硫辛酸对甲醛致人HepG2细胞DNA损伤的保护作用

为探讨硫辛酸对甲醛诱发人HepG2细胞DNA损伤的保护作用,体外培养的HepG2细胞经甲醛(0.25,2.5,25μmol/L)单独处理或甲醛与硫辛酸((5+20),(5+40)μmol/L)同时处理2 h后,分别运用彗星试验(comet assay)结合彗星图像分析软件(CASP)分析细胞尾部DNA百分率(tail DNA%)变化.结果显示:不同浓度甲醛处理后HepG2细胞尾部DNA百分率以浓度依赖性方式显著升高(P0.01);但甲醛与硫辛酸同时处理后HepG2细胞尾部DNA百分率明显降低并与硫辛酸浓度呈依赖关系,与甲醛单独处理组(5μmol/L)相比差异显著(P0.05或P0.01).此结果说明硫辛酸对甲醛诱发的人HepG2细胞DNA损伤有保护作用.     

甲醛致斜纹夜蛾SL-1细胞DNA损伤作用的研究

为了研究甲醛致昆虫细胞DNA-蛋白质的交联作用（DNA—protein crosslinks，DPC）和DNA的断裂作用，以斜纹夜蛾SL-1细胞为材料，采用KCI-SDS沉淀法和彗星实验来检测液态甲醛染毒后SL-1细胞中DPC的含量及DNA的断裂效应．KCISDS沉淀法的结果表明，低浓度的液态甲醛（25μmol／L，125μmol／L）不能引起DPC，较高浓度（625μmol／L）可以引起明显的DPC（P〈0．01）；而彗星实验的结果则显示甲醛在低浓度（5μmol／L，25μmol／L）时可以引起DNA链的断裂（P〈0．01），在较高浓度（625μmol／L）时尾部DNA％和尾矩比空白对照显著降低（P〈0．01），表明此时甲醛所致的DPC掩盖了DNA断裂的作用．结论是甲醛在较高浓度时可以导致明显的DPC作用，而在低浓度时以DNA断裂为主．     

微量热研究稀土离子对大肠杆菌的作用

用不同浓度的甲醛染毒人宫颈癌Hela细胞、离体小鼠睾丸细胞、昆虫小菜蛾细胞,应用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA的损伤效应.结果表明:对于Hela细胞和小菜蛾细胞,甲醛在10 μmol/L时可以极显著地诱导DNA断裂(P<0.01);在30 μmol/L时既有断裂也有交联作用(P<0.01),而在50μmol/L时尾部DNA百分比和尾距与阴性对照组无显著差异(P>0.05).对于睾丸细胞,甲醛在10μmol/L、30 μmol/L和50μmol/L时均可导致DNA断裂(P<0.05,P<0.01).该结果提示:甲醛兼具有断裂和交联的作用,可引起多种细胞DNA的损伤.     

HgCl2与CdCl2对河蟹精子DNA损伤的单细胞凝胶电泳检测研究

采用单细胞凝胶电泳技术，研究了HgCl2和CdCl2对河蟹（Eriocheir sinensis）精子DNA损伤的影响.HgCl2和CdCl2各设置6个相同的浓度梯度，分别为0 mmol/L，0.01 mmol/L，0.05 mmol/L，0.1 mmol/L，1 mmol/L，5 mmol/L，处理温度为37 ℃（水浴），处理时间为1 h；SCGE的检测指标为DNA拖尾长度和DNA损伤率.结果表明，对照组DNA未受损伤，在电场中核DNA几乎不泳动，染色后呈圆形的荧光团，无拖尾现象；各处理组精子DNA均不同程度受损，电泳染色后均呈现彗星状荧光团，且随着HgCl2和CdCl2浓度的升高，河蟹精子DNA迁移距离和损伤率亦随之增加，DNA损伤程度与其浓度之间存在明显的“剂量-效应”关系.此外，本实验亦证实SCGE可用于河蟹精子DNA损伤的检测.     

对映-贝壳杉烷二萜化合物RabdosinB对人肝癌细胞HepG2生长的影响

采用显微观察法、生长曲线法检测Rabdosin B对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制和致死效应;同时采用考马斯亮蓝染色法检测该化合物对与细胞贴壁性相关的应力纤维的影响,以探讨对映-贝壳杉烷二萜化合物Rabdosin B对人肝癌细胞HepG2的增殖影响及致其死亡的作用.研究结果表明:Rabdosin B低浓度条件下(3.125～12.5 μmol·L-1),人肝癌细胞HepG2增殖受到明显的抑制;高浓度条件下(25～50 μmol·L-1),处理时间为0～24 h时,HepG2细胞的增殖被完全抑制;当药物持续处理24～60 h时,细胞显示出明显的致死效应,其中25 μmol·L-1处理组细胞显示了凋亡特征,而50 μmol·L-1处理组则显示了坏死现象.细胞的应力纤维随药物浓度增加,其数量逐渐减少,最后降解.由此所得结论是:Rabdosin B表现了显著的细胞毒性,在低浓度条件下抑制细胞生长,高浓度条件下可通过凋亡和坏死途径致细胞死亡.其机理尚需进一步研究.     

全反式维甲酸对肿瘤细胞生长的影响

为探究全反式维甲酸(All-Trans-Retinoic Acid,ATRA)对胰腺癌和骨肉瘤细胞生长的影响,本文采用较大浓度跨度的ATRA处理胰腺癌PANC-1和骨肉瘤U2OS细胞,并通过MTS法检测细胞活力。实验结果表明,20～100μmol/L低浓度的ATRA可以促进胰腺癌细胞PANC-1的生长,相反,200μmol/L高浓度ATRA则抑制其生长。在骨肉瘤细胞U2OS中,10～80μmol/L低浓度ATRA可促进细胞生长而150～200μmol/L高浓度ATRA则表现出对细胞生长的显著的抑制作用。两种细胞中,低浓度ATRA的促生长作用可被硼替佐米(Bortezmoib BTZ)抑制,而高浓度ATRA的抑制作用可被BTZ增强。低浓度ATRA与BTZ联合用药可降低凋亡前体蛋白Procaspase3的表达,表明联合用药有可能影响了细胞的凋亡途径。从不同浓度的ATRA对胰腺癌和骨肉瘤细胞生长的双面作用,提示ATRA的用药剂量对临床治疗的影响。     

氟、砷对体外培养大鼠血管内皮细胞的损伤作用

目的观察氟、砷对大鼠血管内皮细胞的损伤作用.方法体外分离培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞,浓度按氟化钠(Na F)0,600,900μmol/L与亚砷酸钠(Na As O2)0,0.1,1.0μmol/L配伍,染毒培养时间为48 h.光镜观察细胞生长形态,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,单细胞凝胶电泳法分析内皮细胞DNA损伤情况.结果非染毒对照组及氟、砷低浓度组细胞生长良好,呈梭形和卵石形,氟、砷单独及联合高浓度组细胞生长状态较差,部分细胞呈圆形,有坏死;氟、砷单独及联合高浓度组细胞活性低于非染毒对照组及氟、砷低浓度组(P0.05);氟、砷单独及联合高浓度组细胞凋亡率高于非染毒对照组及氟、砷低浓度组(P0.05);同样,氟、砷单独及联合高浓度组细胞DNA损伤较非染毒对照组及氟、砷低浓度组严重(P0.05).结论氟、砷单独及联合作用可降低大鼠血管内皮细胞活性,诱导细胞凋亡,引发细胞DNA损伤,并存在明显的剂量-效应关系,提示氟、砷对内皮细胞的生长抑制及DNA损伤作用是血液、循环系统损伤的重要因素.     

利用吖啶酯化学发光研究甲醛和乙醛对DNA的损伤

以吖啶酯为嵌入DNA双螺旋结构的化学发光指示剂,以0.10 mol/L HNO3 0.3%H2O2和0.3 mol/L NaOH 2%TritonX—100为发光启动试剂,建立了一种简单的评价DNA断裂损伤的化学发光分析新方法.结果表明,低浓度的甲醛引起DNA的断裂损伤,高浓度的甲醛引起DNA链的交联,乙醛仅引起DNA链的断裂损伤.同时研究了甲醛和乙醛对DNA的损伤行为及其可能的机制.     

硫酸铈诱导果蝇氧化应激及细胞凋亡的研究

本实验主要研究了稀土硫酸铈（Ce（SO4）2）对果蝇氧化应激生物标记物和细胞凋亡的影响.果蝇培养在不同质量浓度（1,4,16,64,256,1 024 mg/L）的硫酸铈培养基中,分别测定其SOD,CAT和脂质过氧化产物（即MDA含量）,同时用彗星电泳和体外切割DNA实验来检测果蝇细胞中DNA损伤程度,用DNA Laddering法和TUNEL法测定稀土元素Ce对果蝇细胞凋亡的影响.与对照组相比,当Ce（SO4）2质量浓度低于16 mg/L时,果蝇体内SOD和CAT活性显著增加,MDA含量变化不明显;而当Ce（SO4）2质量浓度高于16 mg/L时,SOD和CAT活性明显下降,MDA含量上升.彗星电泳的结果表现为随着硫酸铈剂量的递增,果蝇中肠细胞的彗星率、彗星尾长和Olive尾矩增加,并表现为明显的剂量效应关系.果蝇体外实验结果表明,硫酸铈能打断DNA,使其片段化;同时,TUNEL结果显示果蝇中肠细胞呈现凋亡细胞的特征性蓝绿色颗粒,但DNA琼脂糖电泳没有表现出细胞凋亡特征性的梯形条带图谱.硫酸铈诱导果蝇的氧化应激可以使果蝇中肠细胞SOD和CAT活性降低,MDA含量上升,使中肠细胞出现凋亡特征.由此推断,硫酸铈可诱导果蝇细胞中遗传物质的损伤,对果蝇有一定的氧化毒性和遗传毒性作用．     

KLF4沉默与阿霉素诱导的DNA损伤协同抑制肝癌HepG2细胞的生长

探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞 HepG2中扮演十分重要的角色.     

磨砂和光滑载玻片对彗星实验检测的影响

比较磨砂载玻片和常规光滑载玻片对彗星实验结果的影响,以筛选最佳彗星实验用玻片。分别采用磨砂载玻片和常规载玻片进行彗星实验,检测紫外线处理K562细胞3 min和6 min诱导的DNA损伤,采用CASP分析软件比较两种不同载玻片检测的灵敏度。结果表明,常规载玻片的背景荧光较弱,而磨砂载玻片背景荧光较强,且有斑点状杂质荧光;软件分析结果显示照射3 min时,分别采用磨砂和常规载玻片检测到的尾长为54.83±16.22像素和60.05±17.25像素;照射6 min时的尾长分别为62.73±15.29像素和74.96±15.67像素。结果显示磨砂载玻片影响图像的采集和分析,降低了彗星实验检测的灵敏度,提示在彗星实验中应选择常规光滑载玻片进行实验。     

氯化镉对条斑星鲽卵巢细胞的毒性作用及其机理研究

使用不同浓度的氯化镉（CdCl2）处理体外培养的条斑星鲽卵巢（BFO）细胞系细胞,利用毒理学和细胞生物学方法研究了重金属镉对BFO细胞的细胞毒性及其作用机理。毒性作用研究结果显示,BFO细胞对CdCl2敏感,浓度大于10ixmol／L的CdCl2对细胞的生长具有显著的抑制作用,能引起细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GST—Px）活性的持续降低和丙二醛（MDA）含量的持续升高,且具有浓度依赖性;机理研究结果显示．浓度大于40μmol／L的CdCl2可引起BFO细胞出现典型的凋亡细胞形态,BFO细胞在AO／EB荧光双染色中的质膜通透性显著提高,在单细胞凝胶电泳中出现明显的彗尾,且细胞凋亡率、彗尾的长度和亮度随CdCl2浓度的增加而逐渐升高,并具有浓度依赖性。可见,镉对BFO细胞具有显著的毒性作用,其毒性作用是通过诱导细胞凋亡来实现的,为利用BFO细胞系研究镉等重金属的细胞毒性及其作用机理奠定了基础。     

枸杞叶中总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

研究枸杞叶中总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖抑制及其细胞凋亡的影响.用不同质量浓度的枸杞叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测HepG2细胞存活率,通过Hoechst33258染色法、AV/PI双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,利用免疫细胞化学法、Western blot方法分析枸杞叶中总黄酮对HepG2细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达的影响.结果表明,枸杞叶中总黄酮分别作用于人肝癌细胞HepG2 48,72h均可明显抑制其增殖,并呈现显著的时间、剂量依赖性.高质量浓度枸杞叶总黄酮作用人肝癌细胞HepG2 48h后,HepG2细胞呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率达67.3%.枸杞叶总黄酮作用于HepG2细胞一定时间后,可引起促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达上调.枸杞叶中总黄酮可明显抑制人肝癌细胞HepG2增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过有效上调促凋亡蛋白Bax,破坏细胞内稳态环境,继而激活凋亡蛋白Caspase-3,最终引发人肝癌细胞HepG2凋亡.     

重组腺病毒Canstatin对人肝癌HepG2细胞增殖影响的研究

为研究重组腺病毒Canstatin感染人肝癌HepG2细胞及细胞转染后Canstatin在HepG2细胞中的表达,探讨Canstatin基因对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响。采用不同感染复数(MOI=10、40、80)的腺病毒Ad-Canstatin-GFP感染HepG2细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞形态,流式检测感染效率,Real-Time PCR和Western blot法检测HepG2细胞中Canstatin mRNA和蛋白表达。CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Western blot法检测细胞中PCNA蛋白的表达。结果显示MOI为40时,72 h感染率可达到98.9%,HepG2细胞中Canstatin mRNA和蛋白表达均高于对照组和空载体组(P0.05)。HepG2细胞感染Ad-Canstatin腺病毒后生长增殖受到抑制(P0.05),且PCNA的表达低于对照组(P0.05)。由此可知,Canstatin抑制人肝癌HepG2细胞的生长增殖有作用可能与影响PCNA的表达有关。     

青蒿琥酯-转铁蛋白复合物抑制癌细胞增殖的初步研究

采用简单、快捷的药物配体自识别的方式制备了青蒿琥酯（ATS）-转铁蛋白（Tf）复合物（ATS—Tf）．紫外一可见光谱分析表明：在正常生理条件（pH=7．4）下,ATS与Tf易自组装形成稳定的ATS—Tf复合物（结合常数群为3．4×10^5L／m01）;而在酸性条件（pH=5．5）下,结合能力相对变弱（Kf=1．7×10^4L／m01）,ATS易与Tf分离,具有良好的pH敏感性．同时研究了该复合物对细胞增殖的抑制作用,结果表明：ATS—Tf复合物对正常肝细胞L-02的毒性较低,而对人肺腺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2和胃癌细胞MGC-803的增殖具有显著的抑制作用,表现出良好的靶向杀伤性,有望开发成新型靶向抗肿瘤药物．液相色谱法证实Tf增强了癌细胞对ATS的摄取能力．进一步通过分子对接模拟和荧光光谱分析对ATS与Tf的结合模式和机理进行了研究,提出了ATS—Tf靶向抑制癌细胞增殖的可能机理．研究为青蒿琥酯靶向抗肿瘤药物的研发提供了理论支持和实验依据,在癌症治疗领域具有良好的应用前景．     

绿茶多酚表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）体外对抗乙肝病毒复制的能力

研究目的：乙肝是尚未解决的公众健康问题,需要开发新型抗病毒药物。本研究拟从天然植物绿茶中寻找有效、经济、毒副作用低的抗乙肝病毒药物。创新要点：研究方法：重要结论首次以HepG22．2．15细胞为载体,发现EGCG对乙肝病毒HBsAg、HBeAg和HBVDNA的选择性作用。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测上清和细胞内HBVDNA的含量。EGCG的浓度在0．11～0．44μmol／ml（即50～200μg／ml）的范围内能有效抑制HepG22．2．15细胞中HBsAg和HBeAg的分泌,其效果甚至优于浓度为0．87μmol／ml（即200μg/ml）的拉米夫定（3TC）,并且具有时间和剂量依赖性。同时,EGCG也能抑制胞外HBV DNA的表达。研究结果表明,EGCG具有良好抗病毒活性和低毒副作用,有望开发成为一种新的抗病毒药物。     

单细胞凝胶电泳技术在DNA损伤和细胞凋亡检测中的应用

用不同质量浓度的丝裂霉素C(MMC)、卡铂和5-氟尿嘧啶(5- Fu)处理Hela细胞24h,利用单细胞凝胶电泳( SCGE)技术分析这些药物对细胞DNA的损伤情况,结果发现:各药物处理组细胞都出现“彗星”,且随着各药物浓度的增大,彗星率升高,彗尾的荧光强度和长度也随之增大;各剂量组间存在良好的剂量-效应关系,差异显著...     

铜绿微囊藻和斜生栅藻的组合对拟同形溞生长生殖的影响

文章研究单细胞的产毒铜绿微囊藻和斜生栅藻的组合对拟同形溞生长生殖的影响.结果表明:拟同形溞不能在纯铜绿微囊藻下生长生殖.随着斜生栅藻浓度的升高,拟同形溞的首次怀卵时间逐渐减少,而成熟体长逐渐增大.拟同形溞的首次产幼溞数、最大种群密度及最大种群增长率随着斜生栅藻浓度的增大而增大.最大种群密度和最大种群增长率均出现在2×106cells/mL的斜生栅藻浓度组,分别为302.7 ind.(200 mL)-1和0.213 d-1.在低的斜生栅藻浓度(1×105cells/mL)下,拟同形溞不产生卵鞍.在2×105~2×106cells/mL的斜生栅藻浓度下,拟同形溞产出较多的卵鞍,最大值(77.3 ind.)出现在1×106cells/mL的斜生栅藻浓度组.在较高的斜生栅藻浓度(1×106cells/mL和2×106cells/mL)下,含休眠卵的卵鞍数占总休眠卵数的比例明显高于较低的斜生栅藻浓度组(2×105cells/mL和4×105cells/mL).研究暗示,斜生栅藻浓度的增大可以减缓产毒单细胞铜绿微囊藻对拟同形溞的生长生殖的抑制作用,而卵鞍的产生和休眠卵的形成受其种群密度和铜绿微囊藻的共同影响.