非心肌细胞对心肌细胞损伤的修复功能

制备Spraque-Dawley乳鼠心肌细胞悬液,其中约有40％属于非心肌细胞,统称为非心肌细胞。在离体培养的条件下,采用化学与物理因子对心肌细胞造成人工损伤,发现非心肌细胞对心肌细胞的损伤具有修复作用。     

非心肌细胞对受损心肌细胞LDH的影响

当心肌细胞受到损伤的时候,心肌酶——LDH(乳酸脱氢酶)会从细胞中泄漏出来。其受损程度越强,泄漏量也越大。作者曾发现心脏的非心肌细胞,对心肌细胞的损伤有明显的保护作用。为此,本文通过对心肌细胞、非心肌细胞以及混合细胞的培养液,分别进行连续的测定,发现当心肌细胞受到损伤的时候,非心肌细胞能使心肌细胞LDH的泄漏量明显地降低,从而证实了非心肌细胞对心肌细胞具有保护作用。实验方法 1.细胞悬液制备取出生2～3天的S.D乳鼠,剪成1～2mm~3组织块,以D-Hanks液洗涤,加入0.1％胰蛋白酶(Difco)液。在37℃的条件下用磁力搅拌,连续消化7次,每次15分钟,将后6次的消化液离心,1000 rpm 10分     

非心肌细胞对受损心肌细胞LDH的影响

当心肌细胞受到损伤的时候,心肌酶——LDH(乳酸脱氢酶)会从细胞中泄漏出来[1]。其受损程度越强,泄漏量也越大。作者曾发现心脏的非心肌细胞,对心肌细胞的损伤有明显的保护作用[2]。为此,本文通过对心肌细胞、非心肌细胞以及混合细胞的培养液     

白藜芦醇对心肌细胞缺氧性损伤的作用

本文的目的是观察白藜芦醇(Res)对大鼠乳鼠心肌细胞缺氧性损伤的保护作用.具体是通过建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧模型,采用MTT法检测心肌细胞活力,相差显微镜观察心肌细胞形态学及细胞搏动频率.结果表明白藜芦醇Res对缺氧诱导的大鼠乳鼠心肌细胞损伤具有良好的保护作用.     

黄瓜香水提物对自由基损伤心肌细胞的作用

目的观察黄瓜香水提物对自由基损伤的心肌细胞的作用.方法体外培养心肌细胞,以不同浓度的黄瓜香水提物进行干预,测定心肌细胞搏动频率及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用MTT法观察黄瓜香水提物对心肌细胞存活率的影响.结果自由基对心肌细胞造成损伤,不同浓度的黄瓜香水提物可减少LDH漏出,增加细胞存活率(P<0.05).结论黄瓜香对自由基损伤的心肌细胞具有保护作用.     

Se-scFv-B3对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

用H2O2损伤大鼠乳鼠的心肌细胞建立氧化应激损伤模型,考察谷胱甘肽过氧化物酶模拟物Se-scFv-B3对H2O2诱导的大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响.结果表明,Se-scFv-B3能部分增加心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,恢复线粒体膜电位,下调Caspase-3活力并降低细胞内活性氧的含量.表明Se-scFv-B3可以保护心肌细胞抵制H2O2诱导的氧化应激损伤.     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

探讨更为简单的SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,为临床应用建立心肌细胞模型.取出生24 h内SD大鼠的左心室,剪碎、消化、分离和纯化,进行培养,0.1 g/L胰酶消化,可以分离到形态完整、贴壁生长的心肌细胞.进一步通过离心、差速贴壁和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化得到95%以上的心肌细胞.成功建立了心肌细胞体外培养模型,获得了高纯度的心肌细胞.     

Se-scFv-B3对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

用H₂O₂损伤大鼠乳鼠的心肌细胞建立氧化应激损伤模型, 考察谷胱甘肽过氧化物酶模拟物Se-scFv-B3对H₂O₂诱导的大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤的影响. 结果表明, Se-scFv-B3能部分增加心肌细胞存活率, 减少细胞凋亡, 恢复线粒体膜电位, 下调Caspase-3活力并降低细胞内活性氧的含量. 表明Se-scFv-B3可以保护心肌细胞抵制H₂O₂诱导的氧化应激损伤.     

过量运动对大鼠心肌细胞钙离子通道的影响

研究过量运动对心室肌细胞钙离子通道的影响,旨在进一步探讨其在心肌损伤中的意义。制备离体心室肌细胞并用去甲肾上腺素（NE）诱导建立类似过量运动所产生的应激心肌细胞模型,应用流式细胞术（FCM）和Fura2荧光分光光度法测定应激心室肌细胞的凋亡率和心肌细胞内游离钙浓度变化。实验组心肌细胞异常活动可能导致钙超载,从而引起心肌细胞凋亡,导致应缴性心肌损伤的发生。     

心肌细胞培养技术的建立及蒙药广枣总黄酮对培养心肌细胞的抗氧化作用

建立了乳鼠心肌细胞原代培养技术，将广枣总黄酮（TFFC）用于ADR损伤培养心肌细胞模型上，观察培养基中LDH（乳酸脱氢酶）及MDA（丙二醛）含量的变化，结果表明，TFFC能减少受损心肌细胞LDH的释放（P＜0．05）并降低心肌细胞内MDA的含量（P＜0．05），TFFC对培养心肌细胞具有抗氧化作用。     

豚鼠气管平滑肌细胞培养

目的 建立一种简便、快捷的豚鼠气管平滑肌细胞培养方法。方法 幼年豚鼠气管平滑肌组织块原代培养 法。结果 豚鼠气管平滑肌组织块贴壁5～8d后可见细胞自组织块周围长出,细胞长梭形,核位于中央,呈辐射状 向四周生长。两周后细胞长满瓶壁。经α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-smooth muscle actin monoclonal antibody, α-SMA)免疫组化染色鉴定,获得的细胞为平滑肌细胞。结论 豚鼠气管平滑肌组织块培养法可快速获得数量充足 的气管平滑肌细胞。     

贵州小型猪心肌细胞超微结构的观察

观察贵州小型猪心肌细胞的形态和结构。方法应用透射电镜进行观察。结果贵州小型猪心肌细胞的肌丝有规律排列形成的周期性横纹明显可见,可分辨出Z线I、带、A带、H带和M线;在肌丝周围有丰富的线粒体;肌浆网不丰富,横小管十分细小,未见二联体;在Z线处,可见心肌细胞之间含有3种连接方式的特有连接结构——润盘。结论贵州小型猪心肌细胞的超微结构与人类极为相似,但也有其自身的特点。     

血管段孵育和原代血管平滑肌细胞培养的比较

探讨微血管段孵育方法能否与原代平滑肌细胞培养一样检测蛋白表达,以用于初步的基础研究,解决原代培养耗时、不易存活的问题。分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,使用胶原酶和木瓜蛋白酶混合消化单个血管平滑肌细胞,获取的平滑肌细胞采用含20%胎牛血清的DMEM培养基进行培养。培养的平滑肌细胞经特异性的α-actin进行免疫组化鉴定;血管段孵育是在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉三级以下分支,培养基孵育72 h。分别使用不同浓度的尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)孵育原代培养的平滑肌细胞和肠系膜三级分支血管段24 h,观察平滑肌细胞连接蛋白43(connexin43,Cx43)的变化。形态学和免疫组织化学鉴定表明,培养的原代细胞为血管平滑肌细胞。不同浓度NFA处理原代平滑肌细胞能够使Cx43表达量呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01);不同浓度NFA处理血管段能够使Cx43的表达量也呈浓度依赖性下降,相对于对照组具有统计学意义(P0.01)。由此可知,观察平滑肌细胞特异性蛋白Cx43的表达情况,使用血管段孵育的方法检测结果与细胞培养的结果相似。血管段孵育简单易行,可以作为类似实验的初步研究。     

中华宽体金线蛭神经元与神经节内平滑肌细胞间突触的超微结构

用胞内注射辣根过氧化物酶(HRP)的方法标记中华宽体金线蛭AP神经元。透射电镜下观察到神经节的内、外囊中的平滑肌细胞膜间、以及标记AP神经元的轴突末梢膜与神经节中平滑肌细胞间的连接。通常,单个的平滑肌细胞散布在神经节的内、外囊中,分别为椭圆形和梭形。平滑肌细胞含粗、细两种肌丝,有密斑,具有许多突起。神经节外囊中平滑肌细胞的细胞质中央区有许多糖元颗粒和一些线粒体及粗面内质网;两个嵌合的平滑肌细胞膜间距为13.1～26.1nm。首次观察到神经元的轴突末梢与外囊内的平滑肌细胞形成化学突触,突触裂隙10.2～15.3nm;AP标记末梢膜与外囊平滑肌细胞膜之间的间距为2.0～2.5nm,相当于缝隙连接的并置膜结构。     

血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递

血管内皮细胞和血管平滑肌细胞之间存在着肌内皮间缝隙连接，进行电和化学的信息传递，以协调血管的舒缩活动。电信号可以从内皮细胞到平滑肌细胞进行传递，相反，也可以从平滑肌细胞到内皮细胞进行传递。内皮源性超极化因子、乙酰胆碱、缓激肽、第二信使等物质亦可引起内皮细胞或，和平滑肌细胞细胞膜的超极化或去极化，参与血管内皮细胞与平滑肌细胞间的信息传递。     

2-APB对自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响

为探讨正常血压Wistar大鼠(Wistar rat,WR)和自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive rat,SHR)脑微动脉段平滑肌细胞电生理学及偶联力的异同,并观察2-氨基乙基二苯硼酸酯(2-Aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)对脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的影响。应用全细胞膜片钳技术方法,观察2-APB对WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响。结果显示,(1)SHR收缩压明显高于正常WR,差异有统计学意义(P0.01)。(2)SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput高于WR,差异有统计学意义(P0.05)。(3)2-APB可以浓度依赖性的降低脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput(或者增加Rinput)。(4)2-APB抑制WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞Ginput的IC50分别为0.21μmol/L和0.83μmol/L,差异有统计学意义(P0.05)。(5)2-APB浓度≥100μmol/L时,WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput、Ginput或Rinput与单个平滑肌细胞十分接近。由此可知,SHR较WR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接耦联力增强,2-APB可以浓度依赖地抑制WR和SHR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接,且对SHR的抑制效力较强。     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性实验研究

探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性,为组织人工血管的构建寻找理想的支架材料。将组织法体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上,在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况,用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数,复合培养7d后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）测定细胞周期、DNA指数。结果兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％,细胞增殖符合细胞的生长曲线,在PHB三维微孔支架上生长情况良好,并被证实为二倍体细胞。结论是兔血管平滑肌细胞和聚羟基西酯（PHB）的细胞相容性较好,但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互调节

研究常氧下微血管内皮细胞(MVEC)与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的相互调节。先滤膜培养大鼠肺微血管内皮细胞(LMVEC)后,再与PASMC复合培养,采用流式细胞仪检测PASMC周期的变化。复合培养后,正常情况下使PASMC的G1期细胞数减少,S＋G2／M期细胞数增多,即促进细胞生长;使LMVEC田C的G1期细胞数增多,S＋G2／M期细胞数减少,即抑制细胞生长。可见,MVEC与PASMC复合培养后,常氧下促进PASMC细胞生长,抑制LMVEC的增生,存在相互作用。     

肌细胞途径血友病B基因治疗的载体优化研究

构建了含有ＭＣＫ增强子,βａｃｔｕｎ启动子,及ｈＦＩＸ内含子１的３个载体Ｇ１ＮａＭＢＡＩＸ,Ｇ１ＮａＭＢＡｉＩＸ,Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ‘ＢＡＭ。转入ＰＡ３１７和成肌细胞Ｃ２Ｃ１２细胞后测定ｈＦＩＸ的表达,发现反向构建的Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ’ＢＡＭ表达最高且最稳定,而正向构建的Ｇ１ＮａＭＢａＩｉｘ的内含子常被剪切,在Ｃ２Ｃ１２细胞中表达不高。