鼠痘病毒PCR检测方法的建立及在鼠源性生物制品检定中的应用

目的建立小鼠鼠痘病毒PCR检测方法,并应用于鼠源性生物制品的检测。方法根据鼠痘病毒基因组序列中保守的crmD片段设计一对引物,建立鼠痘病毒PCR检测方法;人工感染20只小鼠,对其肝、脾、肾、脚掌及血液采用该方法进行检测;提取鼠源性生物制品中DNA,采用该方法检测其是否存在鼠痘病毒。结果该方法可以检测到稀释至10-5感染鼠痘病毒的细胞,在BHK21细胞和牛痘病毒中均未扩增出相应片段;该方法可检测出人工感染小鼠不同组织中病毒DNA;在鼠源性生物制品中未检测出鼠痘病毒DNA。结论该方法具有良好的特异性和敏感性,可以应用于染病动物组织及鼠源性生物制品中鼠痘病毒的检测。     

ICR母鼠代乳在长爪沙鼠剖腹产净化中的应用

目的优化长爪沙鼠剖腹净化的技术方法。方法在超净工作台中对长爪沙鼠进行剖腹取胎,选择有2～3胎哺乳经验的ICR母鼠代乳,统计子鼠成活率和离乳率,绘制生长曲线。分别按小鼠微生物学和寄生虫学质量控制标准,对1月龄和2月龄的子鼠进行检测。结果代乳成活率超过50％,微生物学和寄生虫学检测均符合小鼠相关国家标准。代乳鼠与非代乳鼠其生长曲线没有差异。结论长爪沙鼠剖腹取胎,以ICR小鼠代乳方法,可以达到微生物净化的目的。     

piRNA-102526参与缺氧/复氧诱导心肌细胞焦亡作用及机制研究

为探究piRNA-102526与心肌细胞焦亡的关系，体外构建小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧模型，设置3 h、6 h、9 h、12 h、24 h缺氧时间梯度及6 h复氧条件，检测小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡水平。利用qRT-PCR检测piRNA-102526表达水平，Western Blotting检测焦亡相关蛋白(GSDMD、Caspase-1、IL-1β、ASC)表达，PI染色和LDH活性检测细胞死亡。研究结果显示，小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧6 h/复氧6 h,细胞焦亡相关蛋白表达水平最高。抑制piRNA-102526表达，小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡加剧，过表达piRNA-102526,小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡减少。这表明，piRNA-102526能通过Caspase-1参与经典焦亡通路，调节小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡过程。     

小鼠剖腹产净化方法研究

目的:探讨大理学院现用实验小鼠妊娠期、小鼠剖腹产的适宜时间、技术方法和仔鼠的代乳方法,为实现小鼠的净化作技术准备.方法:通过对小鼠饲养繁殖,摸清小鼠的平均妊娠期,确定剖腹产时间,在此基础上采用剖腹产手术对小鼠进行子宫摘除取胎,取出仔鼠进行代乳,观察代乳情况及代乳仔鼠成活率.结果:大理学院现用实验小鼠平均妊娠期为18.5d,在三次小鼠剖腹产实验中,第一次实验仔鼠代乳成活率为0,第二次实验仔鼠代乳成活率达100%,第三次实验仔鼠代乳成活率仍为100%.结论:小鼠剖腹产手术成功率为100%,已摸索出小鼠剖腹产净化方法的配套技术,包括剖腹产手术的适宜时间、技术方法以及代乳母鼠的选择和代乳方法.     

基因工程小鼠剖宫产生物净化技术的研究

目的改进剖宫产手术,提高剖宫产生物净化效率,获得SPF级基因工程小鼠。方法结合小鼠妊娠时间,触诊判断胎鼠发育情况推测剖宫产手术时间,优化剖宫产手术流程,缩短手术时间以提高手术效率;改进剖出仔鼠由SPF级ICR小鼠代乳以提高成活率;采用统计学方法对剖宫产净化数据进行分析。结果以触摸胎鼠四肢清晰,头部与躯干长度相似,且胎位朝下为剖宫产手术最佳时间,改进手术细节使成功率达( 97. 9± 8. 25) % ;选择分娩时间和手术时间间 隔 最 小 的ICR母鼠代乳,间隔时间< 24 h,可提高仔鼠的离乳率,平均窝离乳率为91. 2% ;经剖宫产净化技术成功获得的仔鼠检测微生物级别符合SPF级。结论 提高实验小鼠的净化效率,为基因工程小鼠的生物净化奠定基础。剖宫产净化技术的优化可显著。     

基因工程小鼠剖宫取胎的适宜条件

目的　净化升级基因工程小鼠。方法　采用统计学方法对基因工程小鼠剖宫取胎净化过程中的大量数据进行分析。结果　①按规律准确判断妊娠天数 ,可使剖得的仔鼠成活率达到 81 0 % ,②CD_1小鼠作为代乳母鼠剖得的仔鼠离乳成活率为 5 1 5 %。结论　适宜的剖宫取胎条件是提高剖出仔鼠和离乳仔鼠成活率的关键。     

盐酸瑞芬太尼细菌内毒素检查法的建立

目的:建立盐酸瑞芬太尼的细菌内毒素检查法.方法:参照《中国药典》2005年版二部附录"细菌内毒素检查法",用不同厂家的鲎试剂对不同批号的盐酸瑞芬太尼分别进行干扰试验,考察确立盐酸瑞芬太尼的细菌内毒素检查法.结果:采用灵敏度为0.5 IU.mL-1的鲎试剂,将本品稀释到0.254 mg.mL-1以下,对鲎试剂的凝集反应无干扰.结论:本品可用细菌内毒素检查法来控制内毒素,其细菌内毒素限值可定为20 IU.mg-1.     

一级实验动物昆明小鼠、金黄地鼠、豚鼠对人工感染绿脓杆菌的敏感性观察

离乳一周及三周龄的地鼠,豚鼠,昆明小鼠人工感染绿脓杆菌,一周龄地鼠、昆明小鼠有急性死亡,解剖可见急性肺出血等,肠内容物呈流汁状,肠壁伴有充血;豚鼠不发病．离乳三周的地鼠、昆明小鼠、豚鼠不发病．豚鼠体内未分离出绿脓杆菌．     

小鼠腺病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用

目的基于TaqMan建立小鼠腺病毒(MAdV)特异的荧光定量PCR检测方法,用于调查长爪沙鼠和小鼠等实验动物中MAdV感染情况。方法从NCBI下载小鼠腺病毒(MAdV-A和MAdV-3)基因组序列,比对分析后选择保守性较好的基因设计引物和探针。筛选最佳引物对和探针,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行验证,运用所建立的方法对长爪沙鼠和野鼠的共41份样本进行检测。结果经特异性和灵敏度鉴定,在设计的3对引物探针中确定一对最佳引物探针MAD-3,可区分小鼠腺病毒与猴腺病毒、禽腺病毒和树鼩腺病毒等24种病原,MAdV质粒DNA最低检测限为4.5 copies/reaction;MAdV纯病毒液和病毒/组织模拟样本的最低检测限均为440 copies/reaction。结论建立的Taq Man荧光定量PCR检测方法特异、灵敏和稳定,可用于大鼠、小鼠、长爪沙鼠等实验动物及鼠源性生物制品MAdV的检测。     

KM小鼠剖腹产手术中福利保障对仔鼠的影响

目的评估KM小鼠剖腹产手术中动物福利保障方案。方法通过在KM小鼠剖腹产手术中采用A、B两组不同动物福利保障方案,观察其对剖产仔鼠只数、10 d存活率、离乳体质量和离乳率的影响。结果 B组较A组仔鼠体质量增大,10 d存活率和离乳率显著提高。结论剖腹产手术中的动物福利保障,可提高仔鼠体质量增长速度、仔鼠存活率和离乳率。     

小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的 建立小鼠巨细胞病毒(Mouse Cytomegalovirus,MCMV)荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。方法 选取NCBI发表的MCMV Smith株DNA polymerase基因保守序列设计引物探针,建立MCMV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性、敏感性、重复性及稳定性进行验证,并应用该方法检测掺入MCMV的小鼠血液样品及2018年度送检的409份小鼠血液样本。结果 建立的MCMV荧光定量PCR方法标准曲线Slope为-3. 418,R2值为0. 999,扩增效率为96. 137%,可定量检测到的MCMV最低含量为47 copies/μL。以大鼠巨细胞病毒,猴巨细胞病毒,人单纯疱疹病毒,伪狂犬病毒及猫疱疹病毒I型为模板均无扩增曲线,特异性良好。方法组内和组间变异系数分别为0. 39%～0. 68%和0. 48%～1. 01%,重复性和稳定性好。可检测到掺入小鼠血液样品中MCMV病毒的最大稀释度为1∶1000(100. 75 TCID50/0. 1 m L),409份小鼠血液样品经检测均为阴性。结论 建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法有很好的敏感性、特异性及稳定性,可有效地检测小鼠中MCMV,为实验小鼠MCMV的监测及相关标准的补充完善提供了技术参考。     

Efficient transfer and expression of human clotting factor IX cDNA in neonatal hemophilia B mice mediated by VSV-G pseudotyped retrovirus

The feasibility of in vivo gene therapy for hemophilia B by VSV-G pseudotyped retroviral vector was introduced. The novel packaging cell line 293GPG was used to produce VSV-G/G1NaBAIX pseudotyped virus with the highest titers up to 8.5×10⁸ cfu·mL^-1. In contrast to the conventional retrovirus, VSV-G pseudotyped virus was more resistant to inactivation by serum complements (P＜0.001). Our results also demonstrated that VSV-G pseudotyped virus was more stable in neonatal mice serum than in adult mice serum (P＜0.01). After intraperitoneal injection of different doses of virus, hFIX antigen was detected and lasted for more than 120 d, the highest level reached (72.5±6.1) ng·mL^-1. Moreover, the functional activity was improved to some extent in all hFIX-treated mice, the most remarkable improvement was observed in the mice treated with higher dose of virus whose clotting activity increased to (3.4±1.5)% and APTT (activated partial thromboplastin time) reduced to (43.2±7.2) s. The anti-hFIX antibody was not detected by the method of Bethesda, no germ line transmission and any side effects associated with gene transfer were found. Our results indicated that neonatal gene therapy for hemophilia B mice by VSV-G pseudotyped retrovirus is promising.     

地铁车辆生产阶段产品质量符合性控制的研究

基于庞巴迪制造体系的管理模式,本文就地铁车辆生产阶段如何保证质量、编制项目质量计划、实施质量检查和根据客户制造车辆的适用标准及要求进行实验和生产等问题做了探讨,并概述了地铁车辆生产阶段产品符合性控制的要点:即货源地检查、来料检查、工序检查、最终检查.     

干涉滤光片在PCB机器视觉检测中的应用研究

分析了干涉滤光片的特性和不同波长的入射光在特定印制电路板(简称PCB)中的光谱响应,提出一种利用干涉滤光片提高PCB机器视觉检测效率的方法;该方法具有可以明显提高图像的清晰度,简化图像处理的复杂程度,减小检测误判和降低漏检率等优点。     

革新中国医疗器械注册检验制度的建议

 注册检验是第二类和第三类医疗器械产品注册上市前的强制性检验程序，中国医疗器械检验服务市场发展较落后，第三方检验机构发展缓慢。针对当前医疗器械注册检验主要由官方医疗器械检验机构完成，导致政企主体责任不分、行业检验需求难以满足的问题，建议在厘清监管部门和行业企业的关系基础上，从自我检验、委托检验、检验机构角色转型等途径来革新现行医疗器械注册检验制度。     

计算机化的铸件内部缺陷在线检测

提出了一个计算机辅助的铸件内部各种的检测分析系统，为铸造生产的反馈控制提供了重要的信息。分析了8个等级的7类铸造缺陷共56幅标准铸造缺陷图像。文中提出的基于图像系列的自动检测系统取得了以下成果：（1）提出了满足在线检测实时要求的快速图像处理算法；（2）提出了针对不同类型铸件缺陷分类和识别的启发式方法；（3）给出了关键铸件缺陷类型的分析方法。     

图象处理和计算机视觉检测技术在美国

在大规模生产条件下,人们总希望能使产品质量达到100％合格,其中,最困难的任务之一就是检测问题.本文综述了美国近年来图象处理及计算机视觉检测技术在工业界的应用状况.图象处理及计算机视觉检测技术在美国工业生产和质量控制中起着愈来愈重要的作用.它具有快速、准确、无损、高效等优点,因此,它被广泛应用于电子工业、汽车工业、木材工业、纺织工业、食品加工及包装工业.在电子工业中尤为活跃,并已取得了极大的成功.     

基于效益最大化的桥梁检修决策模型的探讨

检查与维修是桥梁管理工作中的两个重要环节。不同的检查结果导致不同的维修决策,从而影响维修成本。如何选取最佳的检查方案与检查时间,使检查的净效益最大化,是制定桥梁检修策略中值得探讨的问题。本研究运用贝叶斯分析方法,建立一种确定桥梁检修策略的动态模型,该模型包含了多阶段的“信息收集——数据分析——决策”过程,同时将先验信息和检查信息相结合,为决策提供更加充分的数据支持。算例考虑了两种检查方案和四种维修方案集,以检查净效益最大化为目的,在分析基准期内设计最佳的检查时间和检查方案,同时对可能出现的检查结果制定最佳维修方案。     

蓝宝石晶片质量检测体系研究

阐述了蓝宝石晶片质量检测的重要性，根据蓝宝石晶片国家标准和国际质量保证体系，结合目前蓝宝石晶片生产和科研的实际情况，提出了蓝宝石晶片质量检测体系，包括蓝宝石晶片质量检测内容、检测方法和检测设备，通过试验研究，该质量检测体系能够满足光电子领域所需的蓝宝石晶片生产要求。