常见肝癌细胞系的转铁蛋白受体表达差异分析及主动靶向载体效率比较

转铁蛋白受体1(TfR1)可介导细胞内吞过程,从而摄取与之特异结合的纳米颗粒,因此成为许多主动靶向型纳米载体的靶点。研究表明,肝癌细胞存在TfR1高表达现象,可作为肿瘤治疗纳米药物递送系统的关键性靶点。体外评价是TfR1靶向纳米载体的重要研究环节,然而肝癌细胞模型种类繁多,其TfR1表达水平可能存在一定差异。本研究选择了几种常见的肝癌细胞系,包括HepG2、Hep3B、MHCC97-H以及Huh-1,分别从mRNA水平以及蛋白水平测定了细胞系TfR1的表达情况,考察了转铁蛋白(Tf)以及转铁蛋白核酸适配体(Tf-APT)对不同细胞的亲和效率。同时,制备了包载紫杉醇的TfR1靶向脂质体,并考察其对不同细胞系的细胞生长抑制作用。结果表明,四种肝癌细胞系在mRNA水平以及蛋白水平均存在TfR1的表达差异;同时,体外抗肿瘤结果显示,不同肝癌细胞系对紫杉醇-TfR1靶向脂质体的敏感性也存在显著不同。     

转铁蛋白偶联荧光纳米钻石靶向体系的制备及HeLa细胞吸收机制研究

以荧光纳米钻石(FND)作为药物载体和探针,转铁蛋白(Tf)作为靶向配体,聚赖氨酸(PL)做桥梁,制备了荧光纳米钻石-聚赖氨酸-转铁蛋白(FND-PL-Tf)靶向纳米颗粒;以人宫颈癌细胞(HeLa cells)为体外模型,研究靶向纳米颗粒与细胞的作用,探讨细胞摄取纳米颗粒的转运机制,为纳米颗粒靶向输送药物和肿瘤检测提供有价值的理论依据。结果表明细胞摄取FND-PL-Tf纳米颗粒的数量与颗粒浓度、时间及纳米颗粒表面偶联转铁蛋白量有关;由物理吸附或共价偶联Tf获得的FND-PL-Tf纳米颗粒均为网格蛋白决定、转铁蛋白受体介导机制进入细胞。这些研究表明FND-PL-Tf纳米颗粒具有潜在的靶向输送药物和肿瘤靶向检测功能。     

多肽的表面展示与结构库

表面展示是一种新的基因操作技术,它使表达的多肽以融合蛋白形式展现在噬菌体或细胞表面,保持相对独立的空间结构和生物活性。该技术可用于研究多肽(蛋白质)的性质、相互识别和作用,并据此从巨大展示库中选择特定靶功能的多肽结构。常用丝状噬菌体、T₄噬菌体、λ噬菌体以及细胞构建表面展示系统。表面展示库包括重组噬菌体抗体库、随机短肽库、多肽构象库、cDNA展示库和基因突变体展示库。表面展示技术可用于人工抗体和疫苗的制备、抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点的确定、特异调节分子的分离、细胞表面工程的研究、多肽药物的研制,以及生物分子实验定向进化等研究。     

靶向SARS-CoV-2的纳米抗体研究进展

席卷全球的新型冠状病毒病(corona virus disease 2019,COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的,SARS-CoV-2是继严重急性呼吸综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus, SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(middle east respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV)后人类发现的第三种引起全球大流行的冠状病毒.刺突蛋白(spike protein, S)的受体结合域(receptor binding domain, RBD)可以与细胞表面的血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme2,ACE2)结合,进而入侵细胞内部,启动病毒的复制.为了预防和治疗新冠病毒肺炎,研究人员研发了多种疫苗、小分子药物及抗体药物.纳米抗体(nanobodies, Nbs)是可识别抗原的最小结...     

TNF-α诱导的信号转导中乙酰化蛋白质全谱及其功能的探索

通过将体内稳定同位素标记细胞培养技术(AACT/SILAC)与LC-MS/MS联用,对哺乳动物细胞中TNF-α/NF-κB信号通路相关蛋白在TNF-α及TSA存在情况下乙酰化变化情况进行了研究.在TSA协同处理的、TNF-α刺激的细胞中鉴定到3个乙酰化蛋白,其中核糖体蛋白L4(60SRibosomal Protein L4,RPL4)已被报道存在乙酰化的后修饰,转铁蛋白受体1(Transferrin Receptor Protein 1,TfR1)和凋亡诱导因子3(ApoptosisInducing Factor,Mitochondrion-associated,3,AIFM3)尚未见报道.     

不同毒力的结核分枝杆菌感染巨噬细胞TfR与Lf的表达

为探讨结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗菌株(BCG)分别感染巨噬细胞,检测细胞内转铁蛋白受体和乳铁蛋白表达量并分析其时相性变化及意义。分别采用结核分枝杆菌H37Rv株和BCG菌株感染巨噬细胞RAW264.7细胞株,于感染后1、6、12、18、24h,应用ELISA技术检测巨噬细胞上清液中TfR和Lf的表达量;应用Western blot技术于上述时间点检测巨噬细胞内TfR的表达量。结果显示,ELISA和Western blot技术均证实感染模型组检测的TfR表达量均高于正常对照组,ELISA结果显示上清液中TfR表达量在感染12和18h差异最明显,具有统计学意义(P<0.05)。Western blot显示:于模型建成后1、6、18h、差异有统计学意义(P<0.05)。另外,ELISA证明感染可诱导巨噬细胞分泌较高水平的Lf,于感染后6、12、18、24h均高于正常对照组,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。由此可知,结核分枝杆菌感染导致巨噬细胞内的TfR和Lf表达更高。     

T细胞抑制性受体及其免疫调节作用

 T 淋巴细胞在免疫系统中发挥细胞免疫、免疫调节等功能。然而, T 细胞的过度激活会导致疾病(如哮喘、系统性红斑狼疮等)的发生, 抑制T 细胞的过度激活是免疫治疗的重要研究方向。T 细胞抑制性受体可通过与其配体结合调控T 细胞增殖或功能发挥, 并在过敏性疾病、移植排斥等治疗中作为治疗靶点。因此, 进一步解析T 细胞抑制性受体的三维结构、配体-受体复合物组分及其下信游号通路将有助于免疫治疗的发展。本综述总结了GITR、CTLA-4、BTLA、PD-1、LAIR-1、TIM-3、TIGIT 等T 细胞抑制性受体的生理生化特性、与其配体结合后对T 细胞免疫功能的调节以及抗体药物的研究进展。     

超顺磁氧化铁标记对干细胞转铁蛋白受体基因和蛋白表达的影响

目的:探讨超顺磁氧化铁(SPIO)标记对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)内转铁蛋白受体(TfR)基因和蛋白表达的影响,及SPIO标记与TfR表达的剂量-效应关系.方法:从3周龄雄性SD大鼠脂肪组织中提取干细胞,用多聚赖胺酸(PLL)介导SPIO(质量浓度分别为12.5～、25～、50～、75～、100～μg/mL,PLL/SPIO为1:0.03)标记大鼠ADSCs 12 h后,用普鲁士蓝染色、台盼蓝及噻唑蓝法(MTr)试验检测SPIO标记率、细胞活力及增殖力,并用逆转录聚合酶链反应( RT - PCR)、Western blot技术检测各质量浓度SPIO标记细胞内TfR表达情况.结果:PLL介导SPIO可以简单、高效地标记大鼠ADSCs.当SPIO终质量浓度为25～100 μg/mL时,SPIO标记率达到近100％;各质量浓度SPIO标记可抑制细胞增殖,但对细胞活力没有明显影响.SPIO标记大鼠ADSCs内TfR表达水平下调,其中rfR mRNA表达量以标记后24h时最低,TfR蛋白表达量以标记后7d时最低.随着SPIO标记质量浓度的增加,TfR表达水平越低,持续时间越长,但当SPIO标记质量浓度达25μg/mL及以上时,TfR mRNA表达维持在一定的水平.结论:PLL介导SPIO可以简单、高效的标记大鼠ADSCs.PLL介导SPIO标记可引起大鼠ADSCs内TfR表达水平暂时性降低以减少对细胞外铁的摄取,且随着SPIO标记质量浓度的增加,TfR表达水平越低,低水平表达持续时间越长.     

导入蓖麻毒蛋白的供体淋巴细胞在小鼠皮肤移植中产生的特异免疫耐受

以小鼠为研究对象进行皮肤移植,受体为BALB/C鼠,供体为C₅₇BL/6鼠。用氯化钙介导蓖麻毒蛋白(ricin)进入供体鼠的脾细胞制成毒细胞,适时地注入受体体内。带有蓖麻毒蛋白供体脾细胞,一方面可提供特异移植抗原(主要组织相容性抗原)使特异的T,B淋巴细胞识;另一方面,它被识别裂解后,释放蓖麻毒蛋白,又可杀伤与其识别的T,B淋巴细胞,使受体对供体移植物产生耐受。实验共设两组,在皮肤移植前后分别用包埋蓖麻毒蛋白的供体脾细胞处理,两组移植皮片存活时间均比相应对照组有显著延长(t＞t_0.01)。混合淋巴细胞培养实验和淋巴细胞转化实验证明了实验组对供体细胞的免疫应答及免疫细胞的分化能力均受到抑制。对这一新设想进行了初步的研究。     

NK细胞免疫识别及其调节机制与免疫相关性疾病

自然杀伤受体(NKR)和Toll样受体(TLR)是天然免疫系统最重要的二群天然免疫识别受体家族,位于机体抵抗外来侵袭的第一道防线.二者各自具有独特的识别外来或内源性的危险信号、区分自我和非我的识别机制,是启动固有免疫和适应性免疫应答的关键链接分子.NK细胞是天然免疫系统的核心成员,具有早期识别和清除病毒感染和肿瘤细胞等功能,同时也是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁.以NK细胞为载体将TLRs/NKRs连接起来,可以较好地反映机体内外环境变化或刺激时固有免疫对适应性免疫的调节作用,为有效控制感染、炎症、肿瘤及自身免疫性疾病提供崭新的治疗策略.     

转铁蛋白-阿霉素复合物与HepG2细胞的作用机制

利用转铁蛋白受体介导的内吞作用,使转铁蛋白-阿霉素复合物(Tf-DOX)靶向作用于肿瘤细胞具有深远意义.文章利用荧光光谱确定了阿霉素对转铁蛋白具有荧光猝灭作用,且为静态猝灭.利用激光共聚焦显微镜观察到Tf-DOX可以靶向进入活的人肝癌细胞(HepG2)内,且5h时位于细胞质,24h时DOX解离进入细胞核.而同样条件,单独阿霉素5h已进入细胞核.利用流式细胞仪法检测了Tf-DOX进入细胞的转运机理,结果表明Tf-DOX是通过网格蛋白(Clathrin)介导、转铁蛋白受体决定的内吞机制进入细胞,具有温度、能量依赖性.体外培养条件下,利用MTT比色法检测Tf-DOX对HepG2细胞活力的影响,结果表明转铁蛋白-阿霉素体系保持较好的活性,相对单独阿霉素对细胞的杀伤力较强.这些结果表明转铁蛋白-阿霉素复合物具有明显的生物效应和潜在的生物医药价值.     

血清转铁蛋白受体的研究进展及临床意义

血清转铁蛋白受体(sT fR)是完整的细胞受体的一个可溶性节段,通过酶免疫法或免疫浊度法可从血清中检出。sT fR反映机体贮存铁的数量以及所需铁的数量,是判断机体是否缺铁的一项敏感指标。sT fR可以定量评价骨髓幼红细胞的生成,尤其适用于评价各类骨髓红系显著增生的溶血性贫血。     

家鸡生长激素释放激素受体(GHRHR)的蛋白表达与抗体制备

本研究采用RT-PCR等方法,构建编码家鸡两个GHRH受体(GHRHR1和GHRHR2)N-末端胞外结构域的原核表达载体,并在细菌中成功诱导其表达.利用离子亲和层析技术,纯化两受体的重组蛋白片段.在此基础上,利用重组蛋白在兔中制备了两受体的抗体,采用Western blot方法,初步验证这些抗体对垂体以及HEK293细胞中表达的家鸡GHRHR1和GHRHR2识别的有效性.     

禾谷炭疽菌中候选G蛋白偶联受体蛋白的找寻

G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor,GPCR)是生物中一类具有典型七跨膜结构域的重要细胞表面受体,对细胞信号转导过程具有重要作用.禾谷炭疽菌严重危害着玉米、高粱等禾本科植物的产业发展,然而,对于该菌中GPCR蛋白数量及功能尚未有系统性报道.基于典型GPCR蛋白序列所具有的七跨膜保守结构...     

荆豆(Ulex europaeus L.)凝集素Ⅰ的细胞表面受体研究

从Ulex europaeus L.种子中纯化的荆豆凝集素I(UEH I),不仅专一地凝集人O型血细胞,也能凝集牛精细胞,表明这些细胞表面存在有UEH I的受体.应用经FITC或~(125)I标记的UEH I与牛精细胞结合,研究受体在精细胞表面的分布;Glc、Con A、PHA和Fuc的浓度对~(125)I-UEH I与O型血细胞结合的影响;O型血细胞和牛精细胞与~(125)I-UEH I的饱和实验,获得饱和结合曲线或竞争性结合曲线,得出各自的Scatchard图,分别计算出O型血细胞和牛精细胞表面的UEH I受体的数目。     

米诺环素对PDB刺激的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响

为了分析米诺环素(MNC)对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,探讨其免疫抑制作用机制.我们通过分离小鼠淋巴结细胞,以佛波醇酯(PDB)刺激,用不同终浓度的MNC与淋巴细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期和中期活化抗原CD69与CD25的表达;以CFSE染色,加入多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析MNC对淋巴细胞增殖的影响;结果,荧光抗体染色显示MNC能显著抑制PDB诱导的T细胞CD69和CD25的表达;CFSE染色结果显示,MNC对佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导48 h的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性.从而我们认为MNC对小鼠淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用.具有独立于其抗菌活性的抗炎作用.     

杂交瘤细胞株功能性与非功能性V_k基因结构分析

本研究利用逆转录PCR技术和家族特异性引物,先后从9株分泌不同特异性单抗杂交瘤细胞株中扩增出了轻、重链可变区基因,并经克隆和序列测定。其中利用轻链引物(VL5.1和VL3.1)从分泌抗转铁蛋白受体(anti-transferrlin receptor)单抗的杂交瘤细胞株(7579)中扩增出了无功能的V_k序列。经分析和与GenBank数据库比较,该序列虽与BALB/cV_k21-E细胞株分泌的抗体轻链有98％同源性,但是在其V/J连接区内有4个碱基对缺失,导致后续阅读框架移位,因而出现终止密码子而致翻译停止。当改变引物(VL5.2和VL3(JK1/2))之后,又分别从该种杂交瘤细胞株中扩增出有功能的V_k基因序列。说明同种杂交瘤细胞中,部分细胞出现基因异常性重排(aberrant rearrangement),而这种重排的V-J基因片段来源于原融合细胞MOPC-21骨髓瘤细胞系。     

双铽转铁蛋白与K5 62细胞结合常数的测定

在 0℃、p H7.4条件下 ,使用 1 2 5I标记人血清脱铁转铁蛋白法测定了双 ( )转铁蛋白 (Tb C- 1 2 5I- apo Tf-Tb N)与 K5 6 2细胞的结合。结果表明 Tb C- 1 2 5I- apo Tf- Tb N 与 K5 6 2细胞结合的平衡常数为 2 .7× 10 7mol- 1· L,K5 6 2细胞的转铁蛋白受体数为 1.0× 10 6。     

结核分枝杆菌对感染小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的影响

探讨不同毒力结核分枝杆菌感染对小鼠肺泡巨噬细胞转铁蛋白受体(TfR)和铁蛋白(Fn)表达的影响及其时相性变化。利用制备的卡介苗(以下简称BCG)和结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株(以下简称H37Rv株)悬液,分别经小鼠尾静脉注射,建立各组小鼠感染模型,各组小鼠感染模型建立成功后,分别于第1、3、5、7、9、11、13、15天,进行各组小鼠肺泡灌洗,收集小鼠肺泡灌洗液,获取各组小鼠肺泡巨噬细胞。应用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR和Fn的表达。利用ELISA方法检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达结果显示:H37RV组与BCG组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达均高于空白对照组,在感染第7、9、11天差异最明显,具有统计学意义(P0.05)。利用Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞TfR表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RN组、BCG组、空白对照组三组之间差异有统计学意义(P0.05)。用ELISA方法和Western blot技术检测各组小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达结果显示:于模型建成后第7、9、11天,H37RV组与BCG组的小鼠肺泡巨噬细胞内Fn表达量明显减低,并且于第7天时表达量最第,异有统计学意义(P0.05)。结核分枝杆菌感染小鼠,导致小鼠肺泡巨噬细胞TfR的表达增高,而Fn的表达降低。不同毒力的结核杆菌感染后Fn蛋白表达差异并不明显,而不同毒力的结核杆菌感染后TfR蛋白的表达有差异性。