IVC系统和屏障系统对SPF级小鼠繁殖能力影响的比较研究

目的比较相对洁净环境下使用独立通风笼盒（IVC）系统和传统屏障饲养环境条件对SPF级BALB/c和C57BL/6两种近交系小鼠繁殖性能和生长发育的影响。方法将8周龄的SPF级BALB/c和C57BL/6小鼠以雌雄2∶1比例随机饲养在IVC饲养环境和传统屏障饲养环境下7个月,观察比较两种品系小鼠不同胎次产仔数、不同周龄的体质量变化、离乳率和交配间隔时间等繁殖和生长能力指标。结果在IVC饲养环境下两种品系的小鼠不同胎次产仔数、哺乳期及离乳后仔鼠体质量,离乳存活率和交配分娩间隔时间等指标与传统的屏障饲养环境下的相同指标相比无显著差异（P〉0.05）。结论在相对洁净环境下使用IVC系统与屏障环境相比,小鼠繁殖能力无显著差异,小规模的实验动物可以在IVC系统中进行生产繁殖。     

肝脏特异性表达人脂肪酸转运蛋白5小鼠作为非酒精性脂肪肝的模型构建

目的:为研究非酒精性脂肪肝(NAFLD)的发病机制以及潜在候选药物疗效,构建人脂肪酸转运蛋白5(hFATP5)在肝脏过表达的转基因小鼠模型.方法:将hFATP5表达序列插入白蛋白启动子的下游,构建基因表达载体,C57BL/6小鼠的受精卵通过显微注射、胚胎移植,繁殖过表达hFATP5(hFATP5+)小鼠.通过实时荧光定...     

用精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

目的　探讨精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性 .方法　构建乙肝病毒X基因表达载体 pcDNA3 X ;应用微量注射针将脂质体包裹的 pcDNA3 X表达载体直接注入C5 7BL/ 6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,于第一次注射后 6周 ,与雌鼠交配 ,用PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源DNA和肝组织中表达的 pX蛋白 .结果　共产仔鼠 16只 ,其中 1只为阳性仔鼠 ,阳性率为 6 .2 5 %.结论　初步明用精原干细胞介导法制备X基因转基因小鼠是可行的 .     

5种不同遗传背景绿色荧光蛋白(GFP)基因导入系小鼠的培育

通过反复回交——筛选目的基因的手段,将C57BL/6-Tg(UBC-GFP)30Scha/J转基因小鼠的绿色荧光蛋白基因(GFP)分别向BABL/C、CBA/J、DBA/2J、AKR/J、FVB/J等品系小鼠导入,得到了5种不同遗传背景且带有GFP基因的导入系小鼠.冰冻组织切片等方法显示GFP导入系小鼠的皮肤、肝、肾、心、肺等均有不同程度的绿色荧光蛋白表达,不同遗传背景对GFP的组织表达谱、血液生理指标及繁殖性能未见影响.本实验采用基因导入法培育了5种新的带有GFP导入系小鼠,这些不同遗传背景的基因导入系小鼠为移植生物学研究提供了材料.     

IVC笼盒原位实施小鼠二氧化碳安乐死方法的建立

目的 建立一种在原饲养IVC笼盒中实施小鼠二氧化碳安乐死的方法。方法 将4～5周龄BALB/c小鼠、4～5周龄C57BL/6小鼠和2周龄C57BL/6小鼠各10只,按照5只/笼的标准饲养。以28%容器体积/min气体置换率,将二氧化碳通入小鼠饲养笼实施安乐死。结果 4～5周龄BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠均在2～3 min之间失去意识,5～6 min之间死亡,与美国国立卫生研究院指南中要求的一致。2周龄C57BL/6小鼠死亡需要的时间长于4～5周龄C57BL/6小鼠,并有显著性差异。结论 成功建立了小鼠在原饲养IVC笼盒中实施二氧化碳安乐死的方法。该方法有效降低了小鼠应激反应,提高了动物福利;且有利于操作人员身心健康。     

基于Cre-LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因小鼠的建立

目的 构建基于Cre- LoxP系统的条件性定点敲入人源hRas基因(c-Ha-ras)的小鼠,以获得hRas基因在特定组织器官条件性表达的小鼠模型,用于药物的临床前致癌性安全评价及相关机制研究。方法 首先构建hRas打靶载体,电击法转染入小鼠胚胎干细胞(ES细胞),用正负法筛选阳性ES细胞,通过PCR、 Southern鉴定后,将正确重组hRas基因的ES细胞导入C57BL/6 J小鼠囊胚,移入同步发育的受体鼠子宫,妊娠足月出生的嵌合体小鼠与C57BL/6 J小鼠交配获得杂合子hRasfl/+小鼠。再将杂合子hRasfl/+小鼠间交配获得纯合子小鼠hRasfl/fi,然后与全身组织细胞表达Cre重组酶的Tg (EIIa-cre)小鼠进行交配,获得全身细胞表达hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,并通过荧光定量PCR方法检测不同日龄胚胎期仔鼠的hRas基因表达水平。结果 成功构建了基于Cre- LoxP系统的人源hRas基因条件性定点敲入小鼠模型的载体,筛选得到的一个正确克隆,电转ES细胞后进行Southern blot鉴定,经过初筛和复筛,共获得12个阳性克隆,挑选A11号克隆ES细胞进行囊胚注射,移植了48枚胚胎,出生9只小鼠,其中6只为嵌合鼠,将嵌合率>50%的雄鼠与野生型C57BL /6 J雌鼠进行交配,出生21只后代,其中鉴定有4只hRasfl/+小鼠;hRasfl/+小鼠间交配出生29只小鼠,其中有14只纯合子hRasfl/fi小鼠;hRasfl/fl小鼠与Tg (EIIa-cre)工具鼠交配6次,未有仔鼠出生;跟踪不同发育时期胚胎中hRas基因的表达发现,E10.5～15.5 d胚胎中检测到hRas基因表达。结论 成功建立运用Cre- LoxP系统建立了带有hRas基因敲入的纯合子小鼠hRasfl/fl,未能得到全身细胞高效表达人源hRas基因的hRas-EIIa-cre小鼠,但为进一步利用hRasfl/fl小鼠模型建立其他组织特异性的条件性基因敲入小鼠模型做好技术储备。     

遗传工程小鼠冻存卵巢异体原位移植比较研究

目的 对 C57BL / 6 J 为背景的遗传工程小鼠卵巢冷冻及复苏后原位移植进行研究,建立遗传工程小鼠卵巢 冷冻方法,弥补小鼠资源保种体系。 方法 采用 DAP213 方法冷冻保存了 C57BL / 6 J 及 SCARB2、PSGL1、IGB3S 三 个遗传工程小鼠 10 日龄幼鼠的卵巢,将四个品系 10 日龄幼鼠的新鲜卵巢及冻存复苏卵巢原位移植到 4 周龄 C57BL / 6 J 及 C57BL / 6 J( Cg) —Tyrc- 2 J / J( B6 albino)受体雌鼠,术后饲养 5 周与 10 周龄性成熟 C57BL / 6 J 雄鼠交 配,观察移植出生幼仔。 结果 C57BL / 6 J 新鲜卵巢和冻存卵巢,三个品系遗传工程小鼠的冻存卵巢原位移植到 C57BL / 6 J 和 B6 albino 受体中,均可以恢复正常功能,交配后得到仔鼠。 结论 采用 DAP213 方法冻存 C57BL / 6 J 及以 C57BL / 6 J 为背景的遗传工程小鼠卵巢,复苏后原位移植到 C57BL / 6 J 和 B6 albino,交配后产仔,卵巢冻存方 式是小鼠资源库保存的一个重要补充。     

雄黄对MRL／lpr小鼠脾细胞分泌干扰素-γ、白细胞介素-6的影响

目的：探讨雄黄（As4S4）对MRL／lpr狼疮鼠脾脏细胞分泌干扰素-γ（IFN-γ）、自细胞介素-6（IL-6）的影响。方法：将20周龄MRL／lpr狼疮小鼠和正常C57BL／6J小鼠无菌条件下取出脾脏,制成脾脏淋巴细胞悬液,体外经植物凝集素P（PHA-P,终浓度20mg／L）、白细胞介素-2（IL-2,终浓度10^6IU／L）常规刺激48h后,随机分组进行如下实验：（1）不同浓度As4S4溶液（6．5、12．5、25、50mg／L）作用24h;（2）As4S4对MRL／lpr小鼠和C57BL／6J小鼠作用：①PBS组：空白对照;②As4S4组：25mg／L;以上各组继续培养24h,酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组培养液IFN-γ、IL-6表达量。结果：（1）MRL／fpr狼疮鼠PBS组IFN-γ的分泌高于C57BL／6J小鼠PBS组（P〈0．01）。（2）在MRL／加狼疮鼠中,与PBS组相比,As4S4组（25mg／L）IFN-γIL-6的分泌水平下降。（3）在C57BL／6J小鼠中,PBS组和As4S4组之间IFN-γ、IL-6浓度水平无明显差异。结论：As4S4下调MRL／lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-6的分泌,而对C57BL／6J小鼠脾细胞IFN-γ、IL-6的分泌无明显影响。     

H-2基因检测方法在北京市实验动物遗传质量抽检中的应用

目的为贯彻实施新国标,通过检测小鼠H-2单倍型,确认近交系小鼠免疫遗传质量。方法依据新国标GB/T14927.2-2008中的微量细胞毒检测方法,检测北京地区主要生产厂家的BALB/c和C57BL/6小鼠共70只的H-2单倍型。结果共抽检4个单位的BALB/c和C57BL/6近交系小鼠70只,经检测BALB/c为H-2Dd和H-2Kd,C57BL/6为H-2Db和H-2Kb,符合率100%,质量符合要求。结论经抽检,北京地区主要生产厂家2个品系小鼠免疫遗传质量合格。     

表达人二肽基肽酶4(hDPP4)转基因小鼠的主要生物学特性指标测定

目的 分析表达人二肽基肽酶4(hDPP4)的转基因小鼠的生物学特性指标，为将其应用于中东呼吸综合征的相关研究提供基础数据。方法 本实验室构建了表达hDPP4的转基因小鼠C57BL/6J-TgN (UBC-hDPP4-GFP) CLARS,简称Tg^hDPP4。对不同性别(每组5只)的Tg^hDPP4小鼠的10项血液生化指标、18项血液生理指标、4～16周龄生长发育指标和8项脏器指数进行测定，并与不同性别(每组5只)的野生型C57BL/6J小鼠进行比较，用统计学方法进行分析。结果 与野生型C57BL/6J小鼠相比，Tg^hDPP4 F₃雄鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均降低，血糖和血尿氨素均升高；与野生型C57BL/6J小鼠相比，Tg^hDPP4 F₃雌鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均升高；Tg^hDPP4 F₃雄鼠的体质量自5周龄开始均高于野生型雄鼠。结论 hDPP4的转入对Tg^hDPP4小鼠的血糖、血尿...     

Spexin转基因小鼠的构建及表型初步分析

Spexin是一种具有多种生物学功能的神经肽,在代谢疾病及神经系统疾病中发挥重要作用.为了深入研究spexin的生理功能和相关机制,构建了spexin转基因小鼠,通过检测血液中spexin含量以及糖耐受实验,对模型小鼠进行了初步的表型分析.利用piggyBac(PB)转座子技术培育spexin转基因小鼠,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别在基因层面和蛋白层面验证了模型动物是否构建成功.之后用饲喂高脂饲料的雄性小鼠进行糖耐受实验,对转基因模型小鼠进行表型分析.PCR结果显示,以靶向spexin的两对引物扩增,转基因型小鼠基因组DNA中能分别扩增出300 bp和301 bp的片段,而野生型小鼠则不能.ELISA结果中,转基因型小鼠血清中spexin含量较野生型小鼠显著升高;同一表型中,雌雄小鼠间血清中spexin水平无明显差异.饲喂高脂饲料85 d内,转基因型小鼠和野生型小鼠体重变化未观察到显著差异;糖耐受结果显示,转基因型小鼠每个时间点血糖浓度均低于野生型小鼠,且在15 min时具有显著性差异.结果显示成功构建了过表达spexin基因的小鼠模型.spexin表达水平的升高在一定程度上提高了C57BL/6小鼠的糖耐受能力.该模型为进一步研究spexin基因在动物体内的功能以及在代谢疾病发病机制中的作用奠定了基础.     

MPTP致C57BL/6小鼠帕金森病模型的复制及常用的行为学分析方法

目的介绍1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱发C57BL/6小鼠的帕金森病(Parkinson disease,PD)模型的复制及常用的行为学分析方法。方法C57BL/6小鼠腹腔注射MPTP(40 mg/kg),每天1次,连续注射7 d;同时每天进行小鼠的爬杆实验、悬挂实验、游泳实验和震颤麻痹评分;最后取材,用HPLC-ECD法测定纹状体内的多巴胺含量,用Lowry法测定纹状体内的蛋白总量,并计算多巴胺(ng)/蛋白总量(mg)的比值。结果爬杆实验结果表明,PD模型组小鼠爬杆所用的时间明显长于对照组,其分值低,对照组和PD模型组间有极显著性差异(P<0.01);悬挂实验表明PD模型组小鼠悬挂能力明显低于对照组(P<0.01);游泳实验表明PD模型组小鼠游泳能力明显低于对照组,小鼠肢体运动协调情况不好,组间有极显著性差异(P<0.01);震颤麻痹评分显示,PD模型组分值很高,震颤麻痹症状非常明显,较对照组有极显著性差异(P<0.01);多巴胺含量分析显示,PD模型组多巴胺(ng)/蛋白总量(mg)的比值明显低于对照组,有极显著性差异(P<0.01)。结论用MPTP诱发C57BL/6小鼠的帕金森病模型的复制方法以及爬杆试验、悬挂实验、游泳实验和震颤麻痹评分简单可靠,是用于帕金森病治疗研究的良好方法。     

DAP 玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存

摘要: 目的探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果,建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术。方法选择3 个品系( C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － ) SPF 级4 周龄雌性小鼠,运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法,以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法,观察上述实验效果。结果C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － 3 个品系小鼠超数排卵平均值分别为42. 98 个/只、27. 93 个/只、23. 11 个/只,体外受精2-细胞期胚胎率分别为68. 79%、32. 70%、23. 08 %,胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72. 77%、80. 87%、83. 33%,存活率分别为56. 92%、54. 84%、70%,存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72. 37%、60. 78%、25%。结论选择4 周龄小鼠,按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏,呈现出较好效果,C57BL/6 小鼠优于基因工程小鼠,基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术。     

BALB/c与C57BL/6小鼠互为供受体心脏移植急性排斥模型的对比

目的建立并比较BALB/c与C57BL/6小鼠互为供受体心脏移植急性排斥模型。方法采用BALB/c与C57BL/6小鼠互为供受体建立心脏移植模型,术后评估免疫排斥情况、并发症、观察移植心脏存活时间并做病理检查。结果手术成功率为94.7%。A组(BALB/c→C57BL/6)与B组(C57BL/6→BALB/c)的生存时间无统计学差异。两组均可见典型急性排斥病理改变,两组间无明显统计学差异。两组移植心脏的心功能情况无明显差异。结论近交系BALB/c和C57BL/6基因小鼠遗传稳定,可以建立稳定的急性排斥反应模型。C57BL/6适合作为受体,移植时间明显缩短,造模成功率较高。     

C_(57)BL/6遗传背景下无毛突变基因对胸腺及皮肤结构的影响

目的　探讨在C57BL/6背景下突变基因对胸腺及皮肤结构的影响。方法　观察脱毛规律 ,并用常规组织学方法对 19日龄正常C57BL/6小鼠及C57BL/6无毛小鼠的胸腺及皮肤结构进行了对比观察。结果　C57BL/6无毛小鼠 12日龄左右发生脱毛现象 ,2周左右时间除触须外全部脱净 ,并终生保持无毛状态 ;随年龄增长 ,头部、腹部和体侧形成特别的皱纹和褶痕 ,似犀牛状 ,指甲过度生长。皮肤有黑色素沉着 ,而且表面出现一些小的丘疹。组织学发现 19日龄C57BL/6无毛小鼠皮肤表皮有一层角化的角质层 ,毛干消失 ,毛囊腔宽大 ,在真皮深部可见毛球的残余部分 ,皮脂腺结构正常。 19日龄C57BL/6无毛小鼠胸腺的形态、结构与对照鼠无明显差异 ,但萎缩较早。结论　无毛突变基因影响C57BL/6小鼠的毛发周期和胸腺退化     

小鼠白细胞减少症模型的建立

目的为小鼠白细胞减少症模型的建立提供基础资料。方法选用ICR小鼠和C57BL/6J小鼠以5Gy的剂量60Co-γ射线一次性全身照射小鼠,测定小鼠外周血白细胞总数。结果在本实验条件下,ICR小鼠的正常白细胞数量极显著低于C57BL/6J小鼠;雄性C57BL/6J在照射后第3 d白细胞数量显著高于其雌性小鼠。结论小鼠的品系、性别对60Co-γ射线照射建立的白细胞减少症模型具有一定的影响。