富含大豆异黄酮豆腐凝胶的研究

为了进一步改进豆腐加工工艺,减少大豆异黄酮流失,制备富含大豆异黄酮的豆腐,以豆腐得率和大豆异黄酮保持率为分析指标,考察食用胶添加量、LL-50A接种量、蛋白酶制剂添加量对大豆异黄酮保持率的影响.通过正交分析法得到最佳工艺条件为卡拉胶添加量1.25‰、LL-50A接种量0.03%、蛋白酶制剂添加量300,U/L.在此条件下,豆腐得率为213.43,g/100,g,大豆异黄酮保持率为2.52,mg/g.     

大豆异黄酮对大鼠的心肌电生理效应

目的探讨大豆异黄酮对大鼠的心肌电生理效应.方法采用微电极电生理技术观察大豆异黄酮对麻醉大鼠心肌电生理效应.结果大豆异黄酮可缩短大鼠心肌动作电位复极化50%的时间(APD50,P<0.001)及复极化90%的时间(APD90,P<0.01).结论大豆异黄酮可缩短心肌动作电位时程,其机制可能与阻滞钙通道有关.     

槐果碱对人红白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

研究了槐果碱对人红白血病细胞株K562的增殖抑制和诱导细胞凋亡的作用，应用流式细胞仪进一步观察槐果碱对K562细胞周期的影响。结果表明：槐果碱对K562细胞生长有明显的抑制作用，且这种抑制作用呈浓度依赖性、时间依赖性。细胞经0．8g／L、1．0g／L的槐果碱作用48h后，即呈现典型的细胞凋亡形态学变化，作用72h后DNA凝胶电泳出现片段的梯形条带。流式细胞仪分析显示，用1．0g／L槐果碱使K562细胞阻滞于G0／G1期，作用72h后G0／G1细胞比例由38．0％上升到56．2％。槐果碱对人红白血病细胞K562的增殖具有明显的抑制作用，并能诱导其发生凋亡。     

大豆异黄酮对小鼠脑组织中胆碱酯酶和氨基酸类神经递质及记忆的影响

采用不同剂量的大豆异黄酮饲喂小鼠,观测大豆异黄酮对小鼠记忆功能、脑组织中氨基酸类神经递质含量、脑组织与血液中胆碱酯酶活性的影响.结果表明,实验所用的三个剂量(30、60、120 m g/kg.bw)的大豆异黄酮对小鼠的记忆能力均有不同程度的提高;大豆异黄酮使小鼠血液和海马中胆碱酯酶(AChE)活性以及大脑皮质与海马组织中甘氨酸(G ly)含量降低,而大脑皮质与海马组织中天冬氨酸(A sp)和谷氨酸(G lu)含量升高.此结果提示,大豆异黄酮具有调节脑组织中氨基酸类神经递质和胆碱酯酶代谢的作用,这可能与大豆异黄酮调节记忆功能有关.     

玉竹中高异黄酮类化合物生物活性研究

采用四唑盐(MTT)比色法、白细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选模型及二氢乳清酸脱氢酶抑制剂筛选模型对从玉竹中分离出的4个高异黄酮类化合物进行生物活性评价,探讨化合物结构与其活性之间的构效关系.高异黄酮类化合物1～4对肿瘤细胞K562,A549和HCT-15具有细胞毒性,IC50为7～35μg/mL;化合物1～4对人白细胞弹性蛋白酶有抑制作用,IC50分别为13.1,70.4,13.8,55.2μg/mL;化合物2,4对二氢乳清酸脱氢酶有一定的抑制作用,IC50分别为10.0,11.1μg/mL.高异黄酮类化合物的生物活性与其取代基的类型及位置有关.     

黄腐酸有机锡羧酸酯的合成及抗肿瘤活性

以黄腐酸和有机锡化合物为原料,合成了8个新的有机锡化合物.通过红外光谱、元素分析、电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)对其进行结构表征,并利用MTT法测定了目标化合物的体外抗肿瘤活性.结果显示,目标化合物对人急性骨髓白血病细胞(KG-1a)、大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞(PC12)和人慢性髓原白血病细胞(K562)均有较好的增殖抑制作用.其中三苯基锡黄腐酸酯(3g)、三环己基锡黄腐酸酯(3h)能较强地抑制被测的三种癌细胞,IC_(50)值在10.79~29.22 mg/L~(-1),抑制效果最好为10.79±0.37 mg/L~(-1);二甲基锡黄腐酸酯(3a)、二辛基锡黄腐酸酯(3f)对PC12细胞的抑制作用也较好,其IC50值分别为34.41±0.61、52.41±1.58 mg/L~(-1).     

大豆异黄酮对卵巢切除大鼠糖脂代谢和血清瘦素、抵抗素表达的影响

为探讨大豆异黄酮对卵巢切除大鼠糖脂代谢和血清瘦素、抵抗素表达的影响,将12周SD大鼠分成3组,假手术(Sham)组、卵巢切除(OVX)组和大豆异黄酮(OVX+Gen)组,每组7只,卵巢切除术后10 d,OVX组和Sham组大鼠每天腹腔注射生理盐水0.1 ml/只,OVX+Gen组每天注射大豆异黄酮0.2 mg/只,连续注射30 d后处死取血,检测子宫病理改变、血糖血脂和胰岛素水平、血清瘦素和抵抗素含量.结果发现卵巢切除后大鼠总胆固醇、HDL和LDL均增加(P<0.05),但胰岛素、血糖、甘油三酯、血清瘦素和抵抗素水平变化不明显(P>0.05);卵巢切除后补充大豆异黄酮,可促进子宫内膜上皮部分增生,但胰岛素、血糖、总胆固醇、甘油三酯、LDL和HDL、血清瘦素和抵抗素水平均无明显变化(与OVX组相比,P>0.05),结果提示大豆异黄酮对卵巢切除大鼠糖脂代谢参数和血清瘦素、抵抗素水平影响不大.     

大豆种子萌发和幼苗生长对锑胁迫的响应

为研究锑（Sb）对大豆种子萌发及幼苗生长的影响,采用水培方法,进行了锑胁迫大豆种子发芽和根伸长观察实验,并对大豆2周幼苗的根部和茎叶部的锑含量用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分别进行了测定。结果表明：0~200 mg/L浓度范围内,Sb对大豆发芽势和发芽指数的作用呈现为整体促进、低强高弱的趋势,即各实验浓度组发芽势均高于空白组,在15 mg/L浓度时达到最大值;对发芽率无影响;对根伸长有抑制作用,且随锑浓度的增大而增大;15 mg/L时,其对大豆的活力指数的促进作用最为明显;15~50 mg/L浓度范围内茎叶部测得Sb含量较高,测定最高值出现在50 mg/L组为2.45 mg/kg,各组根部均未检出。     

红车轴草异黄酮化合物的分离鉴定

对国产红车轴草（Trifolium pratense L.）乙醇提取物的乙酸乙酯部分进行化学成分研究。采用溶剂处理和各种色谱方法从中分离得到了8个异黄酮化合物,并利用波谱技术鉴定了结构。这8个化合物分别为樱黄素、德鸢尾素、鹰嘴豆芽素A、芒柄花素、红车轴草素、染料木素、毛蕊异黄酮和大豆素。     

红车轴草提取物对db/db小鼠糖脂代谢的影响

探讨红车轴草异黄酮提取物(red clover extract,RCE)对雄性db/db 2型糖尿病小鼠糖脂代谢的影响。选用6周龄db/db实验小鼠,随机分成三组,每组4只。每日一次定时定量灌胃,每周测其血糖水平。结果表明,用10和50 mg/kg/day剂量的RCE处理小鼠5 w后,血糖水平分别比未处理组显著降低了40.90%(P<0.01)和50.38%(P<0.001),血清甘油三酯比未处理组降低了47.57%(P<0.01)和43.47%(P<0.01),血清总胆固醇比未处理组降低了35.59%(P<0.05)和35.19%(P<0.05)。同时实时荧光定量RT-PCR结果显示50 mg/kg/day RCE处理组db/db小鼠肝组织APOC3的mRNA表达水平比未处理组显著下降了54.9%(P<0.05)。这些结果说明了红车轴草异黄酮提取物可能通过抑制肝APOC3的表达改善2型糖尿病小鼠的血脂水平。     

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2的表达抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞的增殖

利用磷酸钙沉淀法将重组的质粒ｐＣＭＶ５－ｐｅｍｔ２与ｐＳＶ－ｎｅｏ共转染,经Ｇ４１８筛选免疫细胞化学和免疫印迹法检测蛋白表达。获得稳定表达ＰＥＭＴ２的阳性克隆。     

石蒜碱对人白血病细胞K562凋亡作用的研究

为了研究石蒜碱对人白血病细胞K562的凋亡作用,采用MTT法检测石蒜碱对K562细胞的细胞毒作用,数据表明石蒜碱对K562细胞的IC50为16.000μmol/L.流式细胞仪检测石蒜碱对K562细胞凋亡率的影响,数据表明给药剂量越大,其凋亡率越高,凋亡率与给药剂量呈依赖关系.激光共聚焦扫描显微镜检测石蒜碱对K562细胞膜电位的影响,数据表明随着给药剂量增大,膜电位逐渐降低,且成剂量依赖关系.结果显示石蒜碱能够诱导K562细胞凋亡并使其膜电位降低.     

Apoptosis induced by （DIPP-L-Leu）2-L-Lys-OCH3 in K562 cells

Apoptosis as a mechanism of deleting cells from tissues plays an important role in physiological and varieties of pathological situations, especially cancer conditions. In order to search for tumor cells apoptosis inducers, the inhibition effects on K562 cells of N-phosphoryl dipeptide methyl esters were studied by MTT assays, and (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 was the compound which had the best activity. From the studies of the typical apoptotic morphologic changes, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry analysis, it could be concluded that (DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3 could induce apoptosis of K562 cells in a dose-dependent manner, and the IC50 was 22.66 μmol/L according to MTT assays.     

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V.FITC&;PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸（Okadaic acid, OA）对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明：OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC₅₀分别为65 ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化：细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V.FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现：OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明：OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。     

大蒜素对人肺腺癌细胞SLC-89增殖的影响

目的:观察大蒜素对人肺腺癌细胞SLC-89增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素与SLC-89细胞共培养72 h,运用MTT法测定大蒜素的IC50。将IC50、IC50/2、IC50/4剂量的大蒜素与SLC-89细胞共培养72 h后,运用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法分别测定细胞端粒酶活性,运用流式细胞技术测定细胞PCNA的表达率。加入等量生理盐水共培养作为对照组。结果:大蒜素能抑制SLC-89细胞的增殖,其IC50为79.8μg/mL,IC50和IC50/2剂量的大蒜素能显著抑制SLC-89细胞端粒酶的活性,IC50、IC50/2、IC50/4剂量的大蒜素都能显著抑制SLC-89细胞PCNA的表达。结论:大蒜素能抑制SLC-89细胞的增殖,其PCNA的表达比端粒酶活性更容易受到下调。     

PinX1基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

探讨了PinX1 基因在乳腺癌MCF-7 细胞生长和细胞周期中的作用, 初步探讨了该基因用于乳腺癌临床治疗的可行性. 采用RT-PCR 技术从293-T 细胞中扩增PinX1 基因, 将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1 中, 再将重组质粒转染MCF-7 细胞. 通过real-time PCR 检测PinX1 基因的mRNA 表达, 用MTT 法检测转染前后细胞生长曲线的变化, 用流式细胞仪检测转染目的基因后细胞生长周期的改变. 检测结果表明, PinX1 基因已经在转染后MCF-7 细胞的细胞核内稳定表达, 乳腺癌细胞生长明显减缓(P <0.05), 增殖变慢(P <0.05), 细胞生长阻滞于G0/G1 期, 说明PinX1 基因可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的生长和增殖.     

姜黄素对人膀胱癌细胞系T24体外侵袭的作用

目的探讨姜黄素(curcumin)对人膀胱癌细胞系T24体外侵袭能力及其作用机制.方法以不同浓度的姜黄素作用于膀胱癌T24细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Transwell法实验观察T24侵袭能力的变化,Western blot法检测MMP-2和VEGF蛋白表达的差异.结果姜黄素能有效抑制T24细胞的增殖,并抑制T24细胞的体外侵袭能力,呈时间-剂量依赖性(P0.05).20μmol/L和50μmol/L姜黄素作用细胞24 h后,MMP-2,VEGF蛋白的表达量下降(P0.05).结论姜黄素对T24细胞的增殖和侵袭能力有抑制作用,其机制可能与下调MMP-2和VEGF的蛋白表达有关.     

云芝多糖影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡的研究

研究云芝多糖(CVP)对宫颈癌HeLa细胞系的增殖、凋亡及产生途径。采用MTT法测定了CVP对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,流式细胞仪检测凋亡细胞的比例,qRT-PCR检测P53、Bcl-2和Fas基因在细胞处理前后表达量的变化。结果显示：CVP以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长。作用时间在24 h,48 h和72 h时对细胞抑制的抑制率分别为92%、95%和98%;当CVP浓度达到1.25 mg/L时,作用24 h、48 h和72 h时的IC50值分别为0.2507±0.01 mg/L、0.2720±0.04 mg/L和0.2736±0.03 mg/L;当CVP浓度为0.5 mg/L时,作用24 h和48 h后细胞凋亡率分别为26.36% 和63.81%;CVP处理HeLa细胞24 h后,Bcl-2基因的表达被显著下调。研究表明：CVP促进HeLa细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2基因的表达下调有关,推测是通过Bcl-2介导的途径促进细胞凋亡。图4表1参30     

Effects of soy isoflavone extracts on the growth of estrogen-dependent human breast cancer (MCF-7) tumors implanted in ovariectomized nude mice

In this study, we explored the effects of soy isoflavone extracts on the growth of estrogen-dependent human breast cancer (MCF-7) tumors implanted in ovariectomized athymic mice. The ovariectomized athymic mice were implanted with MCF-7 cells. They were fed with low, moderate and high doses of soy isoflavone extracts, at dietary concentrations of 6.25, 12.5 and 25 g/kg, respectively. The expression of ki-67 was detected by immunohistochemistry. The pS ₂ expression in tumors was analyzed by real-time PCR. Estrogen level in the serum was measured by chemiluminescence enzyme immunoassay. Compared with the control group, dietary soy isoflavone extracts had a significant stimulatory effect on MCF-7 tumor growth in mice (P < 0.05). The ki-67 and pS ₂ mRNA expressions in tumors were significantly increased by 6.25 and 12.5 g/kg dose of soy isoflavone extracts (P < 0.05). And, estrogen level in serum of 6.25 and 12.5 g/kg dose groups was higher than that of control group (P > 0.05). In conclusion, in the tested dietary concentration range soy isoflavone extracts had a stimulatory effect on tumor growth. 6.25 and 12.5 g/kg doses of soy isoflavone extracts can increase the cell proliferation in tumors and induce estrogen-responsive pS2 expression. Supported by National Natural Science Foundation of China (Grant No. 30572133)