lindera chienii、狭叶山胡椒L.angustifolia和红脉钓樟L.rubronervia,卫矛科的白杜Euonymus maackii,大戟科的油桐Vernicia fordi、蓖麻Ricinus communis和山茶科的油茶Camellia oleifera等.调查发现目前只有大戟科的乌桕Triadica sebifera被有效开发利用,山茶科的油茶和大戟科的油桐较少利用,山茶科的茶C.sinensis广泛种植但种子却没有被利用.最后,本文针对沪苏皖非粮生物柴油能源植物的资源状况与分布特点及其开发潜力提出了对应的建议.     

蓖麻毒蛋白研究进展

蓖麻毒蛋白是在蓖麻中发现的,有很强的毒性,可抑制蛋白合成的蛋白质．作为一种重要的抗肿瘤药物及生物杀虫剂具有广阔的应用前景．对蓖麻毒蛋白的结构、毒性作用机理、纯化方法及其在肿瘤导向治疗和生物杀虫方面的研究进展进行了简述．     

不同保存条件下白刺属植物基因组DNA的提取

以硅胶干燥的白刺叶片为材料,分别在-84℃、-20℃冰箱保存和常温保存,对三种不同保存条件下的白刺叶片进行DNA的提取,结果表明,在-84℃和-20℃冰箱里保存1～2年的材料均可采用3×CTAB法有效去除多糖、酚及蛋白质,可获得高质量基因组DNA,而常温保存半年的材料无法获得DNA．通过进行ISSR—PCR实验,提取的DNA扩增均可得到稳定、清晰、多态性好的PCR扩增图谱,-84℃保存的材料所得到的DNA在ISSR—PCR扩增中条楷数目和清晰唐明昴优于-20℃保存的材料．     

青檀基因组DNA提取方法的优化

以青檀(Pteroceltis tatarinowii Maxim.)的叶片为材料,采用改良高盐低pH值法、改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法4种不同方法提取其基因组DNA,并进行电泳分析、质量检测及ISSR引物扩增检测.结果表明,改良CTAB法优于其它方法,提取的DNA质量较好,纯度较高,能满足进一步的实验要求.     

Structure and evolution of ricin B chain

Ricin is a dimeric toxin from the castor bean Ricinus communis, which is composed of a sugar-binding subunit (B) that attaches to receptors on the surfaces of target cells and a subunit (A) with enzymatic activity that attacks and inactivates ribosomes. We report here that comparison of amino-acid sequence data with high-resolution structure analysis of the ricin B subunit shows it to be the product of a series of gene duplications. The modern protein has two sugar-binding domains, each of which is composed of three copies of a more ancient galactose-binding peptide of about 40 residues.     

生菜遗传转化受体系统的建立及鲑鱼降钙素基因的导入

以散叶生菜大速生(Lactuca sativa var.capatata L.)为试材，以MS为基本培养基。采用不同激素配比，确定生菜高效诱芽培养基为MS 0．1 mg／L6-BA 0．05mg／LNAA；抗生素敏感性试验表明，筛选培养基中适宜的卡那霉素选择压为75mg／L，抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300mg／L；通过根癌农杆菌介导的叶盘法将鲑鱼降钙素(sCT)基因转入大速生散叶生菜，PCR检测转化率达25．4％。     

四种植物25S rRNA sarcin/ricin结构域甲基化核苷的分析

应用不同浓度的dNTP逆转录反应，分析丁苦瓜、丝瓜、蓖麻和水稻的25SrRNA sarcin/ricin区域中的甲基化核苷，发现了这4种植物25SrRNA的第3023、2966和2962位的腺嘌呤、胸腺嘧啶和腺嘌呤是2’-0-甲基化核苷；在丝瓜和苦瓜25SrRNA的第2992、2990位的胞嘧啶和鸟嘿吟是葫芦科植物所特有的两个2’-0—甲基化核苷；第2994位点的尿嘧啶是苦瓜、丝瓜、蓖麻和水稻的一个碱基甲基化核苷；而且，植物25SrRNA第3023位甲基化腺嘌呤核苷刚好位于sarcin/ricin结构域的茎环上，与核糖体失活蛋白切割位点相距仅5个核苷酸，而在哺乳动物和酵母的rRNA相同位点上没有甲基化修饰的存在，根据这一结果推测，RIPS来源植物核糖体RNA的自我保护可能与这一位点的修饰有关。