肝素—琼脂糖凝胶4B的制备及在肝生长因子提取纯化中的…

以琼脂糖凝胶为载体，肝为配基，乙腈活化扣经环氧氯丙烷偶联，制得肝素－琼脂糖凝胶，经间接法测定，偶联率为２．４７５ｍｇ肝素／ｇ湿重琼脂糖凝胶。与Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司的Ｈｅｐａｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ比较，两种凝胶对肝细胞生长因子的亲和能力、层析行为及重复使用性能等方面非常相似，且自制凝胶的成本仅为进口的１／２０，解决了ＨＧＦ纯化过程中的关键步骤，使大量提取生产ＨＧＦ成为可能。     

大片吸虫谷胱甘肽S-转移酶的提纯及生化分析

用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析法从中国广西水牛源大片吸虫（Ｆａｓｃｉｏｌａｇｉｇａｎｔｉｃａ）成虫体内提纯大片吸虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＦｇＧＳＴ）。提纯的ＦｇＧＳＴ在１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现二条清晰谱带,分子量分别为２６．５ｋＤ和２８ｋＤ。以ＣＤＮＢ为标准底物测得ＦｇＧＳＴ的活力为１７．０８μｍｏｌ／ｍｉｎｍｇ。用谷胱甘肽亲和层析柱纯化的ＦｇＧＳＴ,不仅纯度好,而且获得率高,所得ＦｇＧＳＴ至少占上柱上清液总蛋白含量的３．１％。     

环丙烯异构化反应的理论研究

用量子化学理论方法研究了环丙烯单重态的异构化反应．结果表明,该异构化反应为放热反应,放出的热量为９３．３９ｋＪ／ｍｏ１（ＭＰ２／６－３１Ｇ＊／／ＨＦ／６－３１Ｇ＊）;该反应的势垒高度为４１３．６２ｋＪ／ｍｏ１（ＭＰ２／６－３１Ｇ＊／／ＨＦ／６－３１Ｇ＊）,异构化反应不易进行．计算了反应中有关物种的结构数据．通过内禀反应坐标（ＩＲＣ）计算,获得了沿反应途径的势能剖面     

血清促肝细胞生长素的检测与意义

目的；建立人血清中促肝细胞生长素（ＨＧＦ）的免疫学检测方法，厂家直病患血清中ＨＧＦ水平的变化及其临床意义。方法：自人胎肝匀浆中提取、纯化ＨＧＦ，免疫家兔制备抗血清，建立双抗体夹心法的ＨＧＦ测定技术。结果：Ｘ经的ＨＧＦ于ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ呈条带，分子量１７５００。正常人血清中ＨＧＦ水平为２８－１４０μｇ／Ｌ。各型肝病患和ＳＬＥ患血清中ＨＧＦ都有不同程度的升高。结论：动态观察肝病患血清中ＨＧＦ     

GnRH对虎纹蛙LH和FSH分泌活动的调节作用

通过在体和离体实验,研究了ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ对生殖前期虎纹蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的合成与分泌的影响．结果表明：在体条件下,ｍＧｎＲＨ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激♀蛙和♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的释放,也能显著升高♀蛙垂体ＬＨ的含量,但对♂蛙垂体ＬＨ及ＦＳＨ的含量无明显影响;ｃＧｎＲＨ－Ⅱ能极显著升高♀蛙垂体ＦＳＨ的含量．在刺激♀蛙垂体ＬＨ的合成、释放以及♂蛙垂体ＦＳＨ的释放方面,ｍＧｎＲＨ的作用显著强于ｃＧｎＲＨ－Ⅱ．离体实验中,０．１ｎｇ／ｍＬ的ｍＧｎＲＨ和１ｎｇ／ｍＬ的ｃＧｎＲＨ－Ⅱ都能极显著刺激离体♀蛙垂体碎片ＬＨ的释放．     

蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

采用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０、ＣＭ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ３２柱层析，从中华眼镜蛇中分离出神经生长因子（Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｅｒ，ＮＧＦ）。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法证明所得以的ＮＧＦ为单一组分，相对分子质量约为１．３×１０＾４。经凝胶等电聚焦电泳测得ＮＧＦ等电点ＰＩ约为７．０左右。经ＨＰＬＣ及电泳图像分析系统测得纯度为９８％。此ＮＧＦ等８ｄ鸡胚背     

JH11Fab′片段的制备及其在人肝癌裸鼠模型的放射免疫显像

利用胃蛋白酶酶切单克隆抗体ＪＨ１１,经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分离获得ＪＨ１１Ｆａｂ′,得率约１５％．用氯胺Ｔ碘标法制备１３１Ｉ－ＪＨ１１Ｆａｂ′,观测其在荷人肝细胞癌ＢＥＬ－７４０２裸鼠模型的定位显像作用,腹腔注射１３１Ｉ－ＪＨ１１Ｆａｂ′后２４～１２０ｈ,肿瘤部位放射性物质浓集,并清楚显像,其中尤以９６ｈ为佳．１３１Ｉ－ＪＨ１１Ｆａｂ′注射后９６ｈ,在１３种器官的Ｔ／ＮＴ比值均大于３．０,肿瘤的定位指数为３．８０．这表明ＪＨＦａｂ′片段在肝细胞癌的定位显像和导向治疗中有一个更好的应用前景．     

水合二氟化钴脱水反应动力学的研究

利用非等温热分析方法研究了水合二氟化钴脱水反应动力学。实验数据经Ｆｒｅｅｍａｎ－Ｃａｒｒｏｌｌ法及Ｃｏａｔｓ－０Ｒｅｄｆｅｒｎ法处理,获得脱水反应动力学方程为ｄａ／ｄｔ＝Ａ．ｅｘｐ（－Ｅ／ＲＴ）．（１－α）,反应级数ｎ＝１．０,活化能Ｅ＝１０６．４ＫＪ／ｍｏｌ,频率因子Ａ＝２．９９８＊１０＾１１Ｓ＾－１,ＥＴ ＨＡＤＮＩＳＩＦ ＣＦ ＲＣ ＹＩＤ ＳＭ ＧＪ ＦＪＴＦＢ     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

小鼠集落刺激因子（CSFs）的体外诱导研究

用体外淋巴细胞培养系统，对一些非淋巴因子诱导小鼠脾细胞产生集落刺激因子（ＣＳＦｓ）进行研究的结果发现，静止的小鼠脾细胞对原激酶（ＵＫ）不产生应答，只有当ＣｏｎＡ刺激后才能产生ＣＳＦｓ；表皮生长因子（ＥＧＦ）与ＣｏｎＡ协同作用能明显诱导ＣＳＦｓ的产生．人绒毛膜促性腺激素（ＨｃＧ）可直接作用于静止的脾细胞，使其产生ＣＳＦＳ．剂量依赖试验表明当ＵＫ为１６００ＩＵ／ｍｌ，ＥＧＦ为２０ｎｇ／ｍｌ，ＨＣＧ为４００ＩＵ／ｍｌ时所诱导的ＣＳＦｓ活性达到最高值．此外，ＣＳＦｓ的诱导还具有时间依赖关系．ＵＫ作用６０ｈ，ＥＧＦ和ＨＣＧ作用４８ｈ诱导产生的ＣＳＦｓ活性达到最高值．ＨＣＧ抗体中试验进一步说明ＨＣＧ可直接作用于脾细胞．联苯胺染色结果表明ＵＫ．ＥＧＦ和ＨＣＧ诱导的条件培养液中均不含红系集落刺激因子．     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

锌指蛋白ZNF191(243-368)G321A;N324L;G321A/N324L突变体的制备和表征

通过分子生物学的蛋白质工程方法对锌指蛋白ZNF191(243—368)的第三锌指区(Gly321和Asn324进行了定点突变，在大肠杆菌BL21中表达，通过DEAE52，CM23，肝素柱CL-6B纯化，最终获得了ZNF191(243—368)(G321A；N324L；G321A／N324L等3个突变体蛋白，运用凝胶电泳、UV光谱、EDTA滴定、金属离子(Co^2’，Ni^2 )取代等方法对突变体蛋白进行了初步表征，这为今后进一步研究该蛋白的结构和功能提供了必要的物质基础。     

Separation and Purification of Thrombin-like Enzymes by Affinity Adsorbents

An affinity adsorbent, benzamidineSepharose 4B, was used to separate and purify thrombinlike enzymes. The paminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombinlike enzyme-defibrase was used as a model in order to evaluate the efficiency of this biospecific affinity adsorbent. The homogeneity of the enzyme preparation was comfirmed as one band on sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis.     

ConA—Sepharose 4B的制备及其对血浆糖蛋白的亲和效率

报道了ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的制备方法，经测定Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ对ＣｏｎＡ的偶联效率达８５％，该亲和凝胶对血浆糖蛋白有亲和吸附．其亲和效率为１．８ｍｇ（蛋白／ｍｌ凝胶）．     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

粘虫血淋巴溶菌酶的纯化及其对染病小白鼠的初试

给粘虫注射大肠杆菌，血淋巴中溶菌酶活性增强，然后用琼脂糖（ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ）离子交换层析法纯化溶菌酶。小白鼠先注射致病的阴沟肠杆菌，一小时后腹腔注射从粘虫免疫血淋巴纯化的溶菌酶，结果处理小白鼠死亡率比对照组低，说明试虫血淋巴中的溶菌酶在小白鼠体内可能有一定的抗菌作用。     

多级色谱纯化牛胎盘免疫调节多肽及性质测定

使用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换色谱、Sephadex G-25 凝胶色谱和Sephasil C18反相高效液相色谱等分离纯化技术,采用体外培养淋巴细胞增殖试验,从牛胎盘提取液中分离出了具有免疫调节活性的多肽。免疫调节多肽对淋巴细胞增殖的促进作用具有剂量依赖性。纯化后的免疫调节多肽经过毛细管电泳(CE)鉴定为单一组分。毛细管等电聚焦电泳(CIEFE)测定多肽的等电点是3.82。基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽的相对分子质量为2134。蛋白质测序仪测定多肽的序列为Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr。     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。     

benztropine类多巴胺转运蛋白配体的QSAR研究

利用Hansch方法，研究了37种benztropine类化合物diphenylmethoxy部位苯环取代基结构与其活性的定量关系，结果表明：苯环取代基的电性和体积等均是影响该类化合物与多巴胺转运蛋白亲和力的重要因素，所得到的benztropine类化合物diphenylmethoxy部位取代基的综合结构效应，对进一步研究该部位与多巴胺转运蛋白相互作用的电性和立体性质及设计新的多巴胺转运蛋白配体具有指导意义。     

单克隆抗体亲和层析最适洗脱液筛选研究

本文介绍一种筛选单克隆抗体(McAb)亲和层析最适洗脱液的方法,一种经过改进的双抗体夹心酶联免疫吸附检测法(DAS—ELISA),其中以联有一种McAb的经CNBr活化的Sepharose凝胶为固相,另一种McAb标上辣根过氧化物酶作为标记抗体。我们在以单抗亲和层析纯化促卵泡激素(FSH)的工作中使用该方法进行了最适洗脱液的筛选,取得了很好的结果。该方法简便、快速、可靠。