脑特异性高表达蛋白TMEM59L诱导细胞凋亡的机制

TMEM59L为近年来新发现的脑特异性高表达蛋白,具有促凋亡效果,但其具体的凋亡机制还不清楚.构建了TMEM59L重组质粒,并在HEK293T细胞中过表达TMEM59L,用Annexin V-FITC/PI双染法确定了TMEM59L可以诱导细胞凋亡,之后用免疫印迹方法检测细胞内凋亡相关分子激活情况.结果显示,外源TMEM59L可以降低Bcl-2的蛋白表达水平,诱导细胞色素c从线粒体释放进入细胞质,并且激活caspase-9、caspase-7和caspase-3,但不激活caspase-8;活化的caspase-7和caspase-3进一步酶解死亡底物PARP,导致细胞凋亡;此外,用广谱caspase抑制剂Z-Val-Ala-Asp-FMK(Z-VAD-FMK)抑制caspase-7和caspase-3活性后,死亡底物PARP的酶解也基本被抑制.由此可见,TMEM59L是通过caspase依赖的线粒体途径诱导HEK293T细胞凋亡.     

Bcl-2和Caspase-3在HT诱导的HL-60细胞凋亡中的作用

利用常规的HL－60细胞和转染了 bcl－2基因的HL－60/Bcl-2细胞及转染了空载体的对照HL－60／neo细胞为模型,研究Caspase-3及过表达的Bcl-2对凋亡过程中的各种生化,形态学特征的影响,探讨了Caspase-3及Bcl-2在三尖杉酯碱（HT）诱导的HL－60细胞凋亡中的作用,研究表明,Caspase-3的湃化在HT诱导的HL－60细胞凋亡中处于关键地位,导致了质膜出泡,PS翻转,染色质凝集,DNA断裂及凋亡下游的发生,而Bcl-2则通过抑制aspase-3的活化抑制了凋亡的发生,同时还证明,在HT诱导的HL－60细胞凋亡中,通常被认为是凋亡早期特征的磷脂酰丝氨酸PS翻转并不是一个早期特征,它至少晚于Caspase-3的活化,甚至不早于质膜出泡及染色质凝集。     

异甘草素诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡的研究

为探讨异甘草素对小鼠黑色素瘤B16F0细胞诱导凋亡的影响。采用SRB法检测异甘草素对B16F0细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法检测细胞致死率;吖啶橙/溴乙啶荧光染色法观察细胞凋亡形态;AO/EB和Hoechst 33258染色观察药物处理后细胞形态的变化;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染发检测细胞凋亡率;caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9和半胱氨酸蛋白酶-3的活性;QPCR法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞-2,Bcl-2相关X蛋白的m RNA表达。结果显示,异甘草素能有效抑制B16F0细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性,作用于B16F0细胞后呈现出明显的凋亡形态,同时随着异甘草素浓度的增加(0、24、45、65μg/m L),细胞凋亡率增加;caspase-9,caspase-3活性逐渐升高;Bax/Bcl-2比率上调(P0.05或P0.01)。由此可知,异甘草素能够显著诱导小鼠黑色素瘤B16F0细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

莱菔硫烷通过线粒体诱导HepG-2细胞凋亡

探讨莱菔硫烷 (SFN)通过线粒体途径诱导HepG-2细胞凋亡的机制.不同剂量SFN处理体外培养的HepG-2细胞株48 h,流式细胞仪检测SFN对HepG-2细胞凋亡率影响;采用Western Blot法测定SFN对HepG-2细胞Cyt-c蛋白表达的影响;酶活性检测试剂盒测定SFN对HepG-2细胞内caspase-3和caspase-9酶活性的影响.SFN能够有效地诱导HepG-2细胞凋亡,10、20、40 μmol/L的SFN 作用于HepG-2细胞48 h后,与对照组比较凋亡率显著升高(P<0.01),并呈剂量依赖性;SFN可使HepG-2细胞胞浆中Cyt-c蛋白含量升高,与对照组比较差异显著(P<0.05);同时使细胞内caspase-3和caspase-9的活性升高,并呈一定的剂量依赖性.SFN可诱导人肝癌HepG-2细胞的凋亡,可通过促进Cyt-c的释放,进而激活caspase-9,再激活下游caspase-3,最终引起细胞凋亡.     

BH3类似物对乳腺癌细胞的促凋亡作用

通过查找NCBI的Gene数据库,发现Bcl-2家族抗凋亡成员的mRNA在大部分乳腺癌细胞系中高表达.根据以往文献报道,Bcl-2家族抗凋亡成员的高表达能够促进肿瘤的生长.BH3类似物是一类针对Bcl-2家族抗凋亡成员的新型靶向抑制剂.据此,在7种乳腺癌细胞系中测试了3种BH3类似物对细胞增殖的影响.在两种细胞系中通过克隆形成实验和TUNEL实验研究了BH3类似物对单个肿瘤细胞增殖和细胞群体凋亡的影响.结果表明,ABT-737对大部分乳腺癌细胞系有明显的生长抑制作用;ABT-199对大部分乳腺癌细胞系有一定抑制作用;Tw-37对两种乳腺癌细胞系有较强抑制作用,这些抑制作用是通过细胞凋亡产生的.Bcl-2家族抗凋亡成员对于T47D和BT-549细胞系的存活不是非常重要.联合用药实验表明ABT-737在BT-549和T47D细胞系中可以增强阿霉素和紫杉醇的作用.综上所述,BH3类似物可以通过细胞凋亡的途径引起乳腺癌细胞的死亡,同时Bcl-2家族抗凋亡成员可能可以成为治疗乳腺癌的新靶点.     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

FAM105A通过caspase依赖性途径和Bcl-2家族诱导细胞凋亡

在多细胞有机体中,细胞凋亡对调节正常细胞活动和发育起着关键作用.对参与细胞凋亡的蛋白的鉴定及其机制的阐明具有重要意义.FAM 105 A是新发现的促凋亡基因,过表达会导致细胞凋亡.研究了FAM105A促进细胞凋亡的潜在机制,结果表明,在HEK293T细胞中过表达FAM105A会导致caspase-3和caspase-9的剪切/激活,同时伴随着多聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP ribose polymerase,PARP)的切割/失活.此外,过表达FAM105A能诱导细胞色素c(Cyt c)从线粒体释放到胞质,促凋亡蛋白Bax的表达水平升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降.这些结果表明FAM105A诱导的细胞凋亡过程需要caspase依赖性途径和Bcl-2家族共同参与.     

γ—射线诱发的人AHH—1淋巴细胞凋亡及其机制研究

研究γ-射线诱发的人AHH-1淋巴细胞凋亡规律和发生机制,用MGG、TUNEL染色,MTT、免疫组化和电镜观察,经0、3、6、9、12、15、20Gyγ-射线照射后,AHH-1淋巴细胞凋亡、活存率以及Bax、Bcl-2、Bcl-xl等凋亡相关蛋白表达的变化。结果：（1）3-12Gy照射范围内,凋亡是AHH-1细胞死亡的主要方式,且6-12Gy范围内呈现较好的量效关系;（2）15-20Gy照射后,凋亡率下降,推测此时除凋亡外,坏死也是AHH-1细胞死亡的主要途径;（3）不同剂量照射后,AHH-1细胞凋亡率在24h达到高峰;3-12Gy照射范围内,细胞活存率随照射剂量的增加而下降,15-20Gy照射后,下降趋势趋于平缓。结论认为一定剂量γ-射线照射可诱发人AHH-1淋巴细胞出现大量凋亡,且在一定范围内呈现较好的量效关系。     

聚ADP核糖基聚合酶的抑制剂苯甲酰胺在肺癌细胞PG凋亡中的作用

研究了聚ADP核糖基聚合酶（PARP）抑制剂苯甲酰胺（BA）在DNA损伤所造成的肺癌细胞（PG）凋亡过程中的作用,分别用MNNG（N－甲基－N－亚硝基氮亚硝基胍）和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。     

自组装纳米荧光探针用于caspase-3的检测

半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)是细胞凋亡过程中的主要效应子之一,在多种疾病的检测中扮演重要角色,对其在低浓度下的检测是早期发现肿瘤细胞的有效手段.参考近期发现的caspase-3剪切诱导发生的高效缩合反应,设计了化合物Ac-Asp-Glu-Val-Asp-Cys(StBu)-Lys(FITC)-CBT(1),通过TCEP(三(2-羧乙基)膦)还原以及在细胞凋亡过程中高表达的caspase-3的特异性识别剪切后发生缩合反应,其二聚体产物亲脂亲水性发生变化,可以自组装形成纳米粒子,并由于聚集荧光淬灭效应导致荧光强度较反应前大幅降低,从而实现caspase-3的检测.反应生成的纳米粒子通过高效液相色谱、动态光散射仪以及透射电镜等手段进行表征,表明化合物1可以在低物质的量浓度下由几个单位的蛋白酶成功剪切缩合并自组装成纳米荧光探针,其荧光强度降低幅度与酶的含量在一定范围内成线性关系,可用于caspase-3酶在低浓度下的检测.     

线粒体参与了三尖杉酯碱诱导的HL-60细胞凋亡

用流式光度术研究了三尖杉酯碱诱导人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞及其转染了ｂｃｌ－２基因的细胞株ＨＬ－６０／Ｂｃｌ－２线粒体膜电势的变化,数据表明线粒体损伤介导了ＨＴ诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡过程。     

Programmed cell death in Laminaria japonica (Phaeophyta) tissues infected with alginic acid decomposing bacterium

TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) is a sensitive and valid method for detecting DNA cleavage in programmed cell death (PCD). Using this method, DNA cleavage was observed in Laminaria japonica sporophytic tissues, which were infected with alginic acid decomposing bacterium. It was found that DNA cleavage occurred 5 min after the infection, the fragments with 3′-OH groups of cleaved nuclear DNA increased with time of infection and spread from the infection site. Although no typical DNA ladder (200 bp/180 bp) was detected by routine agarose gel electrophoresis, the cleavage of nuclear DNA fragments of 97～48.5 kb could be detected by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). By using CaspGLOWTM fluorescein active caspase-3 staining method, caspase-3 activity has been detected in response to the infection of alginic acid decomposing bacterium. Our results are similar to the observations in hypersensitive response (HR) of higher plant, suggesting that the rapid cell death of L. Japonica infected by alginic acid decomposing bacterium might be involved in PCD, and indicating that the occurrence of PCD is an active defense process against the pathogen's infection.     

Apoptosis initiated by Bcl-2-regulated caspase activation independently of the cytochrome c/Apaf-1/caspase-9 apoptosome

Apoptosis is an evolutionarily conserved cell suicide process executed by cysteine proteases (caspases) and regulated by the opposing factions of the Bcl-2 protein family. Mammalian caspase-9 and its activator Apaf-1 were thought to be essential, because mice lacking either of them display neuronal hyperplasia and their lymphocytes and fibroblasts seem resistant to certain apoptotic stimuli. Because Apaf-1 requires cytochrome c to activate caspase-9, and Bcl-2 prevents mitochondrial cytochrome c release, Bcl-2 is widely believed to inhibit apoptosis by safeguarding mitochondrial membrane integrity. Our results suggest a different, broader role, because Bcl-2 overexpression increased lymphocyte numbers in mice and inhibited many apoptotic stimuli, but the absence of Apaf-1 or caspase-9 did not. Caspase activity was still discernible in cells lacking Apaf-1 or caspase-9, and a potent caspase antagonist both inhibited apoptosis and retarded cytochrome c release. We conclude that Bcl-2 regulates a caspase activation programme independently of the cytochrome c/Apaf-1/caspase-9 'apoptosome', which seems to amplify rather than initiate the caspase cascade.     

以bcl-2为靶标siRNA-2提高HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性

目的:研究以bc l-2基因为靶标有效siRNA-2(sm all interference RNA)能否提高HL-60细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性。方法:将siRNA-2转入HL-60细胞株并与Ara-C联合培养,于24、48、72 h,用MTT法检测细胞增殖生长,用流式细胞仪检测HL-60细胞bc l-2蛋白的表达率、细胞内活性氧(ROS)水平变化及细胞线粒体膜电位的变化。结果:siRNA-2明显提高HL-60细胞对Ara-C敏感性;抑制细胞bc l-2蛋白的表达,提高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位(P<0.05)。结论:siRNA-2能提高白血病细胞HL-60对Ara-C敏感性。     

Fas在云芝糖肽诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的：探讨云芝糖肽（PSP）诱导HL-60细胞凋亡的Fas死亡受体信号转导途径．方法：观察PSP处理后HL-60细胞的形态变化，并采用流式细胞仪及免疫印迹检测细胞Fas，FADD蛋白的表达及Caspase-8凋亡酶的激活．结果：100，400g／mLPSP处理HL-60细胞48h后，细胞出现明显凋亡特征，同时伴随Caspase-8酶原被激活和Fas抗原的表达量增加，表现为剂量依赖关系．400g／mLPSP处理36h时Caspase-8酶原开始被剪切激活，48h时激活更为显著．各实验组FADD的表达量基本没有变化．结论：Fas死亡受体信号可能参与了PSP诱导HL-60细胞凋亡．     

Spinal cord decompression reduces rat neural cell apoptosis secondary to spinal cord injury

Objective: To determine whether spinal cord decompression plays a role in neural cell apoptosis after spinal cord injury. Study design: We used an animal model of compressive spinal cord injury with incomplete paraparesis to evaluate neural cell apoptosis after decompression. Apoptosis and cellular damage were assessed by staining with terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated deoxyuridine triphosphate nick-end labelling (TUNEL) and immunostaining for caspase-3, Bcl-2 and Bax. Methods: Experiments were conducted in male Sprague-Dawley rats (n=78) weighing 300~400 g. The spinal cord was compressed posteriorly at T10 level using a custom-made screw for 6 h, 24 h or continuously, followed by decompression by removal of the screw. The rats were sacrificed on Day 1 or 3 or in Week 1 or 4 post-decompression. The spinal cord was removed en bloc and examined at lesion site, rostral site and caudal site (7.5 mm away from the lesion). Results: The numbers of TUNEL-positive cells were significantly lower at the site of decompression on Day 1, and also at the rostral and caudal sites between Day 3 and Week 4 post-decompression, compared with the persistently compressed group. The numbers of cells between Day 1 and Week 4 were immunoreactive to caspase-3 and B-cell lymphoma-2 (Bcl-2)-associated X-protein (Bax), but not to Bcl-2, correlated with those of TUNEL-positive cells. Conclusion: Our results suggest that decompression reduces neural cell apoptosis following spinal cord injury.     

白藜芦醇上调GDF-15调控PI3K/Akt/Bcl-2信号通路对急性心肌梗死大鼠的保护作用

为考察白藜芦醇对心肌缺血的保护机制,采用冠状动脉前降支结扎再灌注制备大鼠心肌缺血再灌注(I/R)模型,运用试剂盒考察血清酶学指标、NBT染色考察心肌梗死率、蛋白质印迹法(Western blotting) 考察GDF-15、PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax、caspase-9和caspase-3的蛋白相对表达量。结果表明:白藜芦醇对心肌缺血再灌注大鼠的心肌保护作用与通过对GDF-15的上调来激活PI3K/Akt信号通路,抑制心肌细胞线粒体凋亡作用机制有关。     

nm23-H1基因与人早幼粒白血病细胞HL-60增殖的相关性分析

目的探讨nm23-H1基因的表达与白血病细胞HL-60增殖之间的关系。方法：以25ng／mL阿糖胞苷处理HL-60细胞，MTT法测定细胞生长抑制率，NBT还原比色法判断细胞分化状况，RT-PCR检测nm23-H1基因表达的变化；构建nm23-H1基因的真核表达质粒pEGFP-N1-nm23-H1，转染HL-60细胞，通过细胞生长曲线和血清依赖性实验检测nm23-H1基因的过表达对HL-60细胞生长的影响。结果：小剂量Ara-C对HL-60细胞的生长呈时间依赖性抑制，作用4d后细胞NBT还原能力增强且nm23-H1基因的表达下调；转染nm23-H1基因的HL-60细胞生长加快、血清依赖性下降。结论：Ara-C对HL-60细胞增殖的抑制作用与下调nm23-H1基因的表达有-定关系；nm23-H1基因在HL-60细胞中的过表达有促细胞增殖的作用，即增高了HL-60细胞的恶性程度。     

As4S4诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关分子机制研究

研究AS4S4对宫颈癌Hela细胞生长抑制厦诱导凋亡作用，并探讨可能的分子机制。以不同浓度的AS4S4分不同时间段处理Hela细胞，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率；采用流式细胞术测定细胞凋亡；Western blotting测凋亡相关蛋白Bcl-2，Caspase3表达的变化。结果表明，经AS4S4处理的Hela细胞，增殖受到抑制，作用呈明显的时效和量效关系，细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性；Western blotting示Bcl-2表达下降，Caspase3表达增加。因此，AS4S4对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用，其机制与下调Bcl-2蛋白、上调Caspase3蛋白表达有关。