钝齿棒状杆菌转导噬菌体T-1的理化和生物学特性

虽然对谷氨酸产生菌(Corynebacterium crenatum)噬菌体已有许多较深入的研究,但对于噬菌体在遗传学上的应用的研究却很少。为寻找适合于谷氨酸产生菌的遗传载体,本实验室从分离出的48株噬菌体中,筛选后得到两株具有转导能力的噬菌体。下文报道其中一株的理化、生物学特性,为已发表的谷氨酸产生菌噬菌体进行比较,提供选择转导噬菌体的参考。     

抗噬菌体谷氨酸生产菌的选育——细胞融合技术在细菌育种方面的应用

本文利用紫外线诱变的方法获得了抗噬菌体谷氨酸生产菌株.为提高抗噬菌体菌株的产量,作者对谷氨酸生产菌进行了属间融合试验,结果获得了产酸为5.8—6.0％的抗噬菌体谷氨酸生产菌.在适量青霉素存在下可获得99.9％的原生质体。选用最佳条件再生率达20％。在选择培养基上获得融合子,其融合率达1.15×10~(-(?))量级,其中具噬菌体抗性的菌株占22.2％.     

谷氨酸产生菌筛选方法的改进

自福建各地采来的土壤共24样,进行了谷氨酸产生菌棒状杆菌类的分离筛选,发现在富含有机质的陈积土壤中,特别是垃圾土和污泥,易于分离到产谷氨酸的棒状菌。为了证实这些土壤是该菌属棲息的环境,我们进行了各种土壤中的棒状杆菌的噬菌体的分离,印证了只有在上述的类似环境才有棒状菌杆的噬菌体,而其他土壤皆未分离到。因此我们根据了棒状杆菌的生长环境的特点和该菌菌体在灼烧时具有特殊的响声,可以迅速地分离到产谷氨酸细菌,大大地提高了筛选的效率。     

2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9抗噬菌体菌株的选育

以2-酮基-D-葡萄糖酸产生菌Ac9为出发菌株,采用紫外线诱变与添加噬菌体进行筛选相结合的方法,获得了两株抗性菌株Au4-2和Af3.在种子培养基中含有噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养24 h,抗性菌株Au4-2与Af3的菌体生长光密度值OD650×20分别为0.74,0.55.镜检显示菌体量多,呈短杆状;而对照菌株Ac9的菌体光密度值则为0.14,镜检显示菌体量少,呈球状.在发酵培养基中添加噬菌体的条件下,31℃,摇瓶培养72 h,抗性菌株Au4-2与Af3 产酸分别可达15.45 g/100 mL,14.55 g/100 mL;而对照菌株则几乎没有产酸.     

谷氨酸发酵噬菌体研究初报

噬菌体污染,常给谷氨酸发酵造成严重危害,所以查明系外源噬菌体的污染或溶原菌诱导出的噬菌体污染,就成了人们关注的首要问题。我们从谷氨酸生产菌北京棒状杆菌突变株——FM820-7紫外线、丝裂霉素C诱导分离到二株噬菌体526,528,从FM820-7菌株生产环境样品中分离到一株噬菌体530,对分离的噬菌体形态及生物学特性进行了初步研究。并就溶原菌株诱导方式、噬菌体的检测实验条件进行了探讨,为迅速澄清污染源,提供了直接有效的手段。     

产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌N16抗噬菌体菌株筛选及噬菌…

报道了噬菌体ＰＧ３对产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌Ｎ１６反复感染多次进行自然筛选，获得８株对噬菌体ＰＧ３具有稳定抗性的菌株，其产酶水平有的比出发菌株Ｎ１６高１０％左右。同时对噬菌体ＰＧ３的生物学特性进行了某些研究。     

谷氨酸产生菌噬菌体φCC-1-9-80对发酵影响的动态观察

自谷氨酸发酵不正常的罐中,分离一株与松井等的三种溶菌类型不同的噬菌体。这噬菌体在营养肉汤中不能传代,它的增殖需Mg~(++)或Mn~(++)离子;模拟发酵实验,在发酵初期,以低感染量,影响发酵产酸不显著,高感染量,使发酵延迟12小时左右,以后又可恢复到近乎正常;发酵中溶菌强度与Mg~(++)离子浓度有关。 实验证明,受噬茵体感染的寄主菌,可形成较高频率的抗性菌。推测是噬菌体在细胞内形成暂时性的整合或成自主性的质粒。这些抗性菌在传代中又可恢复为敏感菌。     

谷氨酸高产菌TG-866的选育及发酵罐试验

以TG—3菌为亲株,经紫外线、硫酸二乙酯的复合诱变,定向选育抗单氟乙酸、耐高糖、耐高谷氨酸、以谷氨酸为唯一碳源不长和以琥珀酸为唯一碳源生长良好的突变株,选育出TG—866谷氨酸高产菌.在实验室的摇瓶试验中,连续4批达到平均产酸8.37%,平均转化率55.1%。在500L发酵罐上以淀粉水解糖为原料,取得了连续5批产酸7.5％以上,转化率50％以上的成绩。     

谷氨酸生产菌噬菌体理化特性的初步研究

从味精厂废发酵液中分离得到２株谷氨酸生产菌噬菌体３Ｃ１３和３Ｃ４１，提纯的噬菌体经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析：３Ｃ１３由１条主带、至少８条次带组成，多肽分子量在２８８４０￣９５０００道尔顿之间；３Ｃ４１呈３条主带、３条次带，多肽分子量在１７３７８￣７９４３３道尔顿之间。对提纯的核酸进行酶解消化、分子展层等生化分析以及限制性内切酶试验，证明２株噬菌体的核酸均为线状双链ＤＮＡ。３Ｃ１３核酸分子量为２７．８１     

谷氨酸生产菌噬菌体鉴定和特性研究

对谷氨酸生产菌ＦＭ８２０－７、Ｔ６－１３分离到的６株噬菌体的形态学、生物学特性、ＤＮＡ和结构蛋白的分子量进行了比较。结果表明，各株噬菌体头部大小与尾部结构不同，除噬菌体１０２０外，其他噬菌体的宿主范围都较宽，ｐＨ值和温度稳定性稍有差别，各噬菌体的ＤＮＡ和蛋白分子量存在显著差异，还对噬菌体保藏方法进行了摸索。     

中草药单独与配伍使用对北京棒状杆菌AS1.299噬菌体的作用

筛选效果好的中草药,用来防治谷氨酸生产菌北京棒状杆菌 AS1.299的噬菌体,无论在理论上和生产实践上都有重要意义。我们利用四味中草药单独或配伍使用来防治噬菌体。结果表明,单独或配伍使用对噬菌体的影响差别不大,其中五味子单独使用效果最好。     

耐高温酵母的诱变筛选及生理生化特性研究

假丝酵母经不同剂量的紫外线诱变处理后，在40℃-60℃不同温度条件下进行恒温培养，筛选出了一株耐45℃高温的酵母菌株，经与出发菌株进行产酸，产酯和尿素分解实验比较，该菌株酯酶，脲酶及与产酸代谢途径相关的酸活性较高，在45℃高温下产酸，产酯及分解尿素的能力最强。     

通过改变代谢途径选育赖氨酸生产菌株

经化学诱变,通过改变谷氨酸棒杆菌B1代谢途径,筛选出以甘油、丙酮酸和高丝氨酸为碳源的营养缺陷型,该突变菌株B10的产酸率和转化率分别比出发菌株高18.097%和15.56%.     

谷氨酸生产菌的诱变育种

经化学诱变,通过改变谷氨酸棒杆菌B1的代谢途径,筛选出以琥珀酰CoA和乙醛酸为碳源的营养缺陷型,该突变菌株B4的产酸率和转化率分别比出发菌株高11.1%和8.7%.     

L-谷氨酸氧化酶产生菌理性化筛选及液体发酵的研究

采用HNO_2诱变、平皿显色与理性化筛选方法,获得一株L-谷氨酸氧化酶高产稳定菌株Streptomyces sp.N_514。建立了液体发酵产酶的条件,考察了辅加成分对酶合成的影响。     

谷氨酸棒杆菌A.S.1.542(Corynebacterium sp.)噬菌体的防治

由于噬菌体对发酵工业造成广泛、严重的危害而日益引起人们的重视。发酵工业中微生物杀虫剂、抗菌素、化工原料、生化药品、调味食品等发酵生产普遍受到噬菌体的威胁。近几年来,我国筛选的谷氨酸生产菌在一些工厂投产时也相继出现噬     

固体平板法测定谷氨酸菌产酸力研究

本文报道检测谷氨酸菌产酸力的方法.以固体培养代替液体摇瓶培养,产酸是从培菌48小时的琼脂平板上取直径2mm琼脂块作样,以纸层析法测定.这方法能测定5μg/ml以上的谷氨酸量,产酸在5μg/ml以下或产酸零突变体,应用测样的叠加法进行比较.实验证明,应用固体培养不仅能够显示不同菌株的不同产酸能力,同时也能比较不同菌株对不同发酵原料的产酸效果.     

中性蛋白酶生产菌枯草芽孢杆菌抗噬菌体菌株的选育和应用

近年来,由于我国微生物发酵工业的蓬勃发展,但随之而来的,噬菌体危害也日益严重。如我省发酵工业中,丙酮丁醇生产曾遭受噬菌体感染。近两年来,昆明市味精厂也不断受到噬菌体侵害,经常不能正常生产,又如陆良酶制剂厂从1987年9月开始,一年多来蛋白酶生产一直遭受噬菌体危害,造成经济损失达数10万元,直到1988年8月我们决定帮助解决,经过电镜检查,确系噬菌体感染,于是我们除结合综合防治外,着重从筛选抗噬菌体菌株和诱变育种等方面进行工作。经过半年左右工作,分离出菌株564株,进行33批次筛选发酵试验,已经筛选出抗性较好、酶活较高的菌株4株。如KRP406抗株从1989年1月在陆良酶制剂厂使用以来,根据已有结果,在10t和20t大罐进行18     

2-酮基-L-古龙酸高产菌株的选育

实验采用离子注入技术对"二步发酵法"生产维生素C中的伴生菌-苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)进行处理,筛选维生素C的前体2 酮基 L 古龙酸的高产伴生菌菌株,以提高发酵生产水平。经过初筛、复筛,获得了使产酸活性提高的突变株,在筛选的646株菌中,有3株菌使收率提高了1-4%。     

L-精氨酸产生菌的离子束诱变育种

采用N离子束对谷氨酸棒杆菌进行诱变处理,筛选磺胺胍抗性突变菌株,将突变菌株进行摇瓶发酵实验,选育出一株L-精氨酸产量较高和产酸性能比较稳定的突变菌株。该菌株L-精氨酸产量比出发菌株提高了24.8%。