多重PCR检测病死鸡中沙门氏菌方法的研究

为了建立能够同时检测病死鸡样品中的沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的多重PCR 方法.采用煮沸法提取 DNA 做为模板,选择分别针对沙门氏菌属、鸡白痢沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的特异性基因(invA、fliC、sdfⅠ)设计引物,优化反应体系和反应参数,建立多重PCR检测方法.应用该方法对国内17家鸡场369份病死鸡样品进行沙门氏菌的检测,检测结果与传统细菌培养法的结果进行比较.结果表明,优化过的多重 PCR 可同时对沙门氏菌种、属进行鉴定,灵敏度为4.6×102 CFU/mL;多重 PCR 方法共检测出沙门氏菌34株,其中鸡白痢沙门氏菌21株、肠炎沙门氏菌5株,与传统细菌培养法检测结果的符合率分别为91.2%、90.5%和80.0%.     

禽源沙门氏菌快速检测方法研究进展

摘要:沙门氏菌病是一种重要的人畜共患病,一直威胁着畜禽健康和食品安全。 当前正值我国大力推进沙门氏菌、淋巴白血病的种禽净化政策,但传统检测方法存在检测时间长、血清型和致病力无法区分的技术瓶颈,严重制约了沙门氏菌净化效率和净化进程,也限制了食品安全检测的准确性。 针对沙门氏菌临床快速检测存在的技术壁垒,本文对细菌分离、血清学诊断、PCR 诊断技术、基因芯片诊断等技术进展进行文献综述,旨在为禽源沙门氏菌新型检测技术的建立与应用提供借鉴。     

建立实时荧光PCR快速鉴定鸡制品中鸡伤寒沙门氏菌的方法

建立基于Taqman探针实时荧光PCR检测鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella gallinarum)的方法.根据GenBank公布的鸡伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验.结果表明:特异性引物和探针可从34株鸡伤寒沙门氏菌菌株、26株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中检测出全部的34株鸡伤寒沙门氏菌.以鸡伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.999,扩增效率为88.2%,最低检测浓度为5cfu/mL.对已接种鸡伤寒沙门氏菌的模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致.该方法特异性好、灵敏度高,是快速鉴定鸡伤寒沙门氏菌的有效方法.     

食品表征属性与品质识别新技术及设备研究

随着高附加值食品产业的发展,国内外,尤其是国内的学者对食品真伪鉴别技术研究越来越重视。该研究基于分子生物学技术,针对燕窝、蜂蜜、鲑鱼、海参、冬虫夏草等高附加食品开展了食品真实表征属性生物识别新技术研究,分别建立了燕窝及伪品实时荧光PCR检测方法、蜂蜜蜜源成分实时荧光PCR检测方法、鲑科鱼类实时荧光PCR鉴定方法、海参实时荧光PCR鉴别方法、冬虫夏草实时荧光PCR检测方法,填补了我国在其检测技术方面的空白;在食品质量品质属性生物识别技术研究方面,以蛋白为检测对象,结合免疫学及质谱学等相关技术,探索了蜂王浆新鲜度的免疫检测方法、蜂王浆新鲜度的毛细管凝胶电泳方法、杂环胺HPLC-MS-MS检测方法、乳制品中羟脯氨酸的免疫分析方法的建立,该项技术的研究目前在我国具有一定的前瞻性;在食品感官品质仿生识别技术检测方面,分别建立了普洱茶香气特征评价方法,研究了蜂胶、普洱茶品质评价基础数据与特征指标、建立了传感器特征提取方法、初步开发了气体色敏传感器检测系统,研制了具有自主独立知识产权的能够剖析食品特定味觉属性的新型电子舌系统,为食品质量安全快速分析检测方面提供了新的技术手段。     

乳粉中常见致病菌的多重荧光PCR检测

利用多重荧光PCR技术快速检测乳粉中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌.以沙门氏菌的invA基因、志贺氏菌的ipaH基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因为靶基因,选择特异性引物,以参照菌种为对象,验证引物的特异性,建立多重荧光PCR检测方法,人工添加沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌,确定方法的检出限.结果表明该方法特异性强、灵敏度高,乳粉中检测的灵敏度为1CFU/mL,可在8h内完成对乳品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌的检测.     

一种快速检测蛋鸡沙门氏菌的方法

为检测蛋鸡泄殖腔拭子中沙门氏菌,在基础培养基BPW的基础上,优化出了培养仅需6 h的选择性增菌液SEM;并根据蛋鸡泄殖腔拭子中的非沙门氏菌干扰菌种类,设计了沙门氏菌特异性检测引物hilAP3.结果表明：1)低数量(1~5 CFU/50mL)沙门氏菌在优化后的一步法选择性增菌液SEM中培养6 h 后,其生长量可达103 CFU/mL 以上,可满足 PCR方法的检测限(102 CFU/mL);2)hilAP3引物能排除蛋鸡泄殖腔拭子中的非目标菌的干扰,特异地检测其中的沙门氏菌;3)建立的SEM增菌6 h与hilAP3特异引物PCR联用的方法检测灵敏度为1~5 CFU/50mL,准确率为100%.因此,该研究中建立的优化增菌液与PCR联用法能在9h内完成沙门氏菌的检测,其灵敏度和特异性高,可应用于蛋鸡场的沙门氏菌检测.     

镉离子检测技术研究进展

镉离子具有生物毒性,在农畜产品、食品等中的残留给人类健康带来严重威胁.镉离子的检测可分为传统检测和免疫学检测,本文通过对镉离子的传统检测进行回顾,提出多种镉离子的免疫学检测技术,并对其应用进行了综述.     

禽源沙门氏菌不同检测方法的比较及分型研究

本研究采集同一地区三家规模化蛋鸡场的饲料、肛拭子和病死鸡样品共813份,分别采用本实验室改进的环介导等温扩增技术(LAMP)、普通PCR技术以及美国农业部沙门氏菌分离培养标准(USDA MLG 4.05)进行沙门氏菌检测,并对分离株进行血清型鉴定及ERICPCR分型.结果,三种方法均检出沙门氏菌阳性16份,检出率同为1.97%.其中病死鸡、饲料和肛拭子中检出率分别为11.29%、3.03%和1.02%.16株禽源沙门氏菌中有7种血清型,其中12株沙门氏菌ERIC-PCR分型相似性均小于90%.结果表明,本实验室改进的LAMP方法与PCR方法检出率相同,与USDA MLG 4.05的符合率为100%.16株沙门氏菌血清型多样,分子分型的相似度低.     

重金属免疫掣检测研究进展

重金属免疫学检测技术和传统检测方法相比不但检测速度快、费用低廉、操作简便而且具有灵敏度高和选择性强等优点.进行重金属免疫学检测首先选择或合成双功能鳌合剂鳌合重金属离子并与载体蛋白偶联制备出完全抗原,进一步制备出金属特异性单抗.重金属免疫学检测方法主要有竞争性ELISA检测、KinExA免疫检测、荧光偏振重金属免疫检测法和免疫胶体金快速层析法等.     

定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用

食源性疾病发病率的提高及食品安全问题对人们健康造成的危害,引起世界范围内加强对食品安全、卫生及质量的关注。通过聚合酶链反应(PCR)技术在食源性致病微生物检测中的应用,提高了检测的有效性,PCR技术的发展也经历了多个发展阶段,即常规PCR检测、多重PCR检测、荧光定量PCR检测阶段。本文主要对荧光定量PCR检测技术进行分析,探讨定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用。     

禽源致病性沙门氏菌四环素耐药性基因tetC的PCR扩增及序列分析

通过对临床分离并经生化实验和血清学试验鉴定的20株禽源沙门氏菌和1株标准株C79-13进行药敏试验,结果证明:有19株有高耐药性,另外2株有低耐药性,耐药率达100%;对其四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果获得以质粒为模板的特异性产物,与药敏试验符合率为100%;利用PCR检测四环素耐药基因tetC具有很高的敏感性和特异性,从而为禽类致病性沙门氏菌的耐药性检测提供了高效敏感的手段.     

一起伦敦沙门氏菌食物中毒的实验室检验

目的对一起食物中毒的采集样本进行相关微生物学检验,并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对检出的菌株进行溯源检测,确定引起食物中毒的病原菌(同源性).方法依据GB4789方法对采集的样品进行病原菌分离、鉴定及药敏试验(K-B法),应用PFGE检测技术对检出的伦敦沙门氏菌进行分子分型,通过BioNumerics软件进行聚类分析.结果所检出5株菌株的生化试验、血清学试验和药敏试验结果一致,PFGE图谱有4株为相同菌株,1株菌株与其他菌株相似率为96%.结论该起食物中毒与伦敦沙门氏菌分离株为相同克隆群,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究.     

有机磷农药检测方法的应用与研究进展

综述了国内外对有机磷农药进行检测的各种方法,主要包括色谱法,波谱法,酶抑制法,免疫学生物传感方法等,对各种检测方式的效果进行了分析与评述,同时简要介绍了对有机磷农药检测技术一些新的研究进展.     

基于免疫原理的入侵检测模型研究

通过对基于免疫原理的入侵检测相关技术的深入研究,在现有的计算机免疫学及入侵检测系统相关研究的基础上,提出了一种新的基于免疫原理的网络入侵检测系统模型,并对其进行了状态定义及分析.     

我国鸡白痢沙门氏菌病诊断与防治研究概况

鸡白痢沙门氏菌可感染各日龄、不同品种的鸡、其临床症状表现不尽相同、均严重影响鸡的生产性能．细菌学方法仍是不可或缺的诊断手段．随着血清学技术、PCR技术、快速检测试剂盒逐步应用于鸡白痢的检疫之后，对鸡白痢的防制巳跃上了一个新台阶，鸡白痢沙门氏菌的毒力质粒和耐药性研究，为药物、疫苗防治打开了新思路．减毒菌苗、灭活菌苗、脂多糖(LPS)抗原、卵黄抗体、活菌生物制剂、抗生素、磺胺药、中草药、有机酸等措施在鸡白痢的防治中发挥着重要作用。     

多种沙门氏菌分离培养基效果比较及在实验动物和垫料检测中的应用

摘要: 目的改进实验动物沙门氏菌分离培养方法,建立垫料中沙门氏菌检测方法。方法参考国内外沙门氏菌检测方法,用不同分离培养基对沙门氏菌、大肠杆菌和变形杆菌进行培养。选用最佳筛选效果培养基对动物肠道和垫料样品进行检测。结果BPW 预增菌、MKTTn 选择性增菌转种XLT4 培养基分离沙门氏菌的效果优于其他培养基,在1015 份动物样品中检测出3 份沙门氏菌阳性,能够检测出垫料中1CFU/g 的沙门氏菌。结论改进的沙门氏菌分离培养方法检出率高于现有国标方法,结果准确,可用于实验动物沙门氏菌及垫料的检测。     

PCR技术对肺炎支原体DNA的检测

作者首次在国内利用自己的条件完成了肺炎支原体从培养基制备、实验室培养、菌种检定、引物设计、ＤＮＡ提取．到ＰＣＲ扩增条件的摸索、产物检测等一整套技术,与非肺炎支原体、部分相关细菌进行了鉴别,并同时进行了临床样品和模拟样品的实验,结果表明该方法的特异性和灵敏性都是好的．     

模糊PID控制用于PCR芯片实验室温控系统

介绍了一种采用自校正模糊PID控制算法的PCR芯片实验室温度控制系统。该系统将模糊推理控制与PID控制相结合,利用PCR芯片上溅射的Pt电阻获取温度信号,通过PID精确输出控制在芯片背面直接制备的微加热器和外加的半导体致冷器件,实现了PCR芯片的高精度快速变温控制,可用于近场光学显微镜实时探测PCR扩增反应过程中荧光信号的近场分布,为实现高灵敏度DNA定量检测提供了必要条件。     

分子生物学技术及其在环境样品微生物分析中的应用

综述了荧光原位杂交(FISH)、多聚酶链式反应(PCR)、DNA克隆及DNA测序等分子生物学技术,并将这些分子生物学技术应用到淡水水体底泥厌氧氨氧化茵(anammox菌)和好氧氨氧化菌的原位检测中,从底泥样品中鉴别出这两种细菌,其中好氧氨氧化菌属于亚硝酸单胞菌属,厌氧氨氧化菌属于anammox菌的Brocadia分支,为进一步研究淡水环境中氮的微生物循环过程提供了一定的依据．     

基于免疫学的入侵检测系统模型

随着网络安全问题日益突出 ,入侵检测越来越受到关注 ,针对目前各种类型的防火墙和防病毒软件都存在一定的缺陷 ,该文基于仿生学的免疫原理 ,将肽链定义为在网络操作系统中由授权程序执行的系统调用短序列 ,提出了一种新型的入侵检测系统———基于免疫学的入侵检测系统 ,并对其主要功能模块 :免疫计算机和监控器进行了分析。该系统可有效地提高系统实时检测和响应入侵的能力