不同糖对纤维素酶保护的机理研究

旨在通过测量海藻糖、葡萄糖、蔗糖、葡聚糖、纤维素酶以及纤维素酶分别与这些糖的混合物的红外光谱和差示扫描量热谱图，研究糖和纤维素酶分子间的相互作用，推测海藻糖对纤维素酶保护的机理。结果表明，海藻糖的羟基同酶分子以氢键的形式结合提高了酶的热变性温度，增加了酶的热稳定性。另一方面，海藻糖分子包裹在酶分子周围，或填充在酶分子的空间结构内，特别是酶的活性部位附近，并形成玻璃态，将酶蛋白的空间结构固定住而避免酶的失活。     

海藻糖对Pseudoaltermonas sp. SM9913适冷蛋白酶的稳定性保护研究

研究了几种不同的糖类物质———葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖对深海适冷假交替单孢菌Pseudoalter monas.sp .SM9913所产适冷蛋白酶粗酶液稳定性的保护情况 ,以海藻糖的保护作用最为突出 .进一步研究了海藻糖在不同温度条件——— 2 0℃、30℃、4 0℃下以及不同浓度的海藻糖对粗酶液的保护情况 ,结果表明 ,不同温度 (2 0～4 0℃ )下 ,海藻糖对粗酶液热稳定性都有很好的保护作用 ,而且温度越高 ,保护作用越显著 .海藻糖最佳保护浓度为10 %～ 15 % .     

干旱胁迫下发菜原植体中海藻糖、蔗糖测定

检测了吸水饱和后的发菜原植体，在不同干燥时间下海藻糖及蔗糖的含量变化，研究表明：发菜原植体中有海藻糖、蔗糖存在．尽管发菜原植体内海藻糖含量略低于蔗糖含量，但海藻糖含量在干旱胁迫初期便迅速升高，之后一直保持较高水平，这与发菜中蔗糖含量变化趋势相同．所以在干旱胁迫时，海藻糖和蔗糖都可能对原植体有保护作用，海藻糖很可能是发菜适应极端环境的重要保护因子之一．     

海藻糖对银杏叶过氧化物酶活性的影响

对银杏叶过氧化物酶热稳定性、最适pH值及海藻糖对酶热稳定性的保护作用和pH值的影响进行了初步研究.结果表明,用40℃和50℃分别处理30 min,过氧化物酶活性分别剩余78%和39%,在60,70,80℃下活性可分别维持27,18和3 min.银杏叶过氧化物酶最适pH值为6.4和9.2.加入海藻糖后酶活性略有降低(活性丧失约8%),但加热后海藻糖的保护优势得以显现,海藻糖浓度为0.14 mol/L时保护效果最好,而且不同温度处理下酶活的下降趋势均较对照组缓慢,尤其在50,60,70℃条件下,相比对照组高出12%~27%的活性,加热时间长短对海藻糖的保护效果无太大影响.经0.14 mol/L浓度的海藻糖处理后,酶活的最适pH值为6.6和9.4.     

混合拥挤试剂对人肌肌酸激酶稳定性的影响作用研究

为了更加真实地模拟细胞内环境,在人肌肌酸激酶(HCK)的去折叠环境中同时加入了大分子拥挤试剂(葡聚糖)和小分子渗透剂(蔗糖),采用酶活性、荧光发射谱和溶液浊度检测等方法研究肌酸激酶在含有蔗糖和葡聚糖的混合拥挤环境中的稳定性,结果表明在肌酸激酶盐酸胍变性过程中,蔗糖不仅抑制肌酸激酶酶活性的丧失,还稳定肌酸激酶的构象,而葡聚糖对肌酸激酶保护能力相对较弱.对于热变性过程,相同质量浓度的蔗糖和葡聚糖能同等程度地减缓肌酸激酶活性的丧失,并抑制聚沉的产生.在葡聚糖和蔗糖同时存在的情况下,两者的保护作用可以累加,并共同维持肌酸激酶的稳定性.     

糖类对碱性成纤维细胞生长因子稳定性的影响

目的:研究糖类对bFGF(m)在溶液中的保护作用。方法:在相同浓度的bFGF(m)溶液中添加不同浓度的糖类,测定放置一定时间后的溶液中bFGF(m)可溶性浓度的差异和促细胞有丝分裂能力的变化。结果:在相同的条件下,添加蔗糖与海藻糖的bFGF(m)溶液随糖浓度增加,可溶性蛋白质量浓度和比活性增加。在蔗糖与海藻糖为0.8 mol时bFGF(m)可溶蛋白浓度和活性数值最高,所测得的蛋白质量浓度依次为(1.145±0.007 2)mg/mL、(1.125±0.005 6)mg/mL;所测活性数值依次为ED50=0.48 ng/mL、ED50=0.58 ng/mL;而添加葡萄糖、乳糖和麦芽糖的bFGF溶液,实验组中蛋白质量浓度和活性相对于对照组均未见有显著性提高。结论:海藻糖和蔗糖能够减少bFGF(m)聚集和沉淀程度,增加bFGF(m)在溶液中的溶解度,提高单位体积中的bFGF(m)活性单体量。     

拥挤环境对碱性磷酸酶去折叠过程的影响作用研究

为了更好地模拟细胞内的真实环境，在碱性磷酸酶的变性环境中分别加入小分子渗透剂（蔗糖）和大分子拥挤试剂（葡聚糖），创造拥挤环境，利用酶活力测定和荧光光谱等方法，研究该拥挤环境对碱性磷酸酶稳定性的影响作用．实验结果表明:在碱性磷酸酶由盐酸胍导致的变性过程中，蔗糖与葡聚糖可抑制碱性磷酸酶活力的丧失，随着蔗糖与葡聚糖的质量浓度增加，其抑制效果随之增强；荧光光谱的检测结果也表明蔗糖和葡聚糖对碱性磷酸酶的去折叠具有一定的抑制作用．在2种试剂中，蔗糖对碱性磷酸酶活力与构象稳定性的保护能力要强于葡聚糖．      

蔗糖及麦芽糖对蛋白酶的保护机理研究

研究了二糖类对J6菌所产蛋白酶的保护作用.结果显示:麦芽糖和蔗糖对蛋白酶活性都有较好的保护作用,蔗糖更佳.但是增加蔗糖的含量并不能提高保护效果,说明实现对酶分子的"包覆"所需要的糖分子个数是有限的.此外,对实验数据按照两步失活动力学模型进行非线性拟合,图形显示拟合效果良好,同时得到酶的失活速率常数和半衰期t,加入麦芽糖和蔗糖之后,蛋白酶的半衰期分别增长了3.5和53倍,为该蛋白酶的工业应用奠定了基础.     

脂质体冷冻干燥及其对药品的包封率

利用差示扫描量热仪(DSC)测量了以葡萄糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖作为保护剂的脂质体悬浮液的玻璃化转变温度Tg，研究了冷冻干燥工艺对脂质体质量的影响，并讨论了上述保护剂对脂质体在冷冻干燥过程中的保护效果，结果表明：以海藻糖作为保护剂的脂质体的玻璃化转变温度Tg最高为-30．4℃，而以葡萄糖作为保护剂的取最低为-39℃；在冻结和冷冻干燥过程中，以海藻糖作为保护剂的脂质体的粒径变化最小，以葡萄糖为保护剂的脂质体粒径变化最大。还对脂质体包封水溶性药物喃氟啶和脂溶性药物维生素A进行了冻干研究，并利用WATERS高效液相色谱仪测量了冻干后脂质体对药物的包封率。结果显示：以海藻糖为保护剂的脂质体对药品的包封率较高，泄露少，而以葡萄糖为保护剂的脂质体对药品的包封率较低，泄露多。通过研究得出海藻糖是一种较好的保护剂，并优化了脂质体冷冻干燥工艺。     

海藻糖对植物糖代谢的调控及糖感受的介导

对比了蔗糖与海藻糖的代谢,概述了6-磷酸海藻糖合成酶（TPS）、6-磷酸海藻糖磷酸酯酶（TPP）、海藻糖酶的分子特性。例举海藻糖在植物糖代谢的调控及糖感受的机制方面的研究进展。     

添加外源物对蒸汽爆破玉米秸秆酶水解性能的影响

研究了8种添加物辅助单、双酶水解蒸汽爆破玉米秸秆的效果和规律。结果表明,在8种外源物中,添加Tween-80对β-葡萄糖苷酶和纤维素酶水解的促进作用最佳,可显著提高酶水解得率和酶活的稳定性。在底物纤维素质量浓度为50 g/L、纤维素酶用量为15.0μmol/(min.g)、β-葡萄糖苷酶用量为30.0μmol/(min.g)的条件下,添加4.0 g/L Tween-80反应48 h,纤维素水解生成葡萄糖和总还原糖的酶解得率分别达到86.85%和93.45%,较空白对照分别提高了7.34%和9.59%,其中可发酵性葡萄糖占总还原糖的92.94%。进一步考察该酶解条件下的蛋白质和酶活回收率,结果表明:添加Tween-80后可溶性总蛋白质的回收率提高了56.83%,β-葡萄糖苷酶和纤维素酶酶活回收率分别提高了16.87%和40.04%。     

酿酒酵母呼吸突变株的高糖胁迫反应研究

【目的】研究野生型甘蔗糖蜜发酵高产乙醇菌株MF1002及其糖分利用能力显著提高的呼吸突变菌株MF15c在高糖胁迫下的生理特性变化。【方法】测定在高糖胁迫下菌株的生长速率、出芽率、乙醇产量和超氧化物歧化酶(SOD)活力、过氧化氢酶活力、过氧化物酶活力以及细胞质和线粒体的ATP酶活力。【结果】在葡萄糖浓度分别为25%、30%和40%的高糖培养基中,MF15c菌株生长和乙醇发酵受抑制的程度均明显低于MF1002。当葡萄糖浓度为30%和40%时,MF15c的最大菌体数目、最高出芽率和乙醇发酵浓度等均显著高于MF1002。当葡萄糖浓度为30%时,两菌株胞内的SOD活力、过氧化氢酶活力、过氧化物酶活力以及细胞质和线粒体的ATP酶活力均显著上升。其中,MF15c的胞内SOD活力、胞内过氧化物酶活力、细胞质ATP酶活力和线粒体ATP酶活力在高糖胁迫下的上升幅度显著高于MF1002。【结论】MF15c较MF1002具有更强的高糖耐受能力。SOD活力、过氧化氢酶活力、过氧化物酶活力以及细胞质和线粒体的ATP酶均参与了两菌株的高糖胁迫反应,胞内SOD活力、胞内过氧化物酶活力、细胞质ATP酶活力和线粒体ATP酶活力可能与MF15c菌株的高糖耐受能力有关,可作为进一步改造该菌株的指导指标。     

钢球振荡酶解汽爆麦草的研究

为了寻求一种提高纤维素酶解速度和转化率的新方法,采用静置、摇床振荡和钢球振荡三种不同的酶解方式进行汽爆麦草酶解和吸附实验。结果表明，钢球振荡方式不但增加了汽爆麦草对纤维素酶的吸附量，而且明显提高了酶解速度和底物转化率。采用钢球振荡进行汽爆麦草酶解的最佳酶活性浓度为3.6×10-7 mol/（s•mL），最佳转速为150 r/min，最佳酶解时间为24 h，还原糖得率为0.43。用环境扫描电镜观察三种不同方式酶解后的汽爆麦草的形态，经分析发现，钢球振荡还有助于减少产物对酶的抑制和提高底物对纤维酶的吸附和解吸频率。     

金属离子及表面活性剂对纤维素酶水解预处理玉米秸秆的影响

研究了不同的金属离子及表面活性剂对纤维素酶水解的影响,试验表明添加某些金属离子及表面活性剂能够促进纤维素酶的水解,其中Cu2 和Tween80促进效果最佳。50g反应体系在pH 5.0、温度50℃、预处理玉米秸秆（PCS）10 wt%、1300纤维素酶(泽生科技)加入量1g条件水解3 h,添加20 mg/L Tween80的水解液中还原糖浓度比不加Tween80时提高21.3%;添加0.13 mmol/LCu2 的水解液中还原糖浓度比不加金属离子时提高38.2%。     

上海市大气环境中PM2.5/PM10时空分布特征

针对上海市颗粒物的污染和防治问题,利用2014年4月14日—2015年3月24日10个国控监测点的PM_2.5和PM₁₀小时数据及对应的气象因素资料,以PM_2.5质量浓度占PM₁₀质量浓度的比例为研究对象,使用聚类分析和相关性分析PM2.5/PM₁₀的时空分布特征. 结果表明:P_2.5和PM₁₀的季节高低为冬>春>秋>夏,PM_2.5/PM₁₀的季节分布在不同区域存在差异性. PM_2.5/PM₁₀的日变化呈现双峰型趋势,峰值出现在05:00和14:00左右,上午PM_2.5/PM₁₀高于下午. 颗粒物质量浓度及PM_2.5/PM₁₀具有明显的“周末效应”,这与车辆通行政策与人类作息时间变动相关. 在空间分布上,颗粒物质量浓度及PM_2.5/PM₁₀均表现为背景站>浦西站>浦东站.     

锯缘青蟹胚胎发育过程中几种水解酶活力的比较研究

测定了锯缘青蟹胚胎发育过程中九个发育期的四种水解酶比活力。结果表明，蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶在青蟹的整个胚胎发育过程中均有活力，１－８期活力低但较稳定，纤维素酶则到胚胎的第八期才表现出活力。临孵化前的第九期，胚胎的掾酶活力有所提高，而其余三种水解酶活力则有显著提高，表现为开口摄食饵料作准备。胚胎水解酶活力的高低可作为幼体能否培育成功的一项良好指标。     

康宁木霉液态发酵高产纤维素酶和木聚糖酶的研究

对选育的一株康宁木霉（Trichoderma koningii）QF-02进行了液态发酵生产纤维素酶和木聚糖酶的研究。实验结果表明：碳源的种类及性质是影响产酶的关键因素,价廉易得的天然稻草是其产酶的良好碳源。在培养基组成为40目稻草粉4g、Mandels营养液100mL、起始pH值4.8的优化培养条件下,摇瓶培养120h所得3种酶的平均活力分别为：滤纸酶活（FPA）1.43IU/mL, β-葡萄糖苷酶活0.36IU/mL, 木聚糖酶活176.8IU/mL。与商品纤维素酶制剂相比,在FPA载量相同(3FPU/g原料)的情况下,自制的复合酶在水解碱预处理稻草和天然稻草时,总还原糖产量比商品纤维素酶提高55%和40%,葡萄糖产量提高33%和12%。研究结果还表明木聚糖酶和纤维素酶具有协同酶解木质纤维素的作用。     

平菇与香菇原生质体融合新菌株的生物学特性研究

以平菇与香菇的原生质体进行融合,经初筛获得5个新菌株,其茵丝生长速度、纤维素酶活力(FPA酶活、CMC酶活)、木质素酶活力(漆酶酶活)得到明显提高,其中R23菌株在26℃下培养茵丝生长速度最快,且漆酶产酶能力显著高于亲本,R8茵株最耐高温,R24菌株的纤维素酶活力表现最优;酯酶同工酶谱分析结果显示R4、R15、R24新菌株含有香菇和平菇双亲的酶谱条带.