兔角膜缘上皮细胞在体外壳聚糖共混膜上的培养及生物学鉴定

目的：探讨壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜作为兔角膜缘上皮细胞体外培养载体的可行性。方法：采用消化培养法,用特殊培养液在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上培养兔角膜缘上皮细胞,第7d应用免疫组化方法对培养细胞作生物学鉴别并在扫描电子显微镜下观察细胞形态。结果：上皮细胞AE1／AE5单克隆抗体免疫组化阳性,培养第7d的上皮细胞有多种细胞形态,细胞胞体饱满,相互通过突起连接,表面可见微绒毛。结论：兔角膜缘上皮细胞可在壳聚糖-胶原-硫酸软骨素共混膜上生长,并具有分裂增殖能力。     

小鼠表皮生长因子对人胚眼角膜上皮组织增殖效应的研究

报道了人胚眼角膜上皮组织离体培养试验，结果表明，小鼠颌下腺表皮生长因子，对离体培养人胚眼角膜上皮组织，具有明显促进细胞增殖和分化的效应。培养４ｄ的实验组角膜上皮组织厚度、上皮细胞增殖层数以及角膜上皮层细胞核数量，均较正常人胚角膜上皮细胞增长２倍，角膜上皮组织结构中基底细胞核数与表层细胞核数的比率较正常人胚角膜上皮细胞增长３倍。     

表皮生长因子对猕猴胚胎角膜上皮组织增殖效应的研究

离体培养试验表明，小鼠颌下腺表此生长因子对离体培养猕猴胚胎眼角膜上皮组织具有显著促进细胞增殖和分化的效应。培养４ｄ的实验组角膜上皮的厚度，上皮细胞增殖层烽以及上皮组织中基底层细胞核与表层细胞核两者的比率均较正常猴胚角膜增长３倍。与此同时培养４ｄ的实验组角膜上皮厚度和上皮细胞的层数，都达到成年猴正常角膜上皮的结构水平。     

保存人羊膜用于角膜缘缺陷兔眼表面重建

探讨羊膜移植术在角膜缘缺陷兔眼表面的作用,建立兔全角膜缘缺陷的动物模型,移植眼早期应用保存的人羊膜移植于受损区域,对照眼常规保守治疗,观察其角膜新生管及上皮层愈合情况。愈合后1个月,取角膜,做普通病理及扫描电镜检查。结果显示对照眼角膜上皮层愈合较慢,新生血管粗大丰富,愈合后上皮层不稳定,含有杯状细胞。羊膜移植的眼表面上皮层愈合快,新生血管细小,愈合后的上皮层光滑,稳定, 杯状细胞主要分布于周边角膜。表明羊膜移植能促进上皮细胞移行、增殖、获管稳定的眼表层。羊膜移植后,上皮仍为结膜型上皮。     

米诺的尔对兔晶体上皮细胞增殖的影响

研究米诺的尔(Minoxidil)对体外培养的兔晶体上皮细胞增生的影响。将不同浓度的米诺的尔加入体外培养的兔晶体上皮细胞,分别作用24、48及72 h,采用MTT法观察米诺的尔对兔晶体上皮细胞增生的影响。将3.0 mmol的米诺的尔加入体外培养的兔晶体上皮细胞作用72 h,而后吸出药液,加入正常DMEM培养液继续培养96 h,观察米诺的尔在撤药96 h后对兔晶体上皮细胞增殖的抑制作用;并应用光学显微镜观察兔晶体上皮细胞在含或不含有3.0 mmol米诺地尔的培养液培养72h后的形态学变化。米诺的尔对兔晶体上皮细胞增生有抑制作用,呈浓度依赖性和时间依赖性。3.0 mmol米诺的尔对兔晶体上皮细胞增殖的抑制作用在撤除药液后并未降低,抑制作用持续增加。说明米诺的尔能有效抑制体外培养的兔晶体上皮细胞增生。     

不同体外培养条件对牛体外受精胚胎质量影响的研究

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响，实验一中伴体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％，３７．０％，１９．     

不同眼内灌注液对兔角膜内皮细胞的影响

内眼手术中使用的眼内藻注液对角膜内皮细胞可产物损害，不同的灌注液可产生不同的影响，对临床常用的眼内灌注液（乳酸钠林格氏液和平衡盐溶液ＢＳＳ））进行动物实验，以观察共对角膜内皮细胞的影响。对１０只新西兰白兔作前房穿刺，放置特制的前房灌洗 针进行２ｈ持续灌注，左眼采用乳酸钠林格液，右眼采用ＢＳＳ；灌注前、灌注后５ｍｉｎ、１０ｍｉｎ、２０ｍｉｎ每１０ｍｉｎ用超声角膜测厚仪测定中央角膜厚度。２ｈ后取下角膜     

自体角膜缘上皮移植治疗眼表疾病的临床应用

目的 治疗由眼表疾病所致的角膜缘干细胞缺陷，观察手术疗效。方法 采用自体角膜缘上皮移植治疗１２例３１眼眼表疾病引起的角膜浅层血管翳性混浊和结膜源性组织侵入，术后随访１－１５个月。结果 １２例中，１０例（１眼）上皮愈合稳定，角膜恢复透明或半透明，无结膜源性组织及浅层血管侵入；８例（９眼）视力明显提高（２行以上）。结论 自体角膜上皮移植可为病变的角缘膜提供新的干细胞来源，是治疗眼表疾病的理想方法。     

IGF-I、HGF、TGF-β1、IFN-γ对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响

研究胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)、干扰素-γ(IFN-γ)对奶牛乳腺上皮细胞体外增殖的调节作用。应用组织块培养和差速消化法获取原代奶牛乳腺上皮细胞,免疫荧光鉴定正确后MTT法评价不同浓度的4种细胞因子对奶牛乳腺上皮细胞体外增殖的影响。IGF-I、HGF分别在10~200 ng/m L,0.1~100 ng/m L浓度范围内对乳腺上皮细胞的增殖呈正相关。而TGF-β1(2.5~100 ng/m L)、IFN-γ(5~160 ng/m L)则剂量依赖性地抑制乳腺上皮细胞增殖。IGF-I、HGF均能促进奶牛乳腺上皮细胞的体外增殖,该作用在一定浓度范围内有剂量依赖性;TGF-β1、IFN-γ对乳腺上皮细胞的增殖作用出现剂量抑制效应。该研究为下一步深入探讨细胞因子对奶牛泌乳机制的研究奠定基础。     

The Effects of Different Culture Systems on the Quality of Bovine In Vitro Fertilized Embryos

研究探讨了不同体外培养条件下牛体外受精胚胎的发育速度及囊胚细胞数，从而了解不同体外培养系统对牛体外受精胚胎质量的影响．实验一中将体外受精卵分别在ＳＯＦ＋牛输卵管上皮细胞（ＢＯＥＣ）和ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ两种培养系统内培养，在这两种培养条件下囊胚发育率分别为２２．２％和２１．２％，囊胚细胞数分别为１１３．３±５．０和９７．９±８．３，受精后第６～９ｄ的囊胚出现率分别为４０．１％ａ、３７．０％、１９．２％ｂ、２．７％和１３．５％ｃ、３２．７％、３６．５％ｄ、１７．３％（ａ＞ｃ，Ｐ＜０．０１，ｄ＞ｂ，Ｐ＜０．０５），表明牛体外受精卵在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ中的发育速度快于在ＴＣＭ１９９＋ＢＯＥＣ中．实验二中将体外受精卵分别培养于ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ、ＳＯＦ＋牛卵丘细胞、ＳＯＦ＋ＢＳＡ三种培养系统中，结果囊胚发育率分别为３５．５％ｅ、２９．４％和２２．４％ｆ（ｅ＞ｆ，Ｐ＜０．０１），囊胚细胞数分别为１１７．３±８．０ｇ、９４．２±９．３和９０．２±９．４ｈ（ｇ＞ｈ，Ｐ＜０．０５）．实验三观察了体外受精胚胎在ＳＯＦ＋ＢＯＥＣ培养条件下发育速度与囊胚细胞数的关系，结果第６～９ｄ的囊胚细胞数分别为１１０．８±１０．２ｉ、１２８．     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

体内精卵结合、早期胚胎发育是在输卵管中进行,人们将配子、早期胚胎进行输卵管内移植（GIFT、TET）,发现胚胎发育率和妊娠率都提高。体外模仿输卵管内环境的最好方法是将胚胎与输卵管上皮细胞或组织共培养。本实验用已建立的原代和传代培养的人输卵管上皮细胞分别与小鼠早期胚胎共培养,观察其对早胚发育的影响。胚胎与不同培养时间的人输卵管壶腹部上皮细胞共培养的发育状况见表1。表1人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎发育的影响P：原代培养第5－6d细胞;S1－S5：传代1－5代培养第4－5d细胞;T2、T4：传代第2和第4代培养第id细胞,设此…     

角膜组织工程支架壳聚糖-胶原复合膜的性能

制备了壳聚糖-胶原角膜组织工程支架，考察了复合膜支架的光学性能、力学强度、结晶性、吸水率、亲水性、微观形貌及细胞亲和性，发现支架内胶原与壳聚糖两种分子间存在较强的相互作用，且具有良好的相容性，支架表面平滑均一，内部呈现层状有序结构．壳聚糖-胶原复合膜具有优异的透光率和适宜的湿态力学强度．细胞培养实验中，人角膜缘上皮细胞能在支架上较好地粘附和增殖分化，显示复合膜支架具有良好的细胞亲和性．结果表明壳聚糖-胶原复合膜有望成为一种性能良好的角膜组织工程支架．     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外发育的影响，将小鼠２细胞胚胎与人输卵管上皮细胞进行体外共培养．结果显示：无论原代培养还是传代培养的人输卵管上皮细胞都可使胚胎发育率提高，发育速度加快．经传代４次以后的细胞对胚胎发育的促进作用有下降的趋势，所以传代第１至第４代是应用于共培养的最佳选择．同一代细胞中已贴壁稳定生长的细胞对胚胎发育的促进作用比刚经传代尚未贴壁的细胞大．     

两种尿激酶原变体（Ala^175→Ser,Tyr^187→His,Lys^300？…

利用定点突变方法,构建了尿激原变体基因ｍｕｋ１（Ａｌａ＾１７５→Ｓｅｒ,Ｔｙｒ＾１８７→Ｈｉｓ,Ｌｙｓ＾３００→Ｈｉｓ）及ｍｕｋ２（Ａｌａ＾１７５→Ｓｅｒ,Ｔｙｒ＾１８７→Ｈｉｓ）。两种尿激酶原变体在大肠杆菌ＢＬ２１中表达得到包涵体,经体外变复性,ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析,Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ吸附除支双链尿激酶,得到的蛋白均为银染一条带。用人工合成的发色底物Ｓ２     

非线性增殖和耗散算子方程的迭代解

设Ｘ是一致光滑Ｂａｎａｃｈ空间和Ｔ：Ｄ（Ｔ）∪→Ｘ→Ｘ是一连续增殖算子，Ｄ９Ｔ）和Ｒ９Ｔ）分别表Ｔ的定义域和值域。对任意给定的ｆ∈Ｘ，由Ｓｘ＝－Ｔｘ＋ｆ。Ａ↓ｘ∈Ｄ（Ｔ），定义映象；Ｓ：Ｄ（Ｔ）→Ｘ，作者证明，在适当条件下，关于Ｓ的Ｍａｎｎ迭代序列和Ｉｓｈｉｋａｗａ迭代序列强收敛于方程ｘ＋Ｔｘ＝ｆ的唯一解。     

山羊胚胎的体外发育及冷冻保存研究

采用体外培养的方法，对山羊２～８细胞胚进行培养以后将体外发育至囊胚的胚胎进行冷冻保存，以便探讨山羊早期胚的体外培养方法和冷冻方法对体外发育胚冷冻效果的影响。将胚胎分别放入Ｍ１９９、Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞和Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞＋ＥＧＦ的培养液中进行培养，选取发育至囊胚期的胚胎分别以甘油和乙二醇为冷冻保护剂进行冷冻保存。结果体外培养胚的囊胚发育率在三个处理组中分别为１２．５％、７０．６％和７６．９％。使用Ｍ１９９处理组与添加输卵管上皮细胞、添加输卵管上皮细胞和ＥＧＦ的处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。冷冻解冻胚的形态正常率和发育率在以甘油和乙二醇为防冻剂的处理组中分别为６８．７、５８．３％和７８．６％、７２．８％。两组之间无明显差异，结果表明，采用与输卵管上皮细胞共同培养的方法能够提高山羊胚胎体外培养的发育率，以甘油和乙二醇为冷冻防冻剂均适合于山羊体外发育胚的冷冻保存，两者相比乙二醇的效果略优于甘油。     

新生大鼠海马神经干细胞的体外培养及鉴定

的探讨新生大鼠海马神经干细胞（NSC）的体外培养和诱导分化的条件和特点。方法分离出生1d大鼠海马,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖,用5-溴脱氧尿苷（BMU）标记处于增殖状态的神经干细胞,应用免疫荧光染色方法行巢蛋白（Nestin）、5-溴脱氧尿苷（BrdU）、β-Ⅲ型微管蛋白（Tuj-1）、波形蛋白（Vimenfin）和Galc-C免疫荧光染色,对NSC的增殖及其分化的细胞进行鉴定。结果体外培养的NSC增殖成神经干细胞球并传代,鉴定为Nestin染色阳性细胞和5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记染色阳性细胞,并可诱导分化为神经元细胞（Tuj-1染色阳性细胞）、神经胶质细胞（Vimentin染色阳性细胞）和少突胶质细胞（GMc-C染色阳性细胞）。结论采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的新生大鼠海马神经干细胞。     

映射的周期群

本文研究了对给定的映射ｆ：Ｄ→Ｂ和 Ｐ（Ｄ）的子群 Ｍ，是否存在映射 ｇ：Ｄ→Ｂ（或ｇ：Ｂ→Ｃ）使得ｆ与ｇ的和、差、积、商以及合成映射ｆ±ｇ，ｆｇ，ｆ／ｇ和ｆｏｇ的周期群等于Ｍ的问题，并取得了相应的判定条件．     

水牛乳腺上皮细胞的体外培养

对水牛乳腺上皮细胞进行了原代培养，培养液由４０％的１９９、４０％的ＤＭＥＭ加２０％的犊牛血清组成。乳腺组织块接种在铺有鼠尾胶原的培养瓶中，在ＣＯ＿２培养箱中３７℃封闭培养一周后，可分生出多边形单层上皮细胞，培养过程中，成纤维细胞逐渐减少，二周后呈现以上皮细胞为主的不规则生长区域。在培养２５天的单层上皮细胞中，出现拉网（ｎｅｔｔｉｎｇ）结构。以上结果表明，利用乳腺组织块在体外培养可获得较纯的单层乳腺上皮细胞。     

视黄酸对斑马鱼胚胎发育的影响

作者首次通过Ｂｒｄｕ－ａｎｔｉ－Ｂｒｄｕ法标记处于Ｓ期细胞核等系列实验表明，视黄酸对斑马鱼早期胚胎的中枢神经系统影响较大，主要表现为由前胸缺损而引起的小头畸形、无眼或无心脏，但后脑及脊髓部分的原始反射弧仍存在，而对尾芽只作用于顶端生长区．另外，利用低浓度的视黄酸还诱导出了过早出现的爪蟾前肢及火鲑鱼晚期尾芽胚的腹鳍，说明视黄酸对软骨的发生依浓度不同而有促进与抑制两方面的作用。