金银花枝叶抗猪蓝耳病毒有效活性部位化学成分的分离与鉴定

通过测定金银花枝叶提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的Marc-145细胞的最小保护浓度和对病毒感染滴度的影响来评价其体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的活性.结果显示,金银花枝叶95%乙醇提取物经D101型大孔树脂吸附后,得到的60%乙醇/水洗脱部位对PRRSV感染细胞的最小保护浓度为6.25μg/mL,6.25μg/mL 60%乙醇/水洗脱部位使PRRSV病毒滴度从105.8 TCID50降低至100.3 TCID50左右,即60%乙醇/水洗脱部位具有良好的体外抗PRRSV活性.利用溶剂提取法、正相硅胶柱层析、Sephadex LH-20和RP-HPLC等色谱法,从该有效活性部位中分离得到了5个化合物,通过理化性质和1 H NMR、13 C NMR等光谱数据鉴定化合物分别为Dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 4′-O-β-D-glucoside(1),Apigenin 5-O-β-D-glu-copyranoside(2),Secoxyloganin(3),Benzyl alcohol O-(6′-O-β-D-xylopyranosyl)-β-D-glucopyr-anoside(4)和Sweroside(5).     

猪繁殖与呼吸障碍综合征的RT-PCR诊断

根据猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的全基因组序列,设计合成一对特异性引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法。对两份疑似病料进行检测,结果两份均为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒阳性。结合流行病学,临床症状以及病理解剖变化,诊断为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染。     

猪圆环病毒2型与猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断

2007年4月,龙岩市某存栏母猪达200头的规模化猪场,保育栏仔猪出现体温升高,呼吸困难,咳嗽,耳、鼻端、四肢及下腹部皮肤发紫,经临床剖检及病理观察大体判断为圆环病毒2型与猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染,为进一步确诊,进行了实验室诊断.分别设计了PCv2及PRRSV的扩增引物,结果从病例中扩增出相应的产物.通过临床、病理诊断及实验室检测.确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒与圆环病毒2型混合感染.     

MDCK单克隆细胞生长特性分析

目的:分析MDCK(犬肾细胞,Madin-Darby canine kidney cells,MDCK)单克隆细胞的生长特性,确定MDCK单克隆细胞库的可用性。方法:通过台盼蓝拒染测定细胞复苏活率,依据细胞生长的快慢、好坏和观察细胞形态判定细胞的生长速度、状态和形态.结果:MDCK单克隆细胞平均复苏活率为0.954±0.016,2～3 d长满的细胞占92.1%.57.9%的细胞生长状态良好,具有多角上皮样、梭形成纤维样和圆形岛状样三种形态.结论:MDCK单克隆细胞库中细胞复苏活率达到0.954±0.016,92.1%的单克隆细胞株在2～3 d长至单层致密,细胞状态良好.库内细胞有三种形态,可为病毒敏感细胞基质筛选提供丰富的资源。     

高致病性PRRSV ORF6和ORF7基因的遗传变异分析

从GenBank中选取8株国内报道的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株,应用DNAStar软件对其ORF6、ORF7基因序列进行分析,与VR-2332株、LV株、国内及周边国家分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较,并绘制系统进化树.结果表明,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株的ORF6、ORF7核苷酸与VR-2332株的同源性为95.1%-95.4%、93.8%-94.1%,与欧洲型（LV）的同源性为69.4%-69.6%、67.9%-68.5%;ORF6、ORF7推导氨基酸与VR-2332株的同源性为97.7%、94.4%-95.2%,与欧洲型（LV）的同源性为80.0%-80.6%、65.3%-66.1%.系统进化树表明,8株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒株仍属于美洲型.说明猪繁殖与呼吸综合征病毒不断变异的现今,ORF6和ORF7基因依然高度保守.     

猪圆环病毒Ⅱ型抗体检测ELISA试剂盒的制备

猪圆环病毒(PCV)两个血清型中只有PCV2为致病性病毒.将ORF2蛋白作为抗原建立区别两型PCV的血清学检测方法.去除N端信号肽的ORF2片段在大肠杆菌中BL21(DE3)中进行了表达.SDS-PAGE凝胶电泳表明在26 k D处有一个明显的表达条带,并且可以和猪圆环病毒阳性血清发生反应,表明重组蛋白表达成功.以表达的ORF2蛋白作为包被原,建立了检测猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法.与商品化试剂盒同时检验78份临床血清,符合率为95%;同时与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病毒均无交叉反应.     

两类猪ADP-核糖基化因子的克隆分析与原核表达载体构建

哺乳动物小G结合蛋白——二磷酸腺苷-核糖基化因子(ADP-ribosylation factors,Arfs)除在囊泡运输、细胞骨架重排和调节细胞吞噬等方面起重要作用外,还与病毒的感染有关.前期研究发现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染早期ARFs基因表达明显上调,然而在猪只中ARFs与PRRSV的感染至今知之甚少.本研究中,猪ARF1和ARF4分别被克隆,序列分析发现:ARF1包含一个长度为546bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),预测编码181个氨基酸,理论分子质量为20.70kDa,pI为6.62;ARF4包含一个长度为543bp的开放阅读框,预测编码180个氨基酸,理论分子质量为20.50kDa,pI为5.46.蛋白序列结构分析显示猪ARF1和ARF4蛋白含有典型的p loop,switch区,interswitch区和N端疏水区的Hasp,在第二位都含有可被肉豆蔻酰基化的甘氨酸.猪ARF1和ARF4的原核表达载体也被构建,为进一步研究其在PRRSV感染过程中的调控提供基础.     

猪繁殖和呼吸综合征病毒福建毒株ORF5的序列分析及原核表达

根据猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)已发表的核苷酸序列,设计了一对特异性引物(p1/p2),用RT-PCR扩增PRRSV福建毒株FJ-1的全长糖基化囊膜蛋白基因(ORF5),将扩增产物连接到pUCm-T载体并转化大肠杆菌DH10B,筛选阳性重组质粒进行序列测定与分析.再设计另一条引物(p3)与p2从重组载体pUCm-T-ORF5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的tGP5的编码序列tORF5,克隆入表达载体pGEX-4T-3后在大肠杆菌中表达.结果表明,FJ-1毒株ORF5基因为603 bp,编码200个氨基酸,与北美型参考毒株VR-2332、CH-1a及欧洲型参考毒株LV的氨基酸同源性分别为87%、89%和53%,推定福建毒株FJ-1属于北美型毒株.原核表达产物经过SDS-PAGE及Western Blot分析,证实为GP5与谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白.分子量为41 kDa.表达量约占菌体蛋白的15%,主要以包涵体形式存在.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SCM株ORF5基因抗原表位克隆表达及其免疫性研究

为鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒SCM株(PRRSV-SCM)囊膜糖蛋白GP5的免疫原性,利用RT-PCR方法从PRRSVSCM株ORF5中扩增大小为231bp的目的基因并构建表达载体PET32-GP5,将其转入大肠埃希菌Rosetta,运用IPTG通过条件优化诱导其表达.检测结果表明:最佳诱导条件为IPTG浓度1mmol/L在37℃下作用5h,表达大小约28kU的融合蛋白.通过Western-blot和间接酶联免疫吸附试验检测表达蛋白,结果显示该原核表达的融合蛋白可与PRRSV阳性血清发生反应,证明该蛋白具有免疫反应性.这为将来研制检测试剂盒以及后续研究PRRSV亚单位疫苗提供了重要依据.     

条斑星鲽连续性鳍细胞系的建立与鉴定

为了建立条斑星鲽鳍细胞系,为其细胞工程及病毒学研究奠定基础,对经Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法所得鳍组织碎块分别用DMEM/F12、L-15和M199培养液(pH7.2)在18～26℃进行了鳍组织的体外培养,并在所筛选出的最适培养液和培养温度下通过添加羧甲基壳寡糖、碱性成纤维样生长因子(bFGF)和I型胰岛素样生长因子(IGF-I)启动了鳍细胞的原代培养。体外培养结果显示,条斑星鲽鳍细胞的最适培养液为DMEM/F12培养液,最适培养温度为22℃,原代培养鳍细胞的生长分裂状态旺盛,细胞形态主要为成纤维样,20d后便可形成汇合细胞单层,经过连续的继代培养已建立了条斑星鲽的连续性鳍细胞系,目前已传至第135代;生长特性检测结果显示,第60代鳍细胞系细胞的群体倍增时间为56.9h,其生长分裂状态依然十分旺盛;染色体分析结果显示,第60代鳍细胞系细胞虽然出现了染色体的非整倍性,但其特征性染色体数目仍为46条,并具有2sm+44t的正常二倍体核型,证明所建立的细胞系确为条斑星鲽连续性鳍细胞系。该细胞系为条斑星鲽的细胞工程育种和病毒-细胞相互作用提供了一个理想的体外研究体系,具有重要的理论意义和应用价值。     

城市景观河道不同驳岸界面水生生物多样性

对具有不同驳岸方式(鹅卵石堆砌驳岸、自然泥岸、石砌驳岸和砼仿木桩驳岸)景观河道水陆交错界面上覆水质及界面水生生物多样性进行了定量研究。结果表明:泥岸与卵石堆砌驳岸界面上覆水质总体优于石砌驳岸和砼仿木桩驳岸方式;泥岸与卵石堆砌驳岸方式所营造的生态环境更适于界面浮游生物的生存、栖息和繁衍,特别是浮游动物;泥岸着生生物多样性优于其他驳岸方式;卵石堆砌驳岸虽相比其他两种非生态界面有一定优势,但并不明显,这与卵石表面坚硬,不利于水生生物附着有关。因此,近自然的泥岸和卵石堆砌驳岸方式更利于保持水生生物多样性并有较其他驳岸方式更好的水质净化作用。     

佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

基于因子分析的中国商业银行流动性水平的实证研究

以2004~2013年中国10家商业银行的面板数据为样本,运用因子分析法建立商业银行流动性综合得分指标,来观测商业银行流动性水平。结果表明,商业银行的资产质量、资产负债结构以及资本充足率是影响其流动性的主要因素。其中,城市商业银行的流动性要远好于国有控股的商业银行以及中型股份制银行,同时,2004年到2013年我国的商业银行的总体的流动性水平都处于波动上升的趋势,流动性状况不断得到改善。     

棉铃虫细胞系SFE—HA—8212的克隆化及对HaSNPV受纳性提高的克隆系的建立

用细胞临界生长密度法对棉铃虫蛹卵巢细胞系ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２进行克隆化，获得８株克隆细胞系．各株克隆细胞系各自的形态较为均一，但相互间在形态、生长特性、对病毒受纳性等方面有很大差别，其中一株ＣＳ细胞对棉铃虫单粒包埋型核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）的受纳性明显高于ＳＦＥ—ＨＡ—８２１２细胞，形成多角体的细胞比率、多角体的产量、游离病毒粒子的产量及多角体蛋白的产量均有提高，是研究和应用ＨａＳＮＰＶ的有效系统．     

应用SCID鼠筛选肝癌转移性亚克隆及M-H7402亚细胞系的建立

本研究应用人肝癌细胞SCID鼠转移模型，筛选和建立肝癌转移细胞系，旨在为肝癌转移研究提供实验材料．采用人肝癌细胞H7402，腋后背部皮下接种SCID鼠，接种后66天时，在荷瘤鼠赢弱时引颈处死，取其肺组织，进行原代细胞培养和传代培养，获得肝癌细胞H7402的亚细胞克隆，命名为M—H7402．然后，对M—H7402细胞进行了生物学鉴定，检测了细胞形态、染色体、细胞动力学、细胞周期、甲胎蛋白表达、癌基因表达和转移相关基因表达等指标．结果显示，M—H7402细胞的生长、增殖和形态等与亲本细胞H7402十分相近，其染色体形态仍为人类核型，众数维持在72～80之间，占75．0％．RT—PCR检测结果显示，M—H7402细胞甲胎蛋白表达为阳性．Western blot检测结果显示，与亲本细胞H—7402相比，癌基因C—myc表达水平较高，转移抑制基因nm23的表达水平明显下调．从肺组织中获得的肝癌转移细胞系M—H7402，在体外可连续传代培养，细胞形态不变．应用SCID鼠筛选获得的亚细胞克隆，与亲本细胞形成配对关系，可为肝癌细胞转移的研究提供新的实验材料。     

基于Bootstrap-DEA的我国商业银行效率评价与对比

在DEA模型中引入Bootstrap方法,分别在规模报酬不变和规模报酬可变条件下对金融危机前后我国67家商业银行的初始DEA效率值进行纠偏,并对国有银行、股份制商业银行和城市商业银行的效率水平进行了对比研究.采用Bootstrap截断回归法对影响效率的因素进行检验.实证结果表明:银行经Bootstrap调整的DEA效率显著低于初始DEA效率值;与国有银行相比,股份制商业银行和城市商业银行的效率水平受金融危机的影响较大;适度扩大银行规模、提高盈利能力及创新能力能够提高银行的技术效率,而过多的营业支出及过度分散的股权结构会降低银行的技术效率.     

泄漏原油沿河岸滞留行为

为研究输油管道泄漏事故发生后,河面漂浮原油在河岸的滞留行为与影响因素,通过河流动态模拟试验,设置流速、岸型、植被种类及覆盖量等变量,研究不同工况下河岸砂土吸附量与总滞留量的变化规律。结果表明:河岸砂土的吸附量及滞留量会随水面流速增大而增大;柔性植物河岸相对于刚性植物河岸与无植物河岸更易滞留原油,滞留量约为刚性植物河岸的2.87~6.19倍,无植物河岸的4.37~10.01倍;植被覆盖量增大会使河岸滞留量增大,但会减小刚性植物河岸吸附量,增加柔性植物河岸吸附量;岸型不同会导致水流状态不同,对原油登陆河岸会有较特殊的作用。     

毛冠鹿胚胎有限细胞系的建立及生物学特性研究

建立了毛冠鹿胚胎肺、肾有限细胞系,并对细胞形态、生长速度及核型等生物学特性进行了观察,发现了毛冠鹿新核型,根据C－带分析结果,提出了毛冠鹿中存在B染色体,而核型多态的实质是B染色体的多态。     

非利息收入对商业银行绩效影响的实证研究——基于我国16家上市银行的面板数据

近年来,我国商业银行积极通过各项举措开展非利息业务,但是目前各银行拓展非利息收入的前提是提高非利息收入有助于改善银行的经营绩效,而这一前提现在尚缺乏有利的证据。根据我国16家上市银行2003—2010年的财务数据,构建面板数据模型对非利息收入和银行经营绩效之间的关系进行回归分析。结果发现国有控股银行与股份制商业银行得出了截然相反的结论;当非利息收入不会引起经营成本大幅上升的情况下,增加非利息收入才有助于银行收益率水平的提高。