Nek2A在三阴性乳腺癌中的表达以及与化疗敏感性的关系

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)的主要治疗方式是化疗,而化疗耐药是TNBC治疗的难点.发现在TNBC细胞系(MDA-MB-231、BT-549)中,Nek2A的表达异常增高,Nek2A-siRNA转染TNBC细胞系,降低Nek2A表达后,TNBC细胞增殖降低,化疗药物联合Nek2A-siRNA组细胞增殖降低更明显.降低Nek2A表达可以增强紫杉醇及顺铂的化疗敏感性.检测裸鼠体内成瘤情况发现:Nek2A-siRNA联合紫杉醇(TAX)及顺铂(DDP)化疗药物组肿物最小.结果表明,Nek2A在TNBC中表达异常增高,并且降低Nek2A表达可以增强紫杉醇及顺铂化疗敏感性.     

5十七烷基间苯二酚对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用

为研究5-十七烷基间苯二酚(AR-C17)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其潜在机制,采用CCK-8方法检测不同处理下的细胞存活率变化;DCF-DA荧光探针法检测活性氧(reactive oxygen species, ROS)变化情况;流式细胞术测定胞内肿瘤增殖标记物Ki-67的表达,细胞凋亡的变化,线粒体膜电位的变化及自噬体的形成情况;蛋白印迹法检测Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ等凋亡、自噬相关蛋白的表达情况。结果表明,与对照组相比,AR-C17显著抑制了MDA-MB-231细胞存活率,促进胞内ROS的生成,降低肿瘤增殖标志物Ki-67的表达,降低线粒体膜电位,上调Bax/Bcl-2的蛋白表达比率,增加活性Caspase的表达量,诱导MDA-MB-231细胞发生线粒体途径的凋亡;同时,AR-C17能够增加LC3-Ⅱ蛋白表达量,促进自噬体形成,诱导细胞发生自噬;此外,采用自噬抑制剂与AR-C17共同作用能够降低细胞存活率,进一步促进细胞凋亡。研究结果表明,AR-C17能够诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞发生凋亡和自噬,达到抑制乳腺癌细胞增殖的作用。     

CTAB对乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231凋亡影响

为探索十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)对乳腺癌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制,用不同浓度的CTAB作用于乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231,经MTT实验证实,CTAB对乳腺癌细胞具有明显的杀伤作用.根据MTT实验结果确定CTAB对两种乳腺癌细胞的IC50值,通过显微镜观察根据IC50值设定浓度给药24 h对...     

Antimycin类天然产物抗三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231作用机制初步研究

研究Antimycin类天然产物对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231特异性生长抑制和杀伤作用.三种结构类似的天然产物Antimycin-1,-2和-3对MDA-MB-231细胞生长都有很强的抑制作用,其IC50分别为1.34±0.07,160±20和180±50 nmol·L-1,Antimycin-1 活性是 An...     

雌二醇、二羟异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期和增殖活性的影响

检测雌二醇、二羟异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231（MM231）细胞周期和增殖活性的影响,从而为研究其功能提供线索。采用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期的变化。得到雌二醇作为雌激素类药物,一定浓度能够促使乳腺癌MM231细胞G2／M期阻滞,引发凋亡;而二羟异黄酮作为植物雌激素,一定浓度也能使MM231细胞G2／M期阻滞,并能抑制MM231细胞生长,促使其凋亡。说明二羟异黄酮和雌二醇作为竞争性抑制剂,都可以抑制乳腺癌MM231细胞的生长,为临床治疗乳腺癌奠定了一定理论基础。     

七叶皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231和T-47D增殖的影响

以人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和T-47D为研究对象,通过MTT方法,检测不同浓度七叶皂苷(0、5、10、15、20、25、30、35、40、45μmol/L),对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和T-47D体外增殖的影响。结果表明:不同浓度七叶皂苷处理MDA-MB-231细胞,发现七叶皂苷对MDA-MB-231肿瘤细胞没有明显的抑制作用。七叶皂苷可明显抑制人乳腺癌T-47D细胞的生长,并且呈现明显的剂量和时间依赖性,表明七叶皂苷对乳腺癌T-47D细胞具有抑制作用。     

利用腺病毒载体过表达Meis 1基因能够上调化疗药对NSCLC细胞的杀伤作用

新型肿瘤抑制基因Meis 1(Myeloid ecotropic viral integration site 1)最近被证实可能具有肿瘤增殖抑制活性,是肿瘤患者预后和治疗的潜在指示分子,但其功能和作用机制尚需深入分析。考察利用腺病毒载体表达Meis 1蛋白对抗肿瘤药物杀伤NSCLC细胞的影响。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系A549感染Meis 1的腺病毒表达载体后,使用MTT、和软琼脂成集落实验验证其对NSCLC细胞增殖的抑制作用;进一步分别使用系列浓度梯度的抗肿瘤药物舒尼替尼(Sunitinib)、吉非替尼(Gefitinib)、紫杉醇(Paclitaxel)和吉西他滨(Gemcitabine)处理A549、Calu3、H460以及H358细胞,检测其抑制率,计算IC_(50)值。最后,利用耐药细胞系A549/ADR检测Meis 1逆转NSCLC化疗药多药耐药的作用。MTT和软琼脂成集落实验结果显示,Meis 1过表达能够抑制A549细胞的增殖与锚定非依赖性生长。抑制率实验显示Meis 1过表达能够上调抗肿瘤药物对NSCLC细胞的杀伤作用,显著下调其IC_(50)值。此外,Meis 1还具有逆转NSCLC细胞化疗药物多药耐药的作用。利用腺病毒载体表达MEIS1蛋白能够增加肿瘤细胞对化疗药物敏感型的作用,具有逆转肺癌细胞MDR的作用。     

低氧条件下巨噬细胞分泌CCL22促进三阴乳腺癌转移

三阴乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer, TNBC)是乳腺癌中恶性程度最高的一种亚型，表现为很高的转移潜能。巨噬细胞，即肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-Associated Macrophages, TAM)，在促进TNBC转移中起了重要作用。乳腺癌作为一种实体肿瘤，往往处于缺氧环境中。低氧环境能够促进癌细胞的转移，然而低氧环境中巨噬细胞在促进肿瘤转移中的作用仍然不清楚。在该研究中，THP1细胞被诱导成TAM，经过缺氧培养后，通过Transwell实验检测其促进三阴乳腺癌细胞BT-549和MDA-MB-231的细胞迁移能力；通过尾静脉注射，将MDA-MB-231细胞移植于祼鼠体内，CT扫描，分析了TAM促进TNBC细胞的器官转移能力；通过ELISA实验检测低氧对TAM分泌的肿瘤转移相关因子的影响，通过GDSC在线软件分析了CCL22受体CCR4和其他CCR在乳腺癌组织与正常组织中表达的差异。结果表明低氧条件下巨噬细胞通过分泌CCL22的表达来促进三阴乳腺癌细胞迁移:经过缺氧培养后的TAM显著增强了TNBC细胞迁移能力，以及促进癌细胞在体内向肺转移；低氧诱导TAM分泌CCL22；CCL22受体CCR4在乳腺癌组织中的表达显著高于在正常组织中的。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响及其可能机制

目的:探讨青蒿琥酯(ART)对人类三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响及其可能机制.方法:MTT法检测ART对MDA-MB-231细胞增殖情况的影响,结晶紫染色法观察细胞形态、数量变化;细胞划痕实验及Transwell实验分别检测ART对细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测ART对细胞周期的影响;Western blotting检测DNA损伤反应通路相关蛋白γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-CHK2(T68)的表达.结果:与对照组相比,实验组MDA-MB-231细胞的增殖受到抑制,并失去原有细胞形态,实验组迁移细胞数量明显减少,侵袭细胞数量显著减少,实验组G2/M期细胞数显著增加,且γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-CHK2(T68)蛋白表达显著增高.结论:ART能够抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭,并使该细胞阻滞于G2/M期,可能与γH2AX(S139)、phospho-ATM(S1981)、phospho-CHK2(T68)等蛋白的激活引起DNA损伤反应通路的激活有关.     

Hsp90抑制剂17-AAG通过EGFR,IGFR途径抑制乳腺癌细胞的增殖

 17-AAG通过抑制Hsp90的功能而抑制多种肿瘤细胞的生长增殖,用不同浓度17-AAG作用于乳腺癌细胞株MDA-MB-231和BT474,用SRB法检测细胞相对存活数,计算半数抑制药物浓度IC₅₀;并用Westernblotting检测Hsp90的"顾客"蛋白EGFR,IGFR-1以及G2/M细胞周期蛋白cdc2的表达,研究17-AAG抑制乳腺癌细胞的增殖,促进细胞凋亡的途径.结果显示,1μmol/L的17-AAG已能完全抑制MDA-MB-231和BT474细胞增殖,2种细胞的IC₅₀分别为0.0587,0.0576μmol/L;17-AAG作用的乳腺癌细胞EGFR,IGFR-1表达明显下调,此作用呈剂量依赖性.这些研究结果表明17-AGG可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT474的生长增殖,此作用与17-AGG抑制细胞生长因子受体途径有关.     

A novel peptide,selected from phage display library of random peptides,can efficiently target into human breast cancer cell

To develop a targeting vector for breast cancer biotherapy, MDA-MB-231 cell, a human breast cancer cell line, was co-cultured with pC89 （9 aa） phage display library of random peptides. In multiple inde-pendent peptide-presenting phage screening trials, subtilisin was used as a protease to inactivate extra-cellular phages. The internalized phages were collected by cell lysising and amplified in E. coli XLI-Blue. Through five rounds of selection, the pepUde-presenting phages which could be internalized in MDA-MB-231 cells were isolated. A comparison was made between internalization capacities of peptide-presenting phages isolated from MDA-MB-231 cells and RGD-integrin binding phage by coculturing them with other human tumor cell lines and normal cells. The nucleoUde sequences of isolated peptide-presenting phages were then determined by DNA sequencing. To uncover whether phage coat protein or amino acid order was required for the character of the pepUde to MDA-MB-231 cells, three peptides were synthesized. They are CASPSGALRSC, ASPSGALRS and CGVIFDHSVPC （the shifted sequence of CASPSGALRSC）, and after coculturing them with different cell lines, their targeting capacities to MDA-MB-231 cells were detected. These data suggested that the internalization process was highly selective, and capable of capturing a specific peptide from parent peptide variants. Moreover, the targeting internalization event of pepUdes was an amino acid sequence dependent manner. The results demonstrated the feasibility of using phage display library of random peptides to develop new targeting system for intracellular delivery of macromolecules, and the peptide we obtained might be modified as a targeting vector for breast cancer gene therapy.     

The molecular mechanism of different sensitivity of breast cancer cell lines to TRAIL

Although Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) selectively induces apoptosis of various cancer cells, some caner cell lines are resistant to TRAIL-induced cell death. To investigate the molecular mechanisms underlying TRAIL-resistance, two human breast cancer cell lines, MCF-7 (resistant to TRAIL) and MDA-MB-231 (sensitive to TRAIL), were used as a model system to analyze the different sensitivities to TRAIL cytotoxicity. PKCδ inhibitor rottlerin, but not MEK and ERK1/2 inhibitor U0126 nor PI3K inhibitor LY294002, was shown to enhance TRAIL-induced apoptosis in MCF-7 cells significantly, suggesting that PKCδ might play an important role in the resistance of MCF-7 cells to TRAIL. In contrast, rottlerin, U0126, and Ly294002 had no effect on MDA-MB-231 apoptosis induced by TRAIL under the same conditions. Further experiment showed that the combination of rottlerin and TRAIL cleaved PARP in the MCF-7 cells synergistically, but not in the MDA-MB-231 cells. The role of PKCδ in TRAIL-resistant MCF-7 cells was confirmed by knocking down the endogenous PKCδ expression using RNAi technology. Furthermore, caspase-3 reconstitution in MCF-7 cells was unable to alter PKCδ expression, suggesting that innate caspase-3 deficient in the cells does not cause PKCδ high expression. These data provide evidence for the first time that PKCδ plays a critical role in breast cancer cell lines to TRAIL cytotoxicity.     

灯盏乙素对乳腺癌细胞中lncRNAs表达的影响

检测灯盏乙素对乳腺癌MDA-MB-231细胞中的长链非编码RNA(LncRNAs)的相对表达量的影响,进一步探索灯盏乙素对肿瘤的作用机制.采用实时荧光定量PCR的方法,检测对照组与不同剂量组的灯盏乙素处理后的乳腺肿瘤细胞中lncRNAs MALAT1、NEAT1和p53基因mRNA的相对表达量,并观察细胞存活率.结果发现,灯盏乙素在低剂量(1、10、25μmol/L)时促进细胞增殖,而在高剂量50μmol/L以上时抑制细胞增殖.灯盏乙素在低剂量时使得乳腺癌MDA-MB-231细胞中MALAT1,NEAT1和p53基因的表达水平下降,而在100μmol/L的高剂量时MALAT1,NEAT1和p53基因的表达水平上升.灯盏乙素影响乳腺癌MDA-MB-231细胞中LncRNAs MALAT1和NEAT1基因以及p53基因的表达,并且存在剂量反应关系,低剂量与高剂量呈现出相反的表达量变化.     

HER-2基因特异性核酶在MDA-MB-453细胞内的瞬时效应

目的确定人表皮生长因子受体-2(HER-2)特异性锤头状核酶(hammerhead ribozyme,RZ)对雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-453的影响.方法应用RT-PCR、免疫细胞化学检测RZ对MDA-MB-453细胞HER-2表达的影响;MTT法检测RZ对细胞增殖的影响.结果RZ转染入MDA-MB-453细胞中,RT-PCR检测出转染RZ的MDA-MB-453细胞中HER-2 mRNA表达量明显下降;免疫细胞化学方法检测细胞内的HER-2蛋白表达下降;MTT法检测细胞增殖活性明显受抑.结论RZ在MDA-MB-453细胞内有效抑制靶基因HER-2mRNA和蛋白的表达,同时可抑制细胞增殖,有助于进一步研究雌激素受体阴性乳腺癌细胞HER-2信号转导通路.     

Hiwi基因在耐药MCF-7/ADM乳腺癌细胞株中的表达

目的探讨Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞和非耐药MCF-7细胞的表达.方法应用实时定量PCR与Western blot技术进行Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞和非耐药MCF-7细胞株表达水平检测.结果 Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞中的表达明显高于正常乳腺细胞(P0.01)及非耐药MCF-7细胞(P0.05).结论 Hiwi基因在耐阿霉素人乳腺癌MCF-7/ADM细胞株的高表达为耐药乳腺癌细胞的靶向治疗指出新的研究方向,对乳腺癌治疗预后评估具有临床指导性.     

新型多酸化合物对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用

采用MTT法、形态学方法和Western blot方法,检测了3种新型多酸化合物[SbW9、（SbW9）2-（SnR）4、（SbW9）2-（SnR-CH3）4]对人乳腺癌MCF7和MDA-MB-231细胞生长抑制作用,细胞形态学变化及细胞PCNA蛋白表达变化,并探讨该3种化合物抑癌的机制.实验结果表明：3种化合物对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-231的生长均具有明显的抑制作用（P〈0.01）,细胞形态发生明显变化,细胞皱缩并且增殖速度明显减慢;其中,（SbW9）2-（SnR）4可使MCF7细胞PCNA蛋白表达下降（P〈0.05）,且呈浓度剂量依赖性.说明该3种新型多酸化合物均具有抗肿瘤活性,其活性部位可能是以{SbW9}为基本建筑单元的聚阴离子,作用机制可能与其抑制细胞DNA的合成有关.     

新基因BP1抗体制备及其在乳腺癌表达的初步观察

为了探讨新同源盒基因BP 1在乳腺癌的表达,运用生物信息学方法设计19肽,合成并偶联到大分子载体KLH上制成人工免疫原,制备兔抗BP 1多克隆抗体IgG.蛋白印迹方法检测BP 1在乳腺癌细胞系M CF 7、M DA-M B-231细胞均有表达:免疫组织化学结果显示,BP 1蛋白在乳腺癌的表达率显著高于癌旁组织,在雌激素受体阴性肿瘤的表达率高于雌激素受体阳性组。BP 1基因的异常表达参与了乳腺癌的发生,是一种新的乳腺癌分子标志物.     

PinX1基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

探讨了PinX1 基因在乳腺癌MCF-7 细胞生长和细胞周期中的作用, 初步探讨了该基因用于乳腺癌临床治疗的可行性. 采用RT-PCR 技术从293-T 细胞中扩增PinX1 基因, 将其克隆入真核表达载体pEGFP-C1 中, 再将重组质粒转染MCF-7 细胞. 通过real-time PCR 检测PinX1 基因的mRNA 表达, 用MTT 法检测转染前后细胞生长曲线的变化, 用流式细胞仪检测转染目的基因后细胞生长周期的改变. 检测结果表明, PinX1 基因已经在转染后MCF-7 细胞的细胞核内稳定表达, 乳腺癌细胞生长明显减缓(P <0.05), 增殖变慢(P <0.05), 细胞生长阻滞于G0/G1 期, 说明PinX1 基因可抑制乳腺癌MCF-7 细胞的生长和增殖.