共查询到19条相似文献,搜索用时 250 毫秒
1.
影响根癌农杆菌介导的香蕉基因转化早期的主要因素 总被引:18,自引:1,他引:18
用含质粒载体pCAMBIA2301的根癌农杆菌(Agrobacterium inoculation)转化“641”香蕉(Musa AAA Cavendish subgroup cv.64-1)的薄片外植体,通过测定GUS基因瞬时表达率,对转化早期的主要影响因素进行了研究。结果表明:农杆菌EHA105较适合于介导转化,将薄片置于固体高渗培养基上培养4h后,通过真空减压法使农杆菌接种于其上,获得了较高的瞬时表达率(41.67%),是对照(8.33%)的5倍,农杆菌悬液稀释5倍用于转化较好,共培养3d为宜,薄片外植体越靠近根部,瞬时表达率越高。而外植体预培养会降低瞬时表达率。 相似文献
2.
紫参和安祖花不定芽人工种子的研究 总被引:5,自引:1,他引:5
在含高浓度细胞分裂素和低浓度生长素的培养基上,紫参(Salviachinensis)和安祖花(Anthuriumandraeanum)均以叶片为外植体,诱导产生不定芽,但单个不定芽较难从致从致密愈伤组织上分离,这种不定芽包裹成人工种子,在1/2MS培养基上培养,分别获得72.7%和11.3%的萌发率,但均未成成小植株,用高浓度生长素和低浓度细胞分裂素处理(或低浓度生长素单独处理)上述带芽愈伤组织后 相似文献
3.
通过卡那霉素选择体系再生可育小麦转基因植株 总被引:12,自引:0,他引:12
使用卡那霉素作为选择剂建立起一套有效的小麦转化体系.预培养3d的未成熟胚在基因枪轰击前后进行高渗处理,轰击后于26℃、黑暗条件培养2周,然后用150mg/L硫酸卡那霉素选择培养2周,再转至含150mg/L硫酸卡那霉素的再生培养基进行光照培养.再生植株在温室中长出2~3片新叶后用2.5%硫酸卡那霉素水溶液喷洒;4周内,非转化体完全白化并枯萎,而转基因植株生长正常.用水稻Actinl启动子控制nptⅡ基因,卡那霉素选择体系的平均转化频率达到2.6%.高渗处理明显促进瞬间表达效果和稳定转化频率.目前已得到23个转基因小麦株系,大多数已经产生种子.Southem分析表明这些转基因株系均整合有不同拷贝的nptⅡ基因. 相似文献
4.
以小麦品种济南177、384、471的幼胚和济南177的胚性愈伤组织为材料,质粒为pPPI2[含大麦黄矮病毒外壳蛋白(CP)基因和GUS(β-葡萄糖苷酸酶)基因];pPPI5(含CP基因)+pEmuGN(含GUS基因),用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞.GUS基因的瞬间表达平均频率幼胚约为42%,愈伤组织为18.5%.转化处理后用PCR扩增技术检测植株中CP基因是否存在并稳定遗传.检测结果表明,来源于幼胚的T0代转化频率为2~9%(1993~1994年),并获得T1、T2和T3代稳定表达的转化植株.用愈伤组织转化,其转化频率3月龄者为0.4%;2年龄者为零.潮霉素(Hm)用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选,低浓度时不能抑制非转化细胞的生长,高浓度则使细胞受伤害,不能再生正常健壮的植株 相似文献
5.
龙胆毛状根的诱导培养 总被引:2,自引:0,他引:2
发根农杆菌(A.rhizogenes)R1500感染龙胆茎段、叶片外植体,15d后可诱导出毛状根。茎段诱导率高于叶片,可达42.3%。毛状根的诱导与温度和光照有关。转化根具有抗卡那霉素的特征,在不含激素的MS培养基上培养,筛选出了生长正常的毛状根系。 相似文献
6.
超声波辅助的发根农杆菌对黄瓜的遗传转化 总被引:14,自引:0,他引:14
由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积,提高农杆菌对外植体的转化频率。用野生型发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)A4菌株感染黄瓜(Cucumis sativus L.) 无菌苗的子叶和下胚轴,建立了黄瓜的发根遗传转化体系。同时,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的添加与否等影响因素进行了研究。结果表明,采用外植体在添加0.5mg/L NAA和2mg/L 6-BA的MS培养基上预培养4d,超声波处理2s,共培养3d,在预培养共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果,发根诱导率为94.7%。乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显。冠瘿碱检测表明,发根确定能合成农杆碱。 相似文献
7.
甘蔗渣采用白腐菌生物降解的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
研究了甘蔗渣采用两种白腐菌的生物降解,分析了不同培养条件对木素降解的影响。研究内容包括从自然界筛选分离出一株具有木素降解能力的白腐菌HGX03,并与引进的白腐菌P.chrysosporium进行了处理甘蔗渣的研究和比较。在相同条件下培养14d和28d,P.chrysosporium作用于甘蔗渣的总木素降解率分别为195%和263%,HGX03则分别为152%和227%。HGX03处理后的甘蔗渣白度比P.chrysosporium约高2%(ISO)。供给氧气可以提高白腐菌的木素降解能力,促进作用主要表现在生物处理的中期。附加营养物可以明显地减少处理原料的重量损失,增加木素的降解。与单纯采用菌丝体相比,全培养物接种可以利用白腐菌生长过程中产生的胞外酶,起到增加木素降解速率的效果。 相似文献
8.
基因枪转化籼稻的影响因素 总被引:4,自引:0,他引:4
将含有gusA基因的质粒pAct1-D包裹在钨粉上轰击籼稻初生愈伤组织,通过检测gusA基因在籼稻细胞中的瞬间表达情况,对影响基因枪法转化效率的因素进行了研究.这些因素包括微粒加速装置参数、微粒参数、生物参数及其它参数.实验表明,在合适的转化条件下,籼稻品种青风占12、穗优占的最高转化效率分别为439,915蓝点/皿 相似文献
9.
长春花转化毛状根诱导及培养条件的优化 总被引:21,自引:0,他引:21
用A4和R10002种发根农杆菌菌株分别感染长春花的愈伤组织、真叶叶片、叶柄及根,诱导出毛状根。研究了不同外植体、不同菌株以及外植体预培养时间、与发根农杆菌共培养时间、乙酰丁香酮(As)等条件对转化频率的影响,其结果为:A4转化频率高于R1000,真叶叶片转化频率最高,最佳预培养时间为2-3d;最佳共培养时间2-3d;以100mg/mL的As同时加入共培养基中转化频率高达86.25%。不同种类的培养基以及碳源、氮源对毛状根生长也有较大的影响。 相似文献
10.
以高产、抗病、高蛋白“黑生101”大豆(Glycinemax)为材料,以子叶节(带子叶)为外植体建立了再生体系.研究结果显示:在B5基本培养基基础上附加0.8mg/L6-BA对“黑生101”大豆进行预培养,将能够较好地促进大豆种子的萌发;完整子叶培养,子叶节芽诱导率平均为44.26%,每个子叶节外植体平均出芽数为3.23,略高于以1/2子叶培养的结果,并且丛生芽生根率高达100%.为今后实现以“黑生101”大豆作为受体进行高效表达外源基因,以及将“黑生101”大豆作为生物反应器生产药用蛋白的转基因研究奠定了重要的基础. 相似文献
11.
日本对虾肝胰腺的细胞培养 总被引:5,自引:2,他引:3
实验采用199培养基,并在其基础上添加胎牛血清和葡萄糖,渗透压用NaCl,CaCl2,MgCl2,NaHCO3等调节.分别在3种pH值、3种渗透压及3种Zn2+浓度下原代培养日本对虾肝胰腺细胞,并以RNA/DNA值为指标来评定其生长状况.实验结果表明,培养日本对虾肝胰腺细胞的适宜pH值为7.6、渗透压为730 μmol/g,培养基中添加Zn2+浓度为80μg/L时,细胞生长较好. 相似文献
12.
通过对酶系组成和酶解条件的研究,得出了制备禾本科植物内生真菌Neotyphodiumsp.原生质体的最佳条件:鲜菌丝由10.3%蔗糖溶液预处理,酶系组成为1.5%崩溃酶、1.0%蜗牛酶、1.0%纤维素酶和2.0%溶菌酶,酶解温度32℃,pH 6.8,酶解5 h,原生质体得率达7.3×103个/mg鲜菌丝.另外,液体再生涂布平板法结合钙离子作用可使原生质体再生率达4.72%,为不含钙离子处理组的2.5倍. 相似文献
13.
王克明 《浙江科技学院学报》2005,17(1):30-33
采用玉米芯为吸附载体,海藻酸钠为包埋剂对红曲霉细胞进行吸附包埋固定化培养。对以不同浓度的硝酸钾、大米粉、不同初始pH值等条件变化对细胞红曲霉菌进行发酵培养。通过正交优化实验表明:硝酸钾浓度为0 2%,米粉浓度为5%,培养基初始pH5 5时,通气量为75mL/500mL时产色素色价最高。包埋载体海藻酸钠的浓度为5%,固化剂氯化钙浓度为4%时,红曲霉的固定化粒子的机械强度较好。 相似文献
14.
MIAO YuChen GUO JingGong LIU ErTao LI Kun DAI Jie WANG PengCheng CHEN Jia SONG ChunPeng 《科学通报(英文版)》2007,52(1):127-130
Gene expression of glutathione peroxidase 3 (ATGPX3) in response to osmotic stress was analyzed in Arabidopsis using ATGPX3 promoter-glucuronidase (GUS) transgenic plants. High levels of GUS ex- pression were detected under osmotic stress in ATGPX3 promoter-GUS transgenic plants. Compared with the wild type, the growth and development of ATGPX3 mutants (atgpx3-1) were more sensitive to mannitol. In addition, the expression of RD29A, ABI1, ABI2 and RbohD in atgpx3-1 was induced by ABA stress. These results suggest that ATGPX3 might be involved in the signal transduction of osmotic stress. 相似文献
15.
CHARNG Yee-yung 《科学通报(英文版)》2007,52(9):1217-1222
Ethylene plays an important role in the regulation of many growth and developmental processes of higher plants. In tomato,Le-ACS6,a member of the ACC synthase multigene family involved in system 1 ethylene biosynthesis during fruit ripening,is subject to negative feedback regulation by ethylene. To identify the cis-elements that are responsible for the negative feedback control,we established an in vitro transient assay system employing particle bombardment on mature-green tomato fruit pericarp to examine the expression of a luciferase(LUC) reporter gene driven by a 5′-serially deleted Le-ACS6 promoter. The results localized putative cis-elements required for negative ethylene-response between -347 and -266 upstream from the translational start site ATG. Several lines of stable transformation of the Le-ACS6 promoter and GUS reporter fusion gene containing internal deletion from -347 to -266 were generated. The expression pattern of the GUS reporter showed that removal of the nucleotides from -347 to -266 completely eliminated the response of the Le-ACS6 promoter to exogenous ethylene. 相似文献
16.
转VHA-c2-GUS,VHA-c3-GUS和VHA-c5-GUS基因烟草在4℃和40℃温度胁迫以及25℃光/暗处理条件下叶片GUS表达水平表明,VHA-c具有光调控性,并可被逆境温度所调节.VHA-c2,VHA-c3和VHA-c5均可被4℃低温和光照促进表达.40℃高温可显著促进VHA-c3的表达,对VHA-c5有轻微的促进,而对VHA-c2则表现出轻微的抑制作用. 相似文献
17.
根癌农杆菌介导苜蓿体胚转化及转基因植株再生 总被引:5,自引:0,他引:5
用含质粒载体pCAMBIA2301(带有受CaMV35S启动子调控的GUS基因和nptⅡ基因)的根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens转化晋南苜蓿Medicago sativa L.cv.Jinnan的体胚组织,发现负压处理有利于提高转化频率(可达35%),3批共158个体胚切块的转化实验共获得具有卡那霉素抗性的再生植株15株,经组织化学染色和分子检测,证实GUS基因已整合到转化植株基因组中,在芽、叶片、叶柄和根等组织中均有表达,并在土壤栽培过程中保持稳定的表达. 相似文献
18.
《河南师范大学学报(自然科学版)》2016,(6):135-139
高效的瞬时表达体系是方便、快捷的研究怀山药基因启动子活性、基因功能和生产重组蛋白的新途径.本研究选取怀山药叶片为受体,以β-葡糖醛酸酶(GUS)和绿色荧光蛋白(GFP)的基因为报告基因,对共培养时间进行分析,得到二者瞬时表达的最初时间以及较佳观察时间,建立根癌农杆菌介导的怀山药瞬时表达技术体系.结果显示:当注射的菌液浓度OD600=0.6,共培养3d时,GUS基因和GFP基因开始有表达,二者适于观察的共培养时间分别为5d和4d. 相似文献
19.
含氟废水处理试验研究 总被引:6,自引:0,他引:6
为了解决某铝镁合金厂含氟废水达标排放问题,采用了化学混凝沉淀法进行除氟试验,通过正交试验考察了pH值、混凝剂、CaCl2对水中残氟量的影响,并确定了它们在该试验中的最佳投配值。结果表明,pH为9,CaCl2投加量为12 g/L,明矾投加量为500 mg/L,六偏磷酸钠投加量为125 mg/L时,出水含氟量可降至7.5 mg/L,含氟量达到国家一级排放标准。 相似文献