用^211At和^131I标记蛋白质的研究

报道了砹—211和碘—131标记蛋白质的方法.通过过氧化氢或氯胺T直接氧化制备,使用凝胶色谱从反应产物中分离标记蛋白质,相对法比较放射性计数测定标记产率,过氧化氢适用于~(211)At标记蛋白质,氯胺T有利于~(131)I标记蛋白质.8次实验的结果表明,用过氧化氢氧化标记的~(211)At牛血清白蛋白产率96.4％,氯胺T氧化标记的~(?)I牛血清白蛋白产率66.1％.间接法标记蛋白质,放射性核素~(211)At同对氨基苯甲酸反应获得对—~(211)At—苯甲酸,经乙醚萃取和高效液体色谱分离,然后再偶联到免疫球蛋白或牛血清白蛋白上。动物实验结果表明,此种结合的标记蛋白质在体内稳定,标记率不低于初始~(211)At放射性活度的40%.     

~(125)Ⅰ-碘化标记抗CEA单克隆抗体的制备

本文报道了~(125)I-碘化标记抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体的制备方法。用氯胺-T法进行放射性碘化标记,标记率68.9—84.2%。产品经Sephadex G-50柱层析分离纯化后,放化纯度达94.1%;若使用前再通过凝胶过滤一次,能达到更高的纯度。产品能保持良好的免疫活性和稳定性,并已用于免疫放射测定法(IRMA)研究中,亦得到了较满意的结果。     

无机分析中放射性示踪定量法(二) 非同位素示踪法

非同位素法的原理是当非同位素标记的试剂与被测组份反应时,衍生的放射性量和被测组份的量有定量关系.衍生的放射性可被直接测量,或用逆同位素稀释法测定化学回收物的方法测量.这类方法的另一个名字是放射性试剂法.它包括同位素衍生法、衍生稀释法、放射性释放法和同位素置换法等.     

梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响

目的探讨3种不同提取方法的梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1细胞生物学活性的影响.方法分别采用匀浆法、匀浆裂解法、匀浆超声法在新鲜梅花鹿茸中提取梅花鹿茸多肽(velvet antler polypeptiddes,VAP),用BCA法对梅花鹿茸多肽蛋白质浓度进行分析,培养MC3T3-E1细胞,采用MTT法检测3种提取方法获得的梅花鹿茸多肽对细胞增殖率的影响,利用茜素红染色对MC3T3-E1细胞进行矿化定量测定.结果匀浆法多肽得率9.08%;匀浆裂解法多肽得率15.56%;匀浆超声法多肽得率13.38%;鹿茸多肽能明显促进MC3T3-E1细胞的增殖,并且匀浆超声法的增殖作用最强.钙沉积物的比较表明:与对照组比较,匀浆法、匀浆裂解法和匀浆超声法对MC3T3-E1细胞中的矿化现象呈现递增趋势.结论 3种提取方法综合比较,采用匀浆超声破碎方法提取梅花鹿茸多肽,不仅可以节约时间,而且提高了梅花鹿茸多肽的提取量,是较为理想的鹿茸多肽提取方式,并且能明显地促进MC3T3-E1细胞的增殖和矿化.     

中华眼镜蛇毒组份Ⅲ的碘化标记物制备及质量鉴定

目的：研究对眼镜蛇毒(Naja naja atra venom)组份Ⅲ进行^125I放射性标记的方法及其质量评价．方法：用氯胺-T法碘化标记眼镜蛇毒组份Ⅲ．结果：用氯胺-T法按^125I标记组份Ⅲ，标记物放化纯为98．38％，比活度为0．945mCi／mg，RF值为0．76，每个组份Ⅲ分子上带0．56个^125I原子，与非标记组份Ⅲ有相同的生物学活性和理化性质．结论：所标记的眼镜蛇毒组份Ⅲ符合放射结合分析的要求．     

~(125)I(~(131)I)标记血卟啉的研制

为了研究光敏剂血卟啉在组织内的分布状况及运动变化规律等,以提高疗效,按文献制备了放射性标记的血卟啉作为“示踪剂”。1 碘化标记1)氯胺T法:反应所用的氯胺T(ChT),Na_2S_2O_5,KI等均用0.2mol/L pH7.5PB溶解,临用前配制.小试管中放入血卟啉0.5mL(5mg/mL,针剂,中国医学科学院肿瘤研究所提供)、Na~(125)I(Na~(131)I)25μL(约2mCi)和ChT0.5mL(5mg/mL),搅拌下室温反     

多肽~(18)F标记方法研究进展

正电子发射断层成像(PET)是高灵敏、可定量及无创的活体分子成像方法,通过示踪表征特定生理功能或靶向病理标志物的正电子发射分子探针,可对组织、器官的病变进行分子水平的探测与成像,从而实现疾病的早期诊断和实时监控.氟-18(~(18)F)因其具有适宜成像的核素性质而被广泛用于PET探针的标记.随着PET的广泛应用,低免疫原性和高亲和力的多肽作为PET探针的靶向分子受到关注,但由于多肽对高温、强酸、强碱、有机溶剂等标记条件相对较敏感,多肽的~(18)F标记仍面临巨大挑战,与此同时新型标记方法也层出不穷.本综述根据多肽~(18)F标记过程的复杂程度,即一步标记法、多步标记法和固相标记法,分别举例阐述~(18)F标记多肽代表性研究进展,并讨论了不同标记方法的特点,为~(18)F标记多肽的合成、基础研究和临床研究提供参考.     

高分子量尿激酶的放射免疫测定

本文介绍了高分子量尿激酶放射免疫分析方法的具体程序以及人尿中高分子量尿激酶的测量结果。标记采用Hunter等改进的氯胺T氧化法。碘化前,高分子量尿激酶用二异丙基氟磷酸失活,以避免生物机体中干扰物质带来的不良影响。失活的高分子量尿激酶与lmci~(125)Ⅰ反应2分钟,反应液全部上Sephadex G—50柱层析,经鉴定,标记率为35—40％。高分子量尿激酶放射免疫测量程序为:反应管中加入一定体积的缓冲液,30μl~(125)Ⅰ标记的高分子量尿激酶(约2×10~4cpm),标准品或待测样品,反应抗体。总体积0.3ml,摇匀,4℃保温24小时,然后力口入20μlSPA菌体试剂,混匀后于37℃保温0.5小时,3500rpm离心10分钟,测量沉淀放射性。用本法测定5例正常成人尿中高分子量尿激酶值为14.6±6.1iu/ml,灵敏度为0.8iu/ml尿。     

电子直线加速器的感生放射性计算方法

为了选择一个合理而相对准确的计算电子直线加速器的感生放射性的方法,分析了的点源近似法、径迹长度法、吸收功率法、 Monte Carlo模拟法的优缺点.对IAEA188号报告中一标准算例,用这4种方法进行饱和放射性活度As的计算,并对结果进行比较.分析表明, Monte Carlo模拟法考虑反应完全,可同时计算直接和间接感生放射性,计算步骤简单,结果准确,是4种计算方法中最好的.用Monte Carlo法计算了30 MeV以内电子直线加速器中钨靶的As; 并给出在钨靶中As的空间分布.结果表明,随钨靶厚度及入射电子束能量的增加, As增加.这些结果有利于今后感生放射性研究.     

关于密立根油滴实验动态法的讨论

利用ZKY-MLG-6 CCD显微密立根油滴仪测量电子的电荷量,通过反复实验,分析油滴电荷量的大小、阀门关闭与否对实验的影响,讨论初始电压、工作电压的选择范围.得到的结论为:(1)不管是用平衡法还是用动态法测量电子的电荷量,油滴的电荷量较大时,测量结果更为准确;(2)用动态法测量电子的电荷量时,阀门关闭与否对测量并没有明显的影响;(3)用动态法测量带大电荷量的油滴,初始电压分别为300 V和400 V,工作电压分别为平衡电压的1.5、2.0和2.5倍时,测量结果都较好.     

无机分析中放射性示踪定量法(一) 同位素示踪法

在无机分析中,使用放射性示踪剂的定量分析法与活化分析比较,有下面一些优点:不需靠近核反应堆和粒子加速器.测量放射性的计数装置比较简单.操作的放射性强度较小,一般不需要远距离操作技术.另外,对在活化分析中反应截面小且产物半衰期短的元素,以及因无关核反应的干扰而不能进行测定的元素,可选用适当的高比放射性同位素,用示踪法进行测定.非同位素示踪剂的使用,有时也可增进方法的灵敏度. 与一般分析方法比较,放射性示踪法具有的特色是:多数不需要定量分离回收加入的示踪剂及载体.可使用的放射性示踪剂浓度范围很宽,可从百分之几到10~(1 2)分之一.在许多情况下,操作相当简单和快速,也易于自动化.     

关于放射碘化胰岛素(I~(125)或I~(131))的制备

为建立放射免疫法测定胰岛素的含量和放射受体法测定胰岛素的活性,以便代替古老的小白鼠惊厥法和繁杂的兔血糖法,为胰岛素生产工艺改革和糖尿病的临床研究提供条件,首先必须制备高比强度的标记胰岛素,即在胰岛素分子上标记一种放射性物质。胰岛素是一种蛋白激素,在构成胰岛素分子中的酪氨酸的苯环可被碘化,且不影响其生物活性。我们采用国产的I125或I131制备成高比强度的碘化胰岛素,用于放射免疫或放射受体测定。 一、所用试剂及其配制 1. NaI125或 NaI131无载体 2.胰岛素溶液用0.05M pH7.4 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液配制成每毫升含1毫…     

尖顶羊肚菌菌丝体胞外多糖的分离纯化及结构研究

用乙醇沉淀、Sevag法除蛋白等方法得到羊肚菌菌丝体胞外粗多糖,并进一步通过离子交换色谱、分子筛色谱对粗多糖进行分离纯化,得到单一多糖组分MEP3A.经外光谱法、紫外光谱法、核磁共振法等仪器分析方法确定该多糖组分结构为直链→6)-α-D-Man p-(1→,分子量81.2 kDa,不含蛋白质、多肽和氨基酸.采用MTT法检测表明,该多糖组分可促进小鼠脾淋巴细胞增殖,具有免疫调节活性.     

利用蛋白质微阵列筛选抗胸腺瘤优势抗原表位

通过设计多个针对Titin蛋白胞外区多肽序列,用蛋白质微阵列方法筛选抗Titin抗体识别的优势抗原表位,并用ELISA法进行验证.结果显示,在84例MG血清中,51例抗多肽自身抗体阳性,阳性率60.71%.经蛋白质微阵列筛选和ELISA法验证,发现在设计的9条多肽抗原中,P5、P6和P9是优势识别抗原线性表位;进一步发现自身抗体识别的P5与P9多肽表位存在交叉性,并且均能被多肽抗原阻断.结果表明,用蛋白质微阵列方法可有效筛选针对Titin自身抗体识别的优势抗原线性表位.     

X线剂量测量中IAEA TRS398和TRS277号报告的比较

目的 比较按IAEA TRS398和TRS277号报告推荐方法 测量医用X线绝对剂量的差异.方法 用IBA公司DOSE1剂量仪、FC65-G指形电离窜及NE2570型Farmer没量仪和2571型电离室,分别按照TRS398和TRS277号报告的要求,对Elekta公司电子直线加速器三档光子线(6mV,10mV,15mV)进行测量,并对结果 进行比较.结果 分别采用不同的剂量仪和不同的测量规程得到的结果 基本相同.用DOSEI剂量仪两种方法 测量相对偏差为2.99‰～7.07‰.结论 用TRS398号报告测量得到的结果 比TRS277报告测量的结果 都偏大,但是两者的误差都小于1%,能够满足国标要求的将测量误差控制在2%以内的要求.     

双功能偶联剂ATE的合成及其用于211At标记蛋白质的研究

本文采用改进的方法合成了双功能偶联剂N-琥珀酰亚胺-3-三正丁基锡苯甲酸酯(ATE),并将其用于211At标记牛血清白蛋白(BSA)的研究.标记率在50％左右,经Sephadex-TM G-50分离的产物211At-ATE-BSA具有99.7％的放化纯度,将其在室温下放置24 h,放化纯度依然大于97％.初步动物实验结果表明,标记产物211At-ATE-BSA在体内具有较高的稳定性,表明双功能偶联剂ATE是放射性砹标记蛋白质的良好的中间体.     

利用最小二乘法判断同位素标记肽的假阳性

提出了1种判别标记肽假阳性的方法,根据同位素分布的概率原理计算出不同标记效率下的理论同位素分布,利用最小二乘法拟合得到标记肽的标记效率,根据标记肽的假阳性阈值来判断标记肽的假阳性,并使用本方法判断了比较蛋白质组试验中的3个标记肽,结果表明,在这3个标记肽中有2个阳性标记肽结果,1个假阳性标记肽,说明此方法简单可靠,可用于判定标记肽的假阳性,衡量标记肽和正常肽之间的相似性,判断质谱峰型的变化,排除标记肽假阳性对蛋白质定量的影响.     

啤酒废酵母自溶提取物的制备及抗氧化活性研究

废啤酒酵母具有较高的开发利用价值，本研究以啤酒厂废酵母为材料，通过单因素实验研究其最佳自溶条件及最佳微波水解条件，比较自溶、微波水解与外加酶制剂处理法制备酵母活性多肽的效果，并研究了酵母多肽的抗氧化活性.结果表明，啤酒酵母的最佳自溶条件为固液比1: 20、温度45.0 ℃、pH 6.0、时间48 h；在此自溶条件下，酵母蛋白质被有效水解为多肽，水解度为41.5%，提取蛋白质得率为42%.自溶法制备啤酒酵母多肽的效率与外加酶制剂处理的效果相当，但显著高于微波水解法.自溶法制备的啤酒酵母多肽具有高的抗氧化活性.本研究表明，自溶法是开发利用啤酒厂废弃的酵母和制备酵母多肽的理想方法.     

A1H_3(固)的电子结构(Ⅰ)原子簇模型(A1H_6)

H.Kalo用推广Hückel方法研究了17种硼或铝的氢化物、氯化物及烷基化物分子的电子结构,给出这些分子的电子能级、分子轨道及电荷分布。随后有用各种方法研究AIH_3分子结构(如EHMO,CNDO/2和abinitio法)的。关于AIH_3(固)的电子结构、未见讨论。本文根据AIH_3晶体结构,先提出一个由原子构成的具有D_(3d)对称性的原子簇模型(AIH_6),用推广的Hiickel方法,计算其电子能级及分子轨道。并通过初步结果,对此模型作出评价。     

猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立

目的建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法。方法以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的最佳实验条件。用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点。并且将检测结果与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果进行了比较。结果建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果表明本方法与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题。检测结果与美国实验室BV抗体检测结果的符合率达85%。