鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法的建立及应用

目的建立鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法,并应用于鸡胚及禽源性生物制品的检测。方法根据鸡胚致死孤儿病毒长纤突保守序列分别设计3对引物,优化并建立鸡胚致死孤儿病毒PCR检测方法;分别采用该方法对SPF鸡胚和流感疫苗、麻疹疫苗进行检测。结果建立的方法可检测到10-9稀释的病毒DNA;该方法与鼠腺病毒及猴腺病毒无交叉反应;在SPF鸡胚及禽源性生物制品中应用该方法均未检出病毒。结论该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于禽源性生物制品中鸡胚致死孤儿病毒的检测。     

猪红血球珠蛋白水解液培养动物细胞

本文报道了从猪血中制备珠蛋白水解液的流程,测定了其总氮量并初步分析了其氨基酸组成。同时用珠蛋白水解液培养了几种动物原代细胞,并在培养的鸡胚成纤维细胞上感染鸡新城疫工系病毒。经试验,初步证明猪血的水解珠蛋白营养液对培养各种动物原代细胞和适应病毒可以正常生长和繁殖。     

应用无特定病原鸡及鸡胚研制鸡传染性囊病二价活疫苗

应用无特定病原鸡及鸡胚进行了鸡传染性囊病二价活疫苗的繁殖及安全性试验、免疫效力试验、最小免疫剂量试验、免疫干扰试验、攻击保护滴度的测定试验、免疫持续期试验、与国外疫苗比较试验等。实践证明ＳＰＦ鸡及鸡胚是完成以上研究工作的基本保障     

Ⅰ型鸭肝炎病毒(MY株)活疫苗毒种的纯粹及生产条件探索

将Ⅰ型鸭肝炎鸡胚化弱毒MY株进行纯粹检验；以100ELD50 0.2mL/枚(含病毒3.0×105个拷贝)剂量经鸡胚尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,每隔12h观察并采集鸡胚胚体和尿囊液样本,运用自行建立的检测DHV-1的SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法检测MY株弱毒的鸡胚增殖规律.结果表明,该毒种符合...     

经济植物的快速繁殖

为尽快改善经济植物的生产面貌，有必要把植物快速繁殖的理论技术应用于生产。通过顶芽、不定芽、腋芽、不定胚的增殖与分化进行快速繁殖，方法简便、繁殖速度快，还可消除病毒，提高经济作物的品质。     

改进的鸡胚绒毛尿囊膜技术--无气室孵育法

对传统的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)方法进行改进。将孵育6d的鸡胚去掉气室后，将待测样品加入到CAM上，用无菌透明胶封口，继续孵育2—3d，去掉封口暴露CAM，用甲醇／丙酮等体积混合液室温固定10min后进行观察，结果鸡胚血管网完好无损，样品作用效果显示明显，表明该方法相对于传统方法而言，具有操作简单，鸡胚存活率高，样品效果显示更直观等优点。     

中药“鸡解毒散”对鸡新城疫防治作用试验研究

本文报告中药“鸡解毒散”对鸡新城疫的防治试验研究结果,通过鸡胚体内试验初步表明:该药能够降低鸡新城疫病毒的血凝滴度,对人工感染病例具有一定的防治效果。     

预防流感蜡烛对流感病毒抑制杀灭作用做试验

为测定预防流感蜡烛对流感病毒的抑制和杀灭作用,本试验采用了对流感病毒敏感的鸡胚细胞和鸡胚最适部位接种病毒。以细胞病变(CPE)、红细胞吸附试验和红细胞凝集试验做检测指标。结果表明:该蜡烛对流感病毒具有较强的抑杀作用。故用于群体预防具有流行病学意义。     

慢性呼吸道疾病的致病原,大鼠纤毛相关呼吸道杆菌,一种新认识的病原菌的分离,培养和特征

<正> 把患有慢性呼吸道疾病(CRD)的实验大鼠的支气管擦洗物,接种到鸡胚尿囊内进行纯培养,分离出一种革兰氏阴性的丝状杆菌。它不能在无细胞培养基上生长。在间隔为1周的20次连续传代中,没有鸡胚死亡。将传到第十代的鸡胚尿囊液,给8—12周令的剖腹取胎后养在屏障系统内的SD大鼠鼻腔接种,这种杆菌可重新从鸡胚中分离出来。在研究过程中,被接种的大鼠放在Horsfall单位中,使之保持无其它已知的呼吸道病原,如霉形体和鼠病毒。这种杆菌生长在     

鸡新城疫病毒分离株部分生物学特性的测定

对已经分离的鸡西新疫病毒分离株部分生物学特性进行了测定。该新城疫病毒分离株为1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1.51，鸡胚最小致死量（MLD）为10^-8，平均死亡时间（MDT）为46.2h，鸡胚半数感染量（EID50）为10^-10.1，并与已知标准株进行了比较。按规定的标准判定，该分离株为毒力较强的鸡新城疫强毒株。     

流行性出血热病毒的细胞培养

用灭活的流行性出血热病毒（EHFV）L99株感染传代培养的Vero-E6细胞,第4d50%的Vero-E6细胞浆内可查到对EHFV鼠血清的特异性荧光,第7-10d阳性细胞数达到100%。用感染第3d的细胞培养上清大批量盲种,第7-10d荧光强度均达到 ,电镜下病毒呈圆形或卵圆形,外膜为电子致密层,界面清楚,包绕着比较疏松的内浆,内浆中有若干个颗粒丝状结构。     

HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究

运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNANS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7,以RT-PCR检测HCV正、负链RNA,间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCVNS3蛋白的表达。结果证明,转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCVNS3蛋白的表达,且突变体RNA与未突变的HCVRNA相比,明显具有更高的复制效率和蛋白表达。该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板。     

生物反应器微载体系统大规模培养草鱼细胞及病毒

采用微载体GT-2在细胞培养生物反应器中悬浮培养草鱼细胞和草鱼出血病病毒。合适的工艺条件为:温度26℃,pH6.8～7.2(生长期),7.2～7.4(接毒后),搅拌转速40 r/min,溶氧(DO)40%空气饱和度。GT-2是一种较适合于草鱼细胞贴壁生长的微载体。细胞密度可达7.4×10~6 Cells/mL,病毒滴度可达8.00。     

草鱼AHZC-88细胞抗出血病病原病毒机制初探

本文通过细胞表面病毒受体分析,病毒感染细胞的电镜观察以及细胞核和细胞质可溶性蛋白组分的电泳分析,对AHZC-88细胞的抗病毒机制进行了初步的探讨。结果表明,病毒不仅能与该细胞表面结合,而且能够进入细胞,但是不能在细胞内复制增殖。电泳分析显示该细胞的胞质可溶性蛋白组分比对病毒敏感的ZC—7901细胞多了一条区带。这些结果提示AHZC-88细胞对病毒的抗性可能是由于病毒在细胞内的脱衣壳过程受到了抑制所致。     

BV、HSV-1、HSV-2在Vero细胞上增殖的比较研究

为进一步证实1997年本实验室从我国猕猴群中分离的B病毒(BV)与人单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、2型(HSV-2)之间的关系,在Vero细胞上对3种病毒的增殖规律及引起的细胞病变进行了比较研究.结果表明新分离BV与HSV-1、HSV-2引起的细胞病变不同,BV主要见细胞融合;病变发展速度不同,BV介于两者之间;对抗BV血清呈不同程度的交叉反应,HSV-1最高仅达70%左右.说明目前国内一直沿用的用HSV-1抗原替代BV抗原检测B病毒抗体的方法,确有漏检的可能.     

棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒诱发草地贪夜蛾细胞株Sf的程序性死亡

棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）能够诱发草地贪夜蛾Ｓｆ细胞株发生早期死亡现象．依据死亡过程的细胞形态变化，ＤＮＡ降解的梯状电泳特征以及对不同抑制剂敏感性的差异，可以初步断定该死亡现象为程序性死亡．早期死亡伴随着病毒ＤＮＡ复制与子代病毒生成的中止．同时发现野生型ＡＣＭＮＰＶ的共感染能够有效地抑制早期死亡的发生，并对抑制作用的可能性机制进行了探讨．     

Detection of Grass Carp Hemorrhage Virus （GCHV） from Vietnam and Comparison with GCHV Strain from China

Grass carp plays an important role in small-scale aquaculture in Vietnam. However, a severe disease, known in Vietnam as “Red Spot Disease“, is causing significant economic loss in grass carp aquaculture. In this study, the tissue samples isolated from the grass carp with Red Spot Disease in Vietnam are investigated and eomparied with the control GCHV isolated in China by experimental infection, culture cell infection, serological cross reactivity, and RT-PCR amplifica-tion. Infected grass carp exhibits hemorrhage symptoms about 5 days after experimental injection with GCHV-V (Vietnam) strain. The symptoms and lethality induced by the GCHV-V strain are identical to that induced by the Chinese GCHV-9014 strain. The Chinese GCHV-873 strain in-duces typical cytopathogenic effects in 4 cell lines, such as CIK, CAB, FHM and GCO, from the6 fish cell lines examined. No cytopathogenic effects are observed in all the 6 examined cell lines,including CAB, FHM, CIK, EPC, CCO and G(X), infected by the GCHV-V strain and GCHV-9014 strain. Immunodiffusion assays demonstrate an obvious cross-reactivity among three GCHVstrains. Precipitin lines are clearly observed not only between the anti-GCHV-873 serum and thetwo strains GCHV-873 and GCHV-9014, but also between the anti-GCHV-873 serum and the GCHV-V strain. GCHV can be detected by immunodiffusion assays after three generations of blind propagations in the cell lines inoculated by GCHV-V strain. This implicates that GCHV-Vviruses have been replicated and amplified despite there being no cytopathogenic eifects observed in these examined cell lines. Three genome segments of GCHV, including S8, S9 and S10, are amplified by three sets of PCR primers designed according to the segment sequences published re-cently. The Q8fp and Q8rp primer set specific for genome segment S8 amplifies a 955 bp frag-ment from the extracted sample of diseased fish with Red Spot Disease, and the fragment size is i-dentical to that amplified by the same primer set from control GCHV-873 strain. Simultaneously,the Q9fp and Q9rp primer set specific for genome segment S9 generates a same 635 bp product,and the Q10fp and Q10rp primer set specific for genome segment S10 produces a same 697 bp fragment from both template samples of diseased fish with Red Spot Disease and control GCHV-873 strain. The RT-PCR amplification and corresponding size comparison data indicate that the three GCHV-V genome segments extracted from the diseased grass carp with Red Spot Disease in Vietnam should be identical to that in control GCHV-873 strain from China. The data confirm that the causative agent of grass carp Red Spot Disease in Vietnam is a virus, and the virus is closely similar to GCHV strain in China.     

心肌宁冲剂体外抗柯萨奇B_3病毒的试验研究

本试验采用细胞培养方法,检测心肌宁药物对感染CB_3病毒的心肌细胞和Vero细胞的保护作用。结果表明该药可明显阻止CB_3病毒吸附细胞表面、进入细胞及产生直接的灭活作用;明显降低培养细胞的病变程度,对Vero细胞和心肌细胞具有明显的保护作用,其保护率分别为87.4％和90.2％,对感染的心肌细胞,心肌宁明显减弱病毒的毒力,其作用呈良好的量效关系。     

棉铃虫细胞系SFE—HA—8212的克隆化及对HaSNPV受纳性提高的克隆系的建立

用细胞临界生长密度法对棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２进行克隆化，获得８株克隆细胞系．各株克隆细胞系各自的形态较为均一，但相互间在形态、生长特性、对病毒受纳性等方面有很大差别，其中一株ＣＳ细胞对棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）的受纳性明显高于ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２细胞，形成多角体的细胞比率、多角体的产量、游离病毒粒子的产量及多角体蛋白的产量均有提高，是研究和应用ＨａＳＮＰＶ的有效系统．