胶体金免疫试纸法快速测定雌三醇

雌三醇(E3)在临床诊断、日用化工和畜牧业等领域具有广泛应用,同时它也是一种环境污染物,对E3的检测具有科学和应用意义.本研究采用竞争性免疫层析技术,以E3单克隆抗体-纳米胶体金复合物作为金标抗体,以E3偶联抗原为检测线(T线)、以羊抗鼠抗抗体为控制线(C线),通过条件的优化,制备出检测E3的胶体金试纸条.当试纸条C线和T线同时显色时,结果为阴性;当试纸条仅C线显色时,结果为阳性.所得检测试纸条测加标水样的最低检测限为100μg/L,测加标奶样的最低检测限为100μg/L,反应时间为10min,与雌酮、雌二醇、己烷雌酚等环境雌激素无交叉反应,具有良好的选择性.     

基于顺磁微粒的金黄色葡萄球菌肠毒素B免疫层析试纸条的制备

采用基于顺磁微粒标记抗体的免疫层析法,制备金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)快速定量检测的层析试纸条。利用EDC和NHS交联活化顺磁微粒,对顺磁微粒包被抗体的体系进行优化;根据双抗夹心法原理制备免疫层析试纸条,对制备的SEB免疫层析试纸条进行测试研究。优化的顺磁微粒偶联抗体的缓冲体系为p H 9.0,5mmol/L硼酸,0.05%Tween-20;磁珠包被抗体量为125μg/2mg磁珠,封闭剂为0.25%的脱脂牛奶,磁珠保存液为5mmol/L硼酸、0.05%Tween-20+0.05%Triton X-100,0.01%Na N3,0.5%BSA,p H9.0;建立的SEB顺磁微粒免疫层析试纸条T线抗体浓度为1mg/m L,最低检测限为1ng/m L,磁信号检测显示,该试纸条在SEB浓度0.1~1 000ng/m L范围内具有很好的线性关系。SEB顺磁微粒免疫层析法具有简单快速、灵敏度高、可定量的特点,可应用于SEB的快速检测。     

牛奶中三聚氰胺残留胶体金免疫层析快速检测方法研究

为建立牛奶中三聚氰胺免疫层析快速检测方法,采用胶体金偶联特异性三聚氰胺抗体,优化试纸条T线抗原包被量、金标抗体用量、二抗稀释倍数等条件,构建三聚氰胺免疫层析试纸条.结果表明,T线抗原包被量为0. 25μg/mL,金标抗体用量为9. 0μL/条,二抗稀释倍数为1:100时效果最佳;最优条件下该试纸条的最低检出限为0. 25μg/mL,结果可在5 min内进行判读,且牛奶样品不需任何处理可直接进行测定.本研究建立的免疫检测方法适用于牛奶中三聚氰胺的检测.     

定量检测血清降钙素原免疫层析试纸条的研制

将荧光胶乳微球用1株降钙素原(PCT)单抗进行标记,采用双抗体夹心法,制备定量检测降钙素原免疫层析试纸条。与罗氏电化学发光法对比,138例血清测试的阴、阳性符合率分别为96.7%和97.2%,质量浓度为0.1~100 ng/m L时,2种方法有显著相关性,在0.5~10 ng/m L时,差异无统计学意义。该试纸条检测限为0.09ng/m L,在4℃至少可保存12个月,稳定性良好。建立的检测PCT的方法具有快速、灵敏、稳定等特点,可用于临床检测和预后。     

生物素链霉亲和素联合免疫层析用于快速检测NT-proBNP

为提高常规免疫层析技术的检测灵敏度,引入生物素-链霉亲和素系统,以荧光微球作为标记物,建立了一种新型快速定量检测NT-pro BNP的方法.试验结果表明:新型试剂盒在0.02~30μg·L~(-1)范围能对NT-proBNP实现快速检测.在全血检测中,新型试纸条所测NT-pro BNP浓度与雷度快速免疫分析仪定量检测结果具有很好的一致性.新型免疫层析试纸条大大提高了快速检测的准确性,可广泛用于床旁检验(POCTs)等临床诊断阶段.     

食品中四环素残留快速检测方法的初步建立

为了建立金标记快速检测试纸条检测食品中四环素(TC)残留的新方法,用硝酸纤维素微孔滤膜(NC膜)作为包被材料;实验室自制金标记抗TC单抗,选择原溶胶40%制备金标记抗体溶胶;以TC-BSA包被检测线(T线),包被浓度选择1.5 mg/mL;实验室自制兔抗鼠IgG包被质控线(C线),包被浓度选择2.5 mg/mL.该试纸条灵敏度可达50 ng/mL,与酶联免疫法试剂做对比,100份牛奶样品的灵敏度等各项指标符合率为100%.该试纸条具有质量优良、操作简便、不需仪器设备、保质期长等特点,适用于食用动物养殖场、食品加工企业和食品进出口检验检疫等单位食品中TC的快速检测.     

辣椒、花椒中罗丹明B免疫层析分析

为建立以胶体金标记抗体为基础的罗丹明B(RB)快速检测技术,利用戊二醛法将RB的衍生物罗丹明123(R123)与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)分别合成完全抗原(R123-BSA)和包被抗原(R123-OVA),对雌性大耳白兔皮下注射R123-BSA获得多克隆抗体.胶体金作为示踪标记物标记到硝酸纤维素膜(NC膜)上,涂覆R123-OVA作为检测线,用羊抗兔IgG作为质控线,通过优化实验条件,开发了渗滤式胶体金免疫快速检测试纸条,研制出RB标准品浓度比色卡.以比色卡作为判定依据,以辣椒、花椒为研究对象,消除基质影响,进行试纸条检测.结果表明:RB线性为0.01~20 ng/mL,其最低检出限为0.5 ng/mL,试纸条显色结果明显.该试纸条实验成功,无需特殊设备即可实现现场快速检测,适用于快速定性检测香料中RB.     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

纳米金免疫层析法定量检测尿RBP

应用纳米金免疫层析技术(双抗夹心法)和柠檬酸三钠还原法建立一种对尿RBP的快速定量检测方法,并在此基础上研制出快速检测试纸条.该试纸条用纳米金免疫层析定量分析仪可在15 min内实现RBP定量检测,检测限为150μg/L(相当于150 ng/mL),检测范围为150～5000μg/L.与尿微量白蛋白(ALB)、转铁蛋白(TRF)、β2-微球蛋白(β2-MG)、尿纤维连接蛋白(FN)、溶菌酶(LZM)等肾脏疾病标志物无交叉反应.该方法特异性强、检测灵敏度高、范围广、简便快捷,在近端肾小管的损伤、糖尿病肾病等肾脏疾病的早期诊断及过程监控中具有较为广泛的临床应用.     

抗盐酸克伦特罗单克隆抗体的制备和鉴定

 以重氮反应将盐酸克伦特罗与牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白偶联制备免疫原和检测原,通过杂交瘤技术获得了3株能分泌特异结合CL小分子的抗体杂交瘤细胞株.经竞争法ELISA分析,9E3抗体的IC50质量浓度为19.85μg/L,14C5抗体为1.65μg/L,16F4抗体为0.84μg/L.在与类似物的交叉性反应中,16F4抗体与沙丁胺醇的交叉反应性为0.26%,特布他林为0.04%,与非诺特罗、肾上腺素、去甲肾上腺素的交叉反应性都小于0.02%.因此,所制备的抗盐酸克伦特罗的抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

重金属汞、镉离子快速检测方法建立及应用

采用荧光微球分别标记抗重金属汞、镉离子小鼠多克隆抗体,牛血清蛋白偶联EDTA螯合的重金属汞离子、镉离子包被硝酸纤维素膜,制成的荧光快速检测试纸,应用层析式竞争法检测水样中的重金属离子.重金属汞离子荧光检测试纸检测重金属汞离子的灵敏度为5.5 ng/mL,检测限为0.03 ng/mL,重金属镉离子荧光检测试纸检测重金属镉离子的灵敏度为0.51 ng/mL,检测限为0.04 ng/mL,与其余金属离子的交叉反应率低.所建立的方法操作简单,快速,灵敏度高,特异性好,可作为水样中重金属残留筛查的有效手段.     

一种检测砷（III）的适配体试纸条

利用三明治夹心法构建基于适配体胶体金的试纸条,目的在于开发切实可行的As(III)检测应用装置。通过As(III)与金标适配体的特异性结合,将其截留在试纸条检测线处。纳米金作为显色材料,其颗粒直径为（13 ± 1） nm。经过优化反应条件,选择Satorius CN 140作为硝酸纤维素膜,控制线上捕获探针链霉亲和素与生物素的最佳比例为1∶4,对应的划线浓度为10 μmol/L。检测线上1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐与N-羟基琥珀酰亚胺的最优比例为1∶3,金标适配体最优浓度为0.5 μmol/L。在最佳反应条件下,观察试纸条的显色结果,颜色响应信号与砷浓度形成很好的梯度关系,检测限为0.1 μmol/L。本试纸条对As(III)具有高度的特异性,并且稳定性良好。其检测成本不足1元,可满足低收入地区普通人群实时检测As(III)的要求。     

鱼类致病性迟钝爱德华氏菌胶体金快速检测试纸的研制

制备迟钝爱德华氏菌胶体金快速检测试纸并对其性能进行检测.以柠檬酸三钠作为还原剂制备胶体金颗粒,标记迟钝爱德华氏菌多克隆抗体,将羊抗兔IgG和纯化后的迟钝爱德华氏菌多克隆抗体包被于NC膜上作为质控线和检测线,以检测样品中的迟钝爱德华氏菌(E.tarda).结果表明:所研制的试纸特异性良好,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鳗弧...     

液相芯片技术检测马立克氏病病毒方法的建立

目的 建立检测马立克氏病病毒的双抗夹心液相芯片技术方法。方法 将捕获抗体偶联到19号微球,分别确定捕获抗体的偶联量、检测抗体和SA-PE抗体的工作浓度,用建立的液相芯片方法进行特异性、灵敏度、重复性及临床样品的分析。结果 1×106个荧光编码微球的抗体偶联量为2 μg,最佳的检测抗体与SA-PE的工作浓度分别为2 μg/mL和4 μg/mL。该方法特异性强,只检出马立克氏病病毒,其他病毒未检出;灵敏度为125 pfu/mL;批内批间的变异系数分别为0.85%和2.4%;对58份临床样品检出率为31%。与PCR方法比较,符合率为94.8%。结论 建立的马立克氏病病毒液相芯片检测方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好等优点。该方法可用于马立克氏病的监测,也可用于SPF鸡的筛选。     

免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的初步研究

本研究应用兔抗V.parahaemolyticus IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,·羊抗兔IgG包被对照线,胶体金标记免抗V.parahaemolyticus IgG-1,建立了检测副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的免疫金层析试纸条法(IGCA).结果表明,阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线,实验过程仅需5～15min即可判断结果,该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60× 104cfu/mL,与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应.将试纸条4℃存放6个月、常温存放3个月,37℃存放1个月,检测结果无差异.说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好,结果容易观察和判断,非常适于基层养殖部门应用.     

壳聚糖荧光标记反应研究

 以壳聚糖-海藻酸钙微球在体检测为研究背景,建立壳聚糖的荧光标记方法.以荧光素异硫氰酸酯(FITC)作为标记化合物,采用紫外-分光光度计在447nm下检测标记在壳聚糖上的FITC,通过m(FITC,μg)/m(壳聚糖,g)表征壳聚糖的荧光标记效率.考察壳聚糖溶液pH值、浓度、反应时间以及壳聚糖分子量、脱乙酰度对壳聚糖荧光标记反应的影响.结果表明:选取相对分子质量20万、脱乙酰度95%的壳聚糖配制成0.01g/mL的溶液,在pH₁₀的条件下与荧光素反应5h将制得标记效率为117.4μg/g的荧光壳聚糖.建立了一种稳定有效的壳聚糖荧光标记方法,为荧光标记壳聚糖-海藻酸钙微球提供了技术支持.     

壳聚糖-海藻酸钙微球荧光标记反应对微球膜强度影响的研究

以壳聚糖-海藻酸钙载药微球给药后的体内检测为研究背景,探讨不同反应条件下壳聚糖-海藻酸钙微球荧光标记反应对微球膜在模拟体液中的强度影响.以壳聚糖、海藻酸钠为微球制备载体材料,以异硫氰酸酯(FITC)为荧光标记物对微球进行荧光标记.采用标记了FITC的微球在模拟体液中的膨胀率来表征微球膜的相对强度.采用相对分子质量为50 000、脱乙酰度85%、荧光标记浓度0.01 g/mL的壳聚糖,成膜液浓度0.015 g/mL,成膜时间30 min制备出的荧光微球在模拟胃、肠液中表现出良好的膜强度及稳定性.为研究壳聚糖-海藻酸钙载药微球在体内的分布、吸收、降解特性提供了适宜的入体实验条件.     

使用X光透镜和位置灵敏正比计数器的高能量分辨微束XRF谱仪

报导一种新型微束X荧光分析谱仪,它由导管X光透镜和使用位置灵敏正比计数管的波长色散谱仪组成.谱仪具有高空间分辨,高能量分辨和高灵敏度的特点.从实验上研究了影响谱仪能量分辨的各种因素及用于稀土元素L线分析的可能性.实验结果表明谱仪使用X光透镜形成的X光微束的最小束径对Mo-Kα线为30μm,谱仪对Ti-Kα线的能量分辨为4.4 eV,对稀土元素L线的最低探测极限达到10-10g.     

基于对羟基桂皮醇的新型酶联荧光免疫传感系统测定布氏杆菌抗体

以一种纯天然产物对羟基桂皮醇(4-hydroxycinnamic alcohol,HCA)为辣根过氧化物酶(HRP)底物,建立对羟基桂皮醇-辣根过氧化物酶-过氧化氢新体系。对羟基桂皮醇本身只有极弱的荧光,在HRP催化下可被H2O2氧化成二聚体产物,该二聚体在315nm的激发光下能发射波长为467nm的强荧光,并且反应体系荧光强度增加值与HRP量在一定浓度范围内呈线性相关。根据此关系和竞争型免疫定量原理,建立兔布氏杆菌抗体测定的荧光酶联免疫传感体系,并对免疫测定条件如pH值、HRP-BrAb用量、BSA和流速等进行优化。运用制备传感体系测定兔布氏杆菌抗体的质量浓度线性范围为2.7～90μg/L,检测限为2.7μg/L,相对标准偏差为4.6%;对羟基桂皮醇在空气中较稳定,对人体无毒害,在临床上可代替传统HRP底物。     

基于辣椒碱标志物的试纸条快速检测地沟油

现有的地沟油检测方法由于耗时长、操作繁琐,不便于现场检测。文章使用以辣椒碱为标志物的胶体金试纸条可快速检测地沟油,且检测实际油样的检测限为10μg/L。该实验使用胶体金试纸条对16个食用油样品进行检测,其中5个样品检测出阳性,证明胶体金试纸条法可以准确检测出地沟油。胶体金试纸条法以其方便快捷、实时检测的优点,非常适用于地沟油的现场快速检测。