LTB融合禽流感病毒M2e基因在毕氏酵母中的表达

禽流感病毒一直是家禽和家畜健康养殖的巨大威胁,之前的研究表明,原核系统中表达的LTB和M2eHBc+融合基因的产物能有效诱导免疫动物对禽流感病毒M2e多肽产生特异性的粘膜免疫应答.酵母作为生物反应器应用于生物制品生产具有独特的优点.本研究构建了pPIC9K-LBM2eHBc+酵母表达载体并对酵母GS115进行了遗传转化,甲醇诱导表达结果表明LBM2eHBc+融合基因在酵母细胞中得到表达,表达出的融合蛋白能够被M2抗体识别.     

禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达

目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶基因（neuramidinase,NA）序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA（49～1 587 bp）、pMET A/NA（121～1 200 bp）,电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2＋亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。     

禽流感病毒HSNl血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达毒

目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒HSNI血凝素基因(hemaggludnin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA) 序列,为制备抗体和基因T程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5NI全长HA、NA基因并测序的基础 上。将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A／HA(49一l 587 bp)、pMET A／NA (121—1 200 bp),电转化真核酵母菌pMADl6,甲醇诱导表达,利用Ni“亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用 Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS—PAGE显示蛋白表 达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95％以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原 性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5NI HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的 开发等进一步的研究提供了依据。     

猪表皮生长因子在大肠杆菌中的串联表达

根据Gen Bank中猪表皮生长因子(p EGF)基因信息设计引物,通过PCR、亚克隆、基因重组等技术,构建得到p EGF拷贝数分别为1、2、3的原核重组表达质粒.用重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,在37℃诱导条件下,1、2、3拷贝p EGF重组质粒均能表达p EGF蛋白,灰度值分析表明:表达的融合蛋白占菌体蛋白总量分别为9.54%、20.37%、26.79%,表明在原核表达中,对p EGF进行同向串联,增加其拷贝数,可以提高p EGF在表达后融合蛋白中所占比例,相应提高p EGF蛋白产量.本研究为p EGF重组蛋白的高效表达和批量生产提供可靠的依据.     

羊布鲁菌外膜蛋白OMP2b的克隆，原核表达及纯化

研究羊布鲁菌外膜蛋白 OMP2b 基因的克隆,原核表达,以及纯化。根据羊布鲁菌 M5株外膜蛋白 OMP2b 蛋白基因序列设计引物,扩增出大小约为1130bp 的目的基因片断,克隆入融合表达载体 pGEX-4T-1,构建重组质粒 pGEX-4T-1-omp2b。在大肠埃希菌中将该蛋白表达并用亲和层析法纯化。用 Western-blot 分析方法鉴定纯化蛋白。结果成功构建了 pGEX-4T-1-omp2b 原核表达载体并在大肠埃希菌中表达了 omp2b 基因,纯化后所获得的蛋白与目的蛋白大小一致且与兔抗布鲁菌血清发生特异性反应,说明其为布鲁菌 OMP2b 蛋白。本研究成功构建了 pGEX-4T-1-omp2b 原核表达载体,并且在大肠埃希菌中进行表达,纯化的 OMP2b 蛋白具有良好的免疫原性。     

LTB的表达及其粘膜免疫佐剂活性分析

粘膜免疫是预防一些通过吸附粘膜组织侵入机体病原的很好措施,但粘膜免疫通常需要粘膜免疫佐剂,大肠杆菌(Escherichia coli)不耐热肠毒素的B亚基具有很好的粘膜免疫佐剂活性.本研究从大肠杆菌195菌株中扩增出LT(heat-labile enterotoxin)基因,测序后将其B亚基基因与pET32a连接构建了重组质粒pET32a-LTB,SDS-PAGE显示LTB(heat-labile enterotoxin B subunit)在原核细胞中得到表达,Western blotting和人神经节苷脂结合酶联免疫吸附试验(GM1-ELISA)结果表明,重组LTB具有抗原性和GM1结合活性.将其与禽流感M2e表位融合蛋白M2eHBc+混合通过滴鼻途径免疫小鼠,抗体检测结果表明,所表达的LTB能很好地提高共免疫抗原的粘膜和系统免疫应答.     

尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化

根据 GenBank 中 NDP kinase 的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成 NDP kinase 基因,构建原核表达载体 pET28a-NDP kinase 并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌 BL21（DE3）中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,重组产物采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化.经密码子改造和二级结构优化后 NDP kinase 基因长度为490 bp,其编码蛋白理论分子量为21.5 kDa,重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,在大肠埃希菌 BL21（DE3）中该基因经 IPTG 诱导可高效表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21.5 kDa,其单一蛋白纯度达95;以上.本研究成功构建了尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸酶（NDP kinase）基因的 pET28a 原核重组质粒,为进一步研究 NDP kinase 在尘螨疫苗免疫治疗中的作用机理提供了基础.     

日本血吸虫卵壳蛋白编码基因的扩增及克隆

目的:扩增和克隆日本血吸虫卵壳蛋白编码基因(SjESG),以研究其作为候选疫苗分子和药物靶点的可能性.方法:合成引物,以日本血吸虫雌、雄虫cDNA第一链为模板,RT-PCR扩增日本血吸虫卵壳蛋白编码基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建原核表达重组质粒,并经限制性核酸内切酶酶切分析和PCR鉴定.结果:从雌虫cDNA中扩增出624bp SjESG基因,原核表达重组质粒pET32a(+)-SiESG经限制性核酸内切酶酶切和PCR均获得624bp的DNA片段.结论:成功构建原核表达重组质#ipET32a(+)-SjESG.     

H5N1型禽流感病毒HA基因在烟草中的表达

禽流感病毒H5N1是可以直接感染人类的甲型流感病毒,发展植物源口服疫苗是疫苗研究的方向之一.本研究通过农杆菌介导的方法将禽流感病毒H5N1的HA基因转化烟草.共获得38株潮霉素抗性植株,经PCR和Southern-blotting检测,目的基因已整合到转基因植株的基因组中.Western-dotting检测结果表明,目的基因在转基因烟草中得到表达,具有免疫原性,获得了能够表达HA基因的植物口服疫苗候选植株.     

鸡补体因子C3d对禽流感病毒M2蛋白免疫应答反应的增强作用

M2蛋白是禽流感病毒中具有交叉保护性的结构蛋白，但其抗原性差，难以诱导高水平的免疫反应.分别将一个鸡补体因子C3d，2个C3d基因同禽流感sM2基因（缺失跨膜区的M2基因）以柔性肽链Linker串联连接，构建了4个重组质粒并在大肠杆菌中表达出4种带有谷胱苷肽硫转移酶（GST）的融合蛋白：GST-C3d-sM2，GST-C3d-L2-sM2，GST-C3d-L1-C3d-sM2，GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2.将纯化后的4个融合蛋白及对照GST-sM2蛋白免疫BALB/c鼠4次（每组10只），结果在三免后，4个融合蛋白免疫的BALB/c鼠体内抗sM2抗体滴度与对照组相比均差异显著（p<0.05），并且GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2组的抗体滴度最高.另外，分别构建重组质粒pcDNA-sM2和pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2，然后以这两种DNA疫苗与蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2和GST-sM2同时接种14日龄SPF鸡3次（每组15只）.结果表明，蛋白GST-C3d-L1-C3d-L2-sM2 和对照组GST-sM2的抗sM2抗体滴度差异明显（p<0.01），而pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2平均sM2抗体滴度也明显高于对照组pcDNAsM2（p<0.05）.分别以脂多糖（LPS）和刀豆蛋白（ConA）作为致裂原对SPF鸡的外周血淋巴细胞进行淋巴细胞转化试验 （MTT法）.结果以LPS刺激的淋巴细胞的增殖程度在融合蛋白GST-C3d1-L1-C3d2-L2-sM2免疫组与对照组GST-sM2之间以及pcDNA-C3d-L1-C3d-L2-sM2免疫组与对照组pcDNA-sM2之间均差异极显著（p<0.01），而Con A刺激的淋巴细胞各组之间则无显著差异.所有这些结果证实，鸡补体因子C3d无论是在原核系统表达的融合蛋白，还是插入DNA疫苗中均可以增强禽流感病毒M2蛋白引起的免疫应答反应.     

H2H与M2M共存场景下无人机辅助上行用户调度方案

针对人类用户和物联网用户共存时利用无人机作为中继节点采集物联网设备数据的场景,提出了一种基于累积分布函数的上行用户调度方案。方案在以最大化全网节点能效为优化目标的上行联合用户关联和用户资源分配问题建模过程中,考虑多用户分集以及网络负载均衡;为了求解该问题,方案利用用户吞吐量独立同分布的特点,通过松弛整数变量,结合增广拉格朗日法和标准的次梯度法,将难解的非凸问题转化为凸函数,再利用交替方向乘子法对凸问题进行分解并交替迭代优化,最终实现系统能效最大化并得到最优调度方案。仿真结果表明,该方案在全网效能和负载均衡方面优于现有方案。     

M2M: A Simple Matlab-to-MapReduce Translator for Cloud Computing

MapReduce is a very popular parallel programming model for cloud computing platforms, and has become an effective method for processing massive data by using a cluster of computers. X-to-MapReduce (X is a program language) translator is a possible solution to help traditional programmers easily deploy an application to cloud systems through translating sequential codes to MapReduce codes. Recently, some SQL-to-MapReduce translators emerge to translate SQL-like queries to MapReduce codes and have good performance in cloud systems. However, SQL-to-MapReduce translators mainly focus on SQL-like queries, but not on numerical computation. Matlab is a high-level language and interactive environment for numerical computation, visualization, and programming, which is very popular in engineering. We propose and develop a simple Matlab-to-MapReduce translator for cloud computing, called M2M, for basic numerical computations. M2M can translate a Matlab code with up to 100 commands to MapReduce code in few seconds, which may cost a proficient Hadoop MapReduce programmer some days on coding so many commands. In addition, M2M can also recognize the dependency between complex commands, which is always confusing during hand coding. We implemented M2M with evaluation for Matlab commands on a cluster. Several common commands are used in our experiments. The results show that M2M is comparable in performance with hand-coded programs.     

LTE中的流量自适应M2M接入控制算法

为了解决海量M2M终端接入引起的无线接入网过载问题,结合LTE中的退避重传机制,提出了一种适用于LTE随机接入的流量自适应M2M接入控制算法,通过实时反馈接入控制因子的方法,调整新到达M2M终端的前导序列传输概率以控制小区M2M终端的实际到达率,保证接入性能始终维持在LTE随机接入的最佳性能处.仿真表明:当M2M终端到达率高于LTE随机接入最佳性能对应的到达率时,通过采用所提算法,M2M终端的接入性能始终维持在LTE随机接入的最佳性能处.     

M2M网络上的改进直接匿名认证方案

针对现有可信计算平台中的直接匿名认证(DAA)方案存在计算过于复杂的问题,在已有的DAA协议基础上,结合M2M网络特点,提出了一种适用于M2M网络的I-DAA方案.该方案建立在椭圆曲线上的离散对数困难性问题的基础上,利用零知识证明和双线性映射理论,在证书申请阶段将部分DAA证书中原来由TPM计算的参数改为用系统公开参数替代,极大降低了资源相对较宝贵的TPM模块的计算量.同时,该方案中TPM的秘密信息改由TPM自己选取,从而减少不必要的计算开销.另外,TPM只需要申请一次DAA证书,以后即可直接向验证方提交验证信息,避免了一些现有协议的通信瓶颈.分析结果表明,I-DAA方案在保证安全的前提下降低了总体系统中尤其是TPM侧的计算复杂度,更适合于M2M系统及其他嵌入式系统应用环境.     

M1/M2指标对当前宏观经济的影响

M1/M2是评价货币供给流动效率的一个具体指标,也可以作为判断经济发展态势的指标之一.M1/M2的值趋大,往往通货膨胀压力增加,经济过热;反之,则经济趋冷,通货紧缩压力增加.从今年5月份开始,由于M1增速加快,M1/M2开始上扬,通货膨胀加剧的风险可能会增加,经济增长从过快转向过热的几率将会大幅度增加.     

M2M业务批量到达排队系统性能分析

针对M2M(Machine to Machine)业务的大规模应用给当前移动通信网络的QoS带来的冲击和影响问题,采用IBP(Interrupt Bernoulli Process)建模M2M业务的到达过程,业
务以批量的形式到达,建立并求解了离散时间系统排队模型IBP/Geom/1/K。区别于传统的IBP模型,该模型每次到达的不是一个,而是一批。采用具有不同突发度的数学模型表征M2M业务每批到达的数量,在概率空间上求解队长的稳态概率,进而得到系统的吞吐量和丢包率等性能指标,并与相同排队强度下M2M业务单个到达时的性能进行对比。实验结果表明,每批到达包数的突发度越大,系统的性能越差;在相同排队强度下,批量到达排队模型的性能对比单个到达情况下的系统性能差;对时延容忍的M2M小数据业务,以时延增加为代价增大缓存可以有效提高吞吐量、降低阻塞率。     

机器型通信(M2M)的负荷控制研究

近年来机器型通信(MTC),也可以称为机器对机器间的通信(M2M),一种新型的通信业务,逐渐受到广泛的关注,在3GPP标准化会议上是一个热点话题.但是由于MTC终端数目庞大,且其具有频繁发送小数据的业务特征,当大量MTC终端同时发起随机接入信道请求时,就会造成随机信道的拥塞,导致用户体验较长的延时,因此,3GPP标准化组织提出了解决避免大量MTC终端接入导致拥塞的EAB机制,这种机制能够控制终端接入的数目,但对同时发起随机信道接入请求的终端数目不是很理想.对此提出一种分散机制来打散同一时间点接入的终端的数目.     

慢性粒细胞白血病先后急性变M2a,M2b1例

目的追踪观察患者慢性粒细胞白血病(CML)双重急性变(M2a,M2b)的诊断及治疗过程,以期对慢粒急变有更深入的了解.方法对患者整个病程给予追踪记录.结果与结论通过对患者病程的诊断、治疗和观察,进一步研究和探讨慢性粒细胞白血病急性变机制及基因、染色体的结构变化.     

分层M2M网络中分簇节点MAC优化研究

在高密度节点分布的分层结构M2M(Machine-to-Machine)网络中,同层簇头间和终端节点一般采用随机机制竞争信道,簇头或终端节点竞争信道机会相近,特别是簇头数据量较大就可能存在延时较大或丢包.为了减小簇头的延时和丢包率,提出了一种BT-MAC算法,在终端节点和簇头间竞争信道时,根据节点需发送数据量反比设定节点退避时间,因此簇头传输的数据量越大,算法设定的平均退避时间就越小,相当于簇头发送的优先级越高,从而减少碰撞,提高簇头接入信道的概率.仿真结果表明,对比常见的DMAC协议和SMAC协议,BT-MAC算法能提高簇头接入信道概率达到较小的平均延迟,同时也能减少节点的平均能量消耗.