多溴联苯醚对HL-7702细胞和小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯的影响

利用划痕染料示踪标记(SLDT)方法,检测了多溴联苯醚(PBDEs)对人肝正常细胞(HL-7702)与小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.结果表明,PBDE-47与PBDE-209均显著抑制HL-7702细胞的GJIC(10～50μmol.L-1),随着剂量的升高,抑制作用随之增强.在小鼠皮肤成纤维细胞中,PBDE-47在3.75～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,而PBDE-209在15～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,在两种细胞中,PBDE-47的抑制作用大于PBDE-209.停止染毒后,细胞GJIC有一定程度的恢复.实验表明PBDEs可抑制细胞间隙连接通讯,为进一步研究PBDEs的毒性机制提供了科学依据.     

纳米二氧化硅对人张氏肝细胞毒性作用研究

目的:以纳米二氧化硅(SiO2)为研究对象,探讨其对人张氏肝细胞(Chang liver cells)的毒性作用.方法:透射电子显微镜观察纳米SiO2粒径、形态及分散性.体外培养人张氏肝细胞,将细胞分为对照组及纳米SiO2暴露组.纳米SiO2暴露浓度分别为12.5、25、50、100、200(mg·L-1),作用外周全血细胞和张氏肝细胞24 h后,倒置显微镜下观察细胞形态及结构;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生存率;DAPI染色观察细胞核形态;TRITC-Phalloidin染色观察细胞骨架微丝结构.结果:与正常对照组相比,纳米SiO2引起人张氏肝细胞存活率明显降低(P0.01);细胞胞体产生皱缩、变圆,细胞核固缩并出现空泡化,细胞骨架微丝结构破坏.结论:纳米SiO2作用于人张氏肝细胞会抑制细胞增殖,造成细胞形态改变,并呈现剂量依赖性.     

过表达BMP7对HL-7702细胞功能的影响

目的建立HL-7702细胞BMP7基因转染细胞系,并检测其增殖和迁移能力的变化。方法脂质体介导方法转染细胞,采用RT-PCR、western-blot方法检测其mRNA及蛋白表达以评价其转染效果;用MTT、划痕实验检测转染后增殖及迁移能力的变化。结果成功建立转染细胞系,转染BMP7基因后HL-7702细胞增殖和迁移能力有所增强。结论 BMP7基因高表达可能是肝细胞癌变的原因之一。     

邻香草醛缩胡椒乙胺席夫碱锌(Ⅱ)配合物的研究

本文以邻香草醛缩胡椒乙胺席夫碱(L)为配体,合成一种新的席夫碱-锌(Ⅱ)双核配合物[Zn2(L)2Cl2](1),并通过谱学分析及X射线单晶衍射分析对配合物1进行结构表征,通过MTT法测试配合物1及L对6种人肿瘤细胞株和人正常肝细胞株HL-7702的体外增殖抑制活性。结果显示,配合物1对所有肿瘤株的增殖抑制率均高于配体,但低于顺铂;对HL-7702,其细胞毒性也远低于顺铂,且略低于配体,表现出一定的细胞毒性选择性。在分子水平上,通过荧光光谱法和凝胶电泳实验研究配合物1及L与DNA的作用机制。结果显示,配合物1以经典插入方式与DNA结合,而L对DNA的插入作用弱,表明柔性配体L与锌(Ⅱ)配位后,芳香平面结构刚性增强,使配合物1对DNA插入作用增强,从而能够通过阻碍肿瘤细胞DNA复制而表现显著高于L的抗肿瘤活性。     

全反式维甲酸对人白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养人白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响。方法:体外培养人白血病细胞HL-60细胞,将不同浓度的ATRA作用于HL-60细胞分别12、24h和48h后,MTT法检测ATRA对HL-60的增殖影响,免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测HL-60细胞生长活性。结果:MTT法显示10-9mmol/L ATRA作用12h后能抑制HL-60细胞的增殖(P<0.05),并呈剂量和时间依赖性。ATRA能浓度依赖性地抑制HL-60细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:ATRA能够显著抑制人白血病细胞HL-60细胞的增殖。     

镉致PC12细胞的神经毒性

镉是环境中常见的重金属,为了研究镉暴露可能会对神经系统造成的损伤,文章以PC12细胞为模型,观察不同浓度氯化镉暴露对PC12细胞的损伤。实验用0.1、0.5、2.5μmol/L镉处理PC12细胞24 h, MTT比色法检测细胞存活率,并检测0.1、0.5μmol/L镉处理后PC12细胞分化和活性氧变化。MTT结果显示,0.5μmol/L的镉处理显著降低了PC12细胞的存活率,镉暴露对PC12细胞存活率的降低呈剂量依赖性;细胞分化实验结果表明,镉暴露后细胞突起总长度、一级分支和二级分支数目显著降低,且镉对神经发生的抑制作用呈剂量依赖性;细胞内活性氧检测实验表明,镉暴露后细胞内的活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)荧光信号显著增加。上述结果表明,镉可能是通过增加细胞内ROS影响细胞的存活率和分化,进而引起神经毒性。     

改性纤维素材料的细胞相容性评价

根据细胞相容性评价的试验方法,对自制的一种改性纤维素医用材料进行了细胞相容性评价. 采用细胞生长抑制法(MTT比色法)测定了改性纤维素材料对L-929小鼠细胞的细胞毒性. 结果表明改性纤维素材料对L-929细胞无明显毒性作用,毒性评价为0级或1级;采用间接接触法测定了改性纤维素材料对血液的体外溶血试验,结果表明改型纤维素材料对血液的溶血率为1.5%,小于国家规定的5%,属于无溶血反应.     

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V.FITC&;PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid, OA）对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明：OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC₅₀分别为65 ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化：细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V.FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现：OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明：OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。     

柴胡皂甙d(SSd)对HL-60细胞增殖的抑制作用

目的研究柴胡皂甙d对HL-60细胞生长的影响.方法分别用不同浓度的SSd作用于HL-60细胞株,于不同时间段分别计数其平均细胞数并绘制相应生长曲线计算平均抑制率.药物作用后24,36,48 h计算分裂指数.结果用药后HL-60细胞的细胞数、分裂指数均下降,下降幅度与剂量呈正相关.结论SSd能抑制HL-60细胞增殖,这种抑制作用呈时间和剂量依赖关系(P＜0.05).     

d-柠檬烯诱导白血病细胞凋亡的机制研究

探讨传统中药中挥发油成分d-柠檬烯在HL-60细胞株中的抗肿瘤作用机制。体外细胞培养、凋亡检测、流式细胞术和蛋白免疫印迹等分子生物学技术进行机制研究。d-柠檬烯可以抑制HL-60细胞增值的同时可以诱导HL-60细胞的凋亡。d-柠檬烯可引起细胞内活性氧(ROS)的蓄积、线粒体膜电位(MMP)的下降和Caspase-8活化。抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)可以阻断d-柠檬烯诱导的细胞内活性氧(ROS)的蓄积,但不能阻断线粒体膜电位(MMP)的下降和Caspase-8活化。d-柠檬烯诱导的HL-60细胞凋亡机制是通过活性氧非依赖的Caspase-8活化来实现的。     

以bcl-2为靶标siRNA-2提高HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性

目的:研究以bc l-2基因为靶标有效siRNA-2(sm all interference RNA)能否提高HL-60细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性。方法:将siRNA-2转入HL-60细胞株并与Ara-C联合培养,于24、48、72 h,用MTT法检测细胞增殖生长,用流式细胞仪检测HL-60细胞bc l-2蛋白的表达率、细胞内活性氧(ROS)水平变化及细胞线粒体膜电位的变化。结果:siRNA-2明显提高HL-60细胞对Ara-C敏感性;抑制细胞bc l-2蛋白的表达,提高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位(P<0.05)。结论:siRNA-2能提高白血病细胞HL-60对Ara-C敏感性。     

野西瓜总生物碱诱导SGC-7901凋亡机制的研究

通过体外抗肿瘤实验探讨了野西瓜(C.S)总生物碱对诱导人胃癌SGC-7901细胞的抑制特点,并初步探讨了游离钙、活性氧水平的变化与野西瓜总生物碱诱导肿瘤细胞凋亡的关系.野西瓜总生物碱作用的实验组与阴性对照组相比实验组各时间段G1期细胞都多于阴性对照组,而实验组的S期细胞少于阴性对照组,即野西瓜总生物碱能够阻滞肿瘤细胞由G1期进入S期.野西瓜总生物碱给药24 h后,细胞出现凋亡,且作用较明显,与质量浓度有关.因此以上实验证明野西瓜总生物碱可引起SGC-7901细胞凋亡.75、150、300 μg/mL 的野西瓜中总生物碱作用于SGC-7901细胞24 h后,活性氧(ROS)水平明显上升.而不同质量浓度的野西瓜总生物碱作用于SGC-7901细胞24 h后,用荧光染料Flow-3/AM对细胞进行染色,经过激光共聚焦显微镜观察发现野西瓜总生物碱能提高肿瘤细胞内钙离子质量浓度,且呈一定的剂量依赖关系.通过流式细胞仪分析,野西瓜总生物碱能明显提高肿瘤细胞内活性氧的水平.所以体外实验证明了野西瓜总生物碱对SGC-7901细胞具有抗肿瘤活性.在作用机制方面,可能与其可通过提高肿瘤细胞内钙离子质量浓度和增加肿瘤细胞内活性氧的产生,进而启动细胞凋亡机制诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

新型二氢化茚-咪唑衍生物的合成及生物活性研究

从1-茚酮出发,通过简洁的路线合成了15个结构新颖的二氢化茚-咪唑衍生物,并对合成的新化合物进行了抗肿瘤活性和抑菌活性的筛选.生物活性结果表明,化合物7、15、16和18具有较好的抗肿瘤细胞毒活性,其中化合物15对白血病(HL-60)、肝癌(SMMC-7721)及肺癌(A-549)的细胞毒活性甚至优于阳性药物DDP;化合物7、10、14、15、16和17对金黄色葡萄球菌(S.aureus)和枯草芽孢杆菌(B.sutbilis)均具有较好的抑菌活性,化合物8对金黄色葡萄球菌显示出较好的选择性抑制活性.     

SO_2诱导拟南芥保卫细胞凋亡

以拟南芥叶片下表皮为材料,研究了SO_2体内衍生物-亚硫酸钠和亚硫酸氢钠混合液(3:1,mmol·L~(-1)/mmol·L~(-1))对气孔保卫细胞的致死效应.结果表明,浓度1.0～5.0 mmol·L~(-1)的SO_2衍生物处理表皮3 h可引起保卫细胞死亡,死细胞出现核固缩、核断裂、凋亡小体等典型的核凋亡特征,且胁迫组细胞内活性氧和钙离子水平升高.蛋白酶抑制剂Z-Asp-CH_2-DCB和TLCK能减少SO_2衍生物诱导的细胞凋亡;过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸(AsA),及Ca~(2+)螯合剂乙二醇双四乙酸(EGTA)和Ca~(2+)通道抑制剂LaCl_3均可使SO_2衍生物诱发的细胞死亡率降低.0.1 mmol·L~(-1)的AsA或EGTA能降低胁迫组胞内的活性氧和Ca~(2+)水平,与死亡率降低相伴发生.以上结果表明,一定浓度的SO_2可诱导拟南芥保卫细胞凋亡,胁迫可能通过诱导活性氧产生、胞外钙内流,造成胞内Ca~(2+)浓度升高,引发细胞程序性死亡.     

秀丽线虫sod-3基因RNA干扰及早衰模型的建立

利用RNAi技术， 通过干扰秀丽线虫中的sod-3基因表达， 建立了因超氧化物歧化酶3（SOD3）表达缺失引起快速衰老的线虫模型，为sod-3 基因功能的研究以及相关疾病的基因治疗等提供动物模型.     

藤茶多糖组分AGP-3的体外抗氧化活性研究

研究了藤茶多糖组分AGP-3的体外抗氧化活性.用K3[Fe(CN)6]模型测定多糖的还原能力,用试剂盒方法测定丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)含量,用分光光度法测定小鼠红细胞溶血和小鼠肝线粒体肿胀度.结果表明,AGP-3在化学模拟体系具有一定的还原能力和清除活性氧能力,一定浓度范围内具有体外清除小鼠血清活性氧的作用,并能减少小鼠肝组织及肝线粒体MDA的生成,可抑制小鼠红细胞溶血和肝线粒体肿胀.     

运动中线粒体活性氧产生机制的研究进展

线粒体呼吸链是运动内源性活性氧(ROS)产生的主要来源,内源性ROS产生增多,可导致脂质、蛋白质及核酸等物质的氧化损伤.研究表明,ROS产生可引起质子漏,质子漏增加可降低ROS生成,提示ROS与质子漏之间存在一种反馈回路;解偶联蛋白(UCPs)参与了这种反馈调节,但其确切分子机制尚不清楚.从运动中线粒体ROS产生及其机制等方面进行了综述.     

透氧纤维素膜的制备及其性能研究

以NMMO(N–甲基吗啉–N–氧化物)工艺为基础,在纤维素溶液中加入CaCO3并在成膜后酸洗去除,制备具有适当透气度的纤维素膜.通过控制CaCO3的粒径和添加量,探讨纤维素膜透氧性能和拉伸性能的变化.结果表明:随着CaCO3的加入,纤维素膜的透氧系数增大,拉伸强度、断裂伸长率和透明度总体呈下降趋势.CaCO3添加量一定时,CaCO3粒径越大,透氧系数越大,拉伸强度和透明度越小.     

体外培养人角膜内皮细胞的UVB损伤及抗坏血酸的抗氧化保护作用研究

以非转染人角膜内皮(HCE)细胞系为体外实验模型系统研究了UVB氧化损伤、Asc抗氧化保护及其分子机理。体外培养的HCE细胞经UVB和/或Asc处理后,利用MTT和光镜对细胞的活力和形态进行了检测,利用8-羟基脱氧鸟苷免疫荧光染色对DNA的氧化损伤进行了检测,并利用二氢乙啶染色对胞内活性氧(ROS)的水平进行了检测。结果显示,100~800 mj/cm²的UVB辐射能剂量和时间依赖性地损伤HCE细胞的活力;200 mj/cm² UVB(自然太阳光中的平均辐射剂量)能引起HCE细胞发生皱缩,并显著增加细胞的DNA氧化损伤程度及胞内ROS水平;而1 mmol/L Asc不仅能显著增强HCE细胞的活力、促进细胞分裂,而且还能显著降低200 mj/cm² UVB所引起的DNA氧化损伤及胞内ROS水平。综上所述,UVB通过诱导ROS的产生进而引起DNA氧化损伤,对HCE细胞具有显著的氧化损伤作用;而Asc能够通过降低UVB诱导的ROS水平进而保护DNA免受氧化损伤,对HCE细胞的UVB损伤具有一定的抗氧化保护作用。本文研究结果对于利用Asc等抗氧化保护剂保护HCE细胞免受UVB氧化损伤具有一定的理论指导价值。