大肠杆菌基因启动子探针型载体的构建

利用ＰＣＲ技术将ｐＵＣ１８和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中的多克隆位点区（ＭＣＳ）及旁侧序列分别进行扩增,然后将扩增产物插入到已除去ＬａｃＺα基因的ｐＵＣ１８中,获得三个中间载体ｐＳＵＧＶ１,ｐＳＧＶ２和ｐＳＵＧＶ３,最后将ｐＳＵＰＶ２中无表达活性的新霉素磷酸转移酶Ⅰ（ＮＰＴⅠ）基因分别插入到三个中间载体的ＭＣＳ中,构建成功大肠肝菌基因启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ４,ｐＳＵＰＶ５和ｐＳＵＰＶ６．     

以潮霉素B磷酸转移酶基因为遗传标记的启动子探针型载体的 …

用来自大肠杆菌的潮霉素Ｂ磷酸转移酶基因作为遗传标记构建了启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ８，该基因的转录和翻译起始区以及５‘－端编码区两个密码子均被除去，载体骨架为大肠杆菌质粒ｐＵＧＶ２该标记基因的终止子来自Ｐｈａｎｅｒｃｈａｅｔｅ ｃｙｓｏｓｐｏｒｉｔｍ的ＬＩＰ６基因。     

以潮霉素B磷酸转移酶基因为遗传标记的启动子探针型载体的构建

用来自大肠杆菌的潮霉素Ｂ磷酸转移酶基因（ｈｙｇｒ）作为遗传标记构建了启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ８,该基因的转录和翻译起始区以及５’－端编码区两个密码子均被除去,载体骨架为大肠杆菌质粒ｐＵＧＶ２,该标记基因的终止子来自Ｐｈａｎｅｒｃｈａｅｔｅｃｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ的ＬＩＰ６基因     

枯草杆菌强基因启动子DNA片段的序列分析

对利用基因启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ２,从枯草杆菌ＡＳ１．３９８中克隆３个稳定的具有强启动功能的ＤＮＡ片段,进行限制酶切分析发现,ｐＢＳＵ２２和ｐＢＳＵ４３中的插入片段小于０．２ｋｂ,ｐＢＳＵ４４中的插入片段为３ｋｂ。测定结果表明,３个插入片段中都有较为典型的原核生物基因启动子序列,其中ｐＢＳＵ２２和ｐＢＳＵ４３的插入序列几乎完全相同。２     

启动子对外源基因在转基因植物中表达的影响

将来自ｐＢＩ１２１质粒的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子片段插入到ｐＢＩ１２１的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与ＧＵＳ基因之间，构建了串联的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子载体ｐＬＢ３８．通过三亲交配，将ｐＢＩ１２１及ｐＬＢ３８分别转移到含ｐＧｖ３８５０的农杆菌中，成为适合本研究的双元载体。以叶圆盘转化法将外源基因转入烟草，获得了２种转基因植株。经ＤＮＡ分子杂交、ＮＰＴⅡ点分析、ＧＵＳ荧光定性及定量分析，证明外源基因已整合进烟草基因组并获得表达。ｐＬＢ３８的ＧＵＳ表达量为ｎＢｌ１２１的３～４倍，这表明启动子数目的不同会直接影响其启动基因的表达水平。     

35S启动子组入蓝藻质粒载体pUC13－pbl

３５Ｓ启动子组入蓝藻质粒载体ｐＵＣ１３－ｐｂｌ楼士林，郭奕斌，吴巧娟（生物学系）近年来构建了一些含３５Ｓ启动子的质粒载体￣［１］，但未见含３５Ｓ启动子的蓝藻质粒载体．因此本研究拟把ＣａＭＶ的３５Ｓ启动子组入由孙立春等人构建的蓝藻质粒载体ｐＵＣ１３－ｐ...     

具全期启动子盒的杆状病毒高效表达载体的组建与应用

通过ＰＣＲ扩增，得到苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ，ＡｃＮＰＶ）具早晚期启动子元件的ｐ３５基因启动子，将其插入到杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３多克隆位点上游，使之与ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３质粒中的人工合成后期启动子（ＰＳｙｎ）、多角体ＸＩＶ启动子（ＰＸＩＶ）串联构成早期、晚期、极晚期能持续启动外源基因表达的转移载体质粒ｐＳＸ３５．将ｐＳＸ３５用于组建含ＨＢｓＡｇ基因并形成多角体的重组ＴｎＮＰＶ，ＨＢ－ｓＡｇ基因的表达量显著提高，表达时间亦明显提前，从而实现了外源基因在杆状病毒表达系统的全期、高效表达．ｍＲＮＡ引物延伸试验结果显示，Ｐｐ３５在重组病毒中可产生２套转录本，分别于病毒感染的早期和晚期起始ＨＢｓＡｇ基因的表达．     

甘薯（Ipomoea batatas L.Lam.）基因启动子在根癌农杆菌中 …

作者曾用自行构建的启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ４,从甘薯总ＤＮＡ中克隆到了６５个在大肠杆菌中具有启动基因表达功能的ＤＮＡ片段,现研究发现,甘薯基因启动子片段在根癌农杆菌中也具有启动基因转录的功能,其启动功能的大小与启动子片段在大肠杆菌中启动卡那霉素抗性基因表达活性呈正相关,即原来卡那霉素抗性越高的,ＧＵＳ基因的酶活性越高。利用重组子ｐＩＢ２中插入片段所做的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交实验证实,该ＤＮＡ片段来     

电击法转移含人凝血因子Ⅸ基因重组质粒的影响因素

反转录病毒载体在基因治疗中可能会产生野生型病毒而引起安全性问题，本文研究含ＦＩＸｃＤＮＡ重组质粒基因治疗血友病Ｂ的可能，构建了不具反转录病毒载体结构的两重组质粒ｐＳＣＩＸＴＮ和ｐＣＩＸＴＮ，前者含ＳＶ４０早期启动子和ｈＣＭＶ启动子共同控制的ＦＩＸ ｃＤＮＡ，后者仅含ｈＣＭＶ启动子控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，它们都含有ＴＫ启动子驱动的ｎｅｏ基因，通过电击法将基因转移到ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０细胞，在ＨＴ１     

基因免疫诱导小鼠对狂犬病病毒糖蛋白的免疫反应

将狂犬病病毒糖蛋白基因按正确方向插入真核表达载体ｐＫＳＶ１０及ｐＭＴ０１０／Ａ＾＋中相应启动子下游，构建成由ＳＶ４０早期启动子妄动的ｐＫＳＶＲｇｐ及羊金属硫蛋白启动子启动的ｐＭＴＲｇｐ两种狂犬病病毒糖蛋白表达载体。将两种重组体分别经小鼠两侧腿产肌肉按不同方案直接注射到１２只６－８周龄小鼠体内，成功地在注射小鼠血清内检测到抗狂犬病病毒抗体，而且注射２次的小鼠ＥＬＩＳＡ抗体滴度显提高，并且ｐＫＳＶＲ     

形成多角体家蚕重组病毒通用转移载体构建

从家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）通用转称载体ｐＢＫ２８３和粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）转移载体ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３系列出发，构建了一个７．２ｋｂ能形成多角体且可以用于克隆含不同读码框外源基因的ＢｍＮＰＶ通用转移载体系列ｐＢＭＸ３．ｐＢＭＸ３系列以ＢｍＮＰＶ多角体结构基因上游的１．９ｋｂ和下游１．３ｋｂ的片段作为与ＢｍＮＰＶ基因组进行体内同源重组的同源序列；ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３系列的ＳＸＩＶ双启动子用于外源基因的表达；ＡｃＮＰＶ的多角体基因作为重组病毒形成多角体的基因．以ＢｍＮＰＶ－ＬａｃＺ（ｏｃｃ－ｇａｌ＋）为出发株病毒，ｐＢＭＸ３系列的重组病毒筛选有ｏｃｃ＋和ｇａｌ－两个遗传标记     

将GNA基因导入莴苣（L.sativa）及其表达的研究

将含ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的雪花莲凝集素基因置换Ｔｉ质粒载体ｐＢＩ１２１中的ＧＵＳ基因得到了ｐＢＩＧＮＡ质粒,将其导入农杆菌ＬＢＡ４４０４,得到ＬＢＡ４４０４菌株。     

全长和截短的δ内毒素cryIAc基因在昆虫杆状病毒表达？…

在昆虫病毒转移载体ｐＶＬ１３９３多角体基因启动子下游克隆了全长的苏芸金杆菌δ内毒素基因ｃｒｙＩＡｃ，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ１，用ＫｐｎＩ将ｃｒｙＩＡｃ基因进行了截短，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ２。随后在两种重组转移载体ｃｒｙ基因的下游引入了ＩＥ１启动子驱动的ｎｅｏ基因作为筛选标记和ＳＶ４０小ｔ抗原终止区作为ｃｒｙ基因的终止信号，得到了重组转移载体ｐＶＬＹ１ｎｅｏ和ｐＶＬＹ２ｎｅｏ，分别用两种重     

在大肠杆菌中直接克隆白腐丝状真菌—黄孢平革菌（Phanero …

利用启动子探钍型载体ｐＳＵＰＶ４直接在大肠杆菌细胞中克隆到多个来自白腐丝状真菌－黄孢平革菌（Ｐｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅ ｃｈｒｔｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ）基因２子片段。这些基因启动子片段能在大肠杆菌细胞中启动重卡那霉素抗性基因的表达,不同片段赋予宿主细胞以不同的卡那霉素抗性水平,最高的可达１０００μｇ／ｍＬ,最低的则为５０μｇ／ｍＬ。     

鼻咽癌细胞株,瘤株中EBV—LMP1基因的检测及变异性分析

采用ＰＣＲ法检测了不同代次的鼻咽癌细胞株、瘤株（ＳＵＮＥ／ＳＵＮＴ）中的ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因片断，并分析其变异性。结果发现直到１３１代ＳＵＮＥ、３０代ＳＵＮＴ中仍然能检测到ＬＭＰ１基因片断，且在传代过程中ＬＭＰ１基因未发生变异。但与Ｂ９５－８中的ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因相比，ＬＭＰ１基因发生了变异，表现为Ｘｈｏｌ、Ｍｓｐ酶切位点的消失和ＳＳＣＰ单链迁移率的不同。该结果提示变异的ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因可能与ＳＵＮＥ／ＳＵＮＴ肿瘤的特性有一定的相关性。     

携带TIMP-1基因逆转录病毒载体的构建及其实验研究

构建携带组织金属蛋白酶抑制物ＴＩＭＰ－１基因的逆转录病毒载体，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的变化．利用常规分子克隆技术，通过对逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ（Ｆ６）质粒的去磷酸化、粘端连接，构建ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ；经限制性内切酶酶切、电泳鉴定其结构正确后，用电穿孔法对体外培养的ＰＡ１３７包装细胞进行基因转移，Ｇ４１８筛选阳性克隆，收集上清，并用于感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系的研究．构建获得ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体ＰＭＮＳＭ／ｈＴＩＭＰ，有效滴度为１０４ＣＦＵ／ｍＬ～１０６ＣＦＵ／ｍＬ．本研究构建获得的ＴＩＭＰ－１基因逆转录病毒表达载体，在感染胰腺癌ＳＷ１９９０细胞系，观察其侵袭、转移能力的研究中得到有效应用     

抗砷质粒pSDR941的构建及其在专性自养极端嗜酸性…

将具有广泛寄主范围的ＩｎｃＱ质粒ｐＪＲＤ２１５的Ｋｍ基因片段删掉，置换进大肠杆菌抗砷质粒ｐＵＭ３上的抗砷基因及Ｐ１启动子片段，构建成新的抗砷质粒ｐＳＤＲ９４１，为１２．４ｋｂ，通过接合的方式将其转移到氧化硫硫杆菌中并获得了表达。     

根癌农杆菌的高效电激转化

利用电激法双元载体质粒ｐＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率。探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达。     

环状芽胞杆菌（Bacillus circulans）基因表达效率调节DNA片…

用大肠杆菌启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ１从环状芽胞杆菌基因组中分离的启动子片段ＢＣ６能使无启动子的卡那霉素抗性基因恢复活性，并在大肠杆菌中获得高效表达。当用限制酶ＸｂａＩ去除其５’－端１．２ｋｂ片段后，３’－端片段仍能启动Ｋａｎ’基因表达，其抗性水平降至４００μｇ／ｍＬ，但当１．２ｋｂ片段反向回原有位置时，其抗性水平降至６００μｇ／ｍＬ。将Ｘｂ片段正向插入另一重组质粒ｐＢＣ３中融合的Ｋａｎ’ａｄｌｄ     

SlNPV p10基因特征的研究

从病毒感染后期的斜纹夜蛾幼虫脂肪体中提取ｍＲＮＡ,反转录合成ｃＤＮＡ探针,并使之与ＳｌＮＰＶ基因组的酶切片段杂交,将ＳｌＮＰＶｐ１０基因定位于ＢａｍＨ Ｉ－３．０千碱基片段上。ＳｌＮＰＶｐ１０是目前发现的最长ｐ１０基因;基因的启动子内含有２个ＡＴＴＧＴＡ基序,是目前所发现的ｐ１０基因中唯一含有２个Ａ／ＴＴＴＧＴＡ基序者。ＳｌＮＰＶ Ｐ１０蛋白含有１０个七肽重复单元,可形成１个相对较长的卷曲螺旋。Ｓ