酵母snR72￣78snoRNA基因簇的研究

通过ＰＣＲ分析发现ｋｌｕｙｕｅｒｏｍｙｃｅｓ ｄｅｌｐｈｅｎｓｉｓ中存在与酿酒酵母相似的ｓｎＲ７２～７８ｓｏｎＲＮＡ基因簇。对该基因簇进行序列测定并与酿酒酵母比较分析,发现基因簇中各个ｓｎｏＲＮＡ编码区具有一定的保守性,但是基因间隔区却有完全不同的序列,这表明ＲＮａｓｅⅢ对ｓｎｏＲＮＡ前体加工的识别信号存在于各ｓｎｏＲＮＡ基因间隔的高级区的高级结构中。进一步对另外４种酵母进行ＰＣＲ分析,结果表明ｓ     

酿酒酵母中一种新的反义snoRNA分子的鉴定

核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）是一类在真核生物核糖体生物合成过程中起重要作用的小分子ＲＮＡ．通过计算机直接分析国际分子生物学数据库及ＲＮＡ杂交分析、ｃＤＮＡ序列测定等方法,在酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）中发现和鉴定了１个新的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ．该ｓｎｏＲＮＡ长１０９个核苷酸,由位于酿酒酵母第１３号染色体上的１个独立基因编码．Ｚ６ｓｎｏＲＮＡ含有ｂｏｘＣ（ＵＧＡＵＧＡ）、ｂｏｘＤ（ＣＵＧＡ）等保守的结构元素,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,即分子中有１段１１个核苷酸的片段与２５ＳｒＲＮＡ中１段保守核心序列互补,该ｓｎｏＲＮＡ片段连同其下游的ｂｏｘＤ共同指导与其互补的ｒＲＮＡ序列第２１９５位胞苷酸的２’－氧－核糖的甲基化．     

Z7 snoRNA：酿酒酵母中一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和分子杂交等方法，在酿酒酵母中发现了一种新的核仁小分子ＲＮＡ：Ｚ７ ｓｎｏＲＮＡ。该ｓｎｏＲＮＡ具有ｂｏｘ Ｃ和ｂｏｘ Ｄ等结构元素，并有１４个核苷酸与１８Ｓ ｒＲＮＡ中的一段保守序列互补，属于典型的以核酸序列指导大分子ｒＲＮＡ甲基化的ｓｎｏＲＮＡ类型。Ｚ７ ｓｎｏＲＮＡ指导酿酒酵母１Ｓ ｒＲＮＡ中第５７８位的尿嘧啶核苷酸的核糖甲基化。Ｚ７ ｓｎｏＲＮＡ长８８个核     

粟酒裂殖酵母Z15 snoRNA的鉴定及结构与功能分析

运用计算机及实验的方法,在粟酒裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）中发现和鉴定了一个新的,结构特殊的ｓｎｏＲＮＡ－Ｚ１５。该ｓｎｏＲＮＡ由一个独立转录的基因编码,位于酵母２号染色体上,Ｚ１５长达９２个核苷酸,属于反义ｓｎｏＲＮＡ家族,它除了具有典型的ｂｏｘＣ／Ｄ结构元素和末端配对区外,还含有分别与酿酒酵母Ｚ１５和Ｚ２相同的两个反义序列,反映了粟酒裂残酵母Ｚ１５ｓｎｏＲＮＡ基     

野蚕DHPBAN基因启动子的克隆及序列分析

为研究昆虫滞育激素性信息素合成激活肽基因在进化过程中的变化以及基因表达调控的异同,用ＰＣＲ方法克隆了野蚕的ＤＨＰＢＡＮ基因的启动子并测序,这是第二个被克隆的昆虫ＤＨＰＢＡＮ基因启动子．与家蚕相比,在核苷酸水平上同源性达９４％．野蚕ＤＨＰＢＡＮ基因启动子的ＴＡＴＡ框的保守序列为ＴＡＴＡＴＡＡＡ,位于－４７—－４０处;ＣＡＡＴ框是ＧＧＣＣＣＡＴＣＴ,位于－８３—－７５处;野蚕与家蚕一样具有ＴＡＡＴ保守序列,这段序列是一类调控蛋白的结合核心位点,家蚕的位于－１８５—－１７６,野蚕的位于－１７６—－１６７．在－６４—－５６部位,核苷酸序列表现出较大的不同．     

满江红鱼腥藻glnA基因上游调控区的克隆及其序列分析

以满江红鱼腥藻（Ａａｃ）提取总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ技术,扩增得到其谷氨酰胺合成酶基因（ｇｌｎＡ）上游区．经酶切得到４０９ｂｐ的片段,并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡｋｓ＋上测序．将测序结果与Ａｎａｂａｅｎａ７１２０调控序列比较,有９８２％的同源性．在上游调控中也具有ｎｉｆｌｉｋｅ和Ｅ．ｃｏｌｉｌｉｋｅ启动子,值得注意的是,调节蛋白ＶＦ１的结合位点正好位于ｎｉｆｌｉｋｅ启动子上．所克隆的片段不但对蓝藻固氮、泌氨的基因调控研究具有意义,也对表达载体的构建具有实用价值．     

拟南芥U59 snoRNA基因簇的结构与功能研究

在拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）中发现和鉴定了具有以义序列的ｓｎｏＲＮＡ组成的一个基因簇，该基因族由两个相同的ｓｎｏＲＮＡ基因组成。位于ｂｏｘＤ′上游的反义序列与人Ｕ５９ｓｎｏＲＮＡ的反义序列相同。因此命名为拟南芥Ｕ％９ａ和Ｕ５９ｂ。位于ｂｏｘＤ上游的反义序列在所有哺乳动物和酵母ｓｎｏＲＮＡ基因的反义序列中未找到同源拷贝，经低浓度的ｄＮＴＰ逆转录检验证实此反义序列并不指导拟南芥     

哺乳动物核仁蛋白基因编码多个内含子snoRNA

核仁小分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）是真核生物核糖体合成中一类重要的调控分子,广泛地存在于酵母和哺乳动物中．ｓｎｏＲＮＡ基因组织具有高度的多样性．在哺乳动物中,除Ｕ３、Ｕ８、Ｕ１３和７－２／ＭＲＰＲＮＡ是独立转录之外,其它ｓｎｏＲＮＡ都是由宿主基因（ｈｏｓｔｇｅｎｅ）内含子编码的［１］．目前已发现多种类型的宿主基因如核糖体蛋白基因,热激蛋白基因（ｈｓｃ７０）,细胞周期调控蛋白基因（ＲＣＣ１）以及一些转录和翻译起始因子基因等．本文报道通过对人、小白鼠（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）和大鼠（Ｒａｔｔｕｓｎｏｒ…     

C1 SnoRNA，水稻中一种新的核仁小分子RNA

通过计算机分析国际分子生物学数据库和ｃＤＮＡ序列分析等方法，在水稻（Ｏｒｙｚａｓａｔｉｖａ）中发现了一种新的核仁小分子ＲＮＡ：Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ．该ＲＮＡ具有ｂｏｘＣ，ｂｏｘＤ和末端碱基配对区等典型的核仁小分子ＲＮＡ结构特征；并有１４个核苷酸与水稻１８ｓｒＲＮＡ中一段保守序列互补．推测Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ可能在１８ｓｒＲＮＡ甲基化过程中起重要作用．编码Ｃ１ＳｎｏＲＮＡ的基因位于水稻Ｈｓｐ７０基因的第一个内含子中．这是在水稻中发现的第一个由基因内含子编码的ＳｎｏＲＮＡ．     

构建及表达小麦高分子量容蛋白基因5′端调控序列缺失突变体嵌合质粒

通过定点突变，在小麦高分子量（ＨＭＷ）谷蛋白基因５′上游调控序列的ＴＡＴＡｂｏｘ与基因翻译起始密码子ＡＴＧ之间，改变三个碱基，产生新的ＢａｍＨⅠ内切酶位点．在调控序列中，选择四个合适的内切酶，对上游序列进行缺失，分离到四个大小分别为２４００、６１０、４４０和１１０ｂｐ的含有不同调控元件的ＨＭＷ谷蛋白基因启动子，与质粒ｐＢＩ１０１．１的报告基因ＧＵＳ重组，构建了四个嵌合质粒ｐＷＧ２４００、ｐＷＧ６００、ｐＷＧ４４０和ｐＷＧ１００．经基因枪、微束激光和ＰＥＧ等方法将ｐＷＧ２４００转化玉米胚乳悬浮细胞，ＧＵＳ基因获得表达．这为进一步研究ＨＭＷ谷蛋白基因的调控机理奠定了基础．     

Z25, a novel intronic snoRNA encoded in mammalian nucleolin gene

A novel intronic small nucleolar RNA ( snoRNA) , termed Z25, was identified from mammals by-computer analysis and experimental sequence methods. Z25 is a 69 nucleotides long RNA containing typical boxC/D motifs, terminal stem and an 11-nucleotide sequence complementary to 18S rRNA. In theory, Z25 functions as an RNA guide for the 2'-0-ribose methylation of adenine at position 1678 (human 18S rRNA coordinate) in 18S rRNA. Z25 snoRNA gene was found to be located in the fifth intron of nucleolin gene of human, mouse and rat, demonstrating that the mammalian nucleoline gene is a host gene encoding multiple snoRNAs.     

Z3, a novel antisense snoRNA fromSaccharomyces cerevisiae

Small nucleolar RNA (snoRNA) is one of the most important elements participating in eukaryotic ribosomal biogenesis. The present report describes the results of the identification of a novel snoRNA, Z3, from yeast S. cerevisiae. Z3 snoRNA is 106 nts in length. It contains box C, D elements and a 13 nt complementarity to 25S rRNA. This antisense segment, together with the downstream box D, guides a 2′-O-ribose methylation of cytidine acid at position 2956th in yeast 25 S rRNA. Z3 snoRNA, encoded by an independent transcribed gene on the chromosome  of yeast, possesses the same functional elements responsible for the rRNA methylation site as that of the intron-encoded U35 snoRNA of vertebrate.     

水稻Hsp70基因第一个内含子中snoRNA基因簇的保守性及分布特点

对水稻、野生稻和茭白Ｈｓｐ７０基因第一个内含子进行ＰＣＲ分析及部分序列测定，分析结果表明植物Ｈｓｐ７０基因内含子编码多个ｓｎｏＲＮＡ的基因组织具有一定的保守性和分布范围，揭示了植物内含子编码的ｓｎｏＲＮＡ在进化过程中具有比脊椎动物和酵母更加丰富的多样性和移动性．     

Increased gamma-globin expression in a nondeletion HPFH mediated by an erythroid-specific DNA-binding factor

In man, a shift from gamma- to beta-globin gene expression in erythroblasts underlies a switch from fetal to adult haemoglobin during development. In hereditary persistence of fetal haemoglobin (HPFH), inappropriately high gamma-globin expression in adult life is associated with deletions in the beta-globin cluster or with single-base changes upstream of the gamma-globin genes. To account for enhanced gamma-gene expression in HPFH of the non-deletion type, we tested the nuclear proteins of human erythroleukaemia cells that bind gamma-promoter sequences in vitro by correlating specific mutations in their binding sites with promoter activity. An erythroid-specific factor (GF-1) binds as a single molecule to the -195 to -170 region and contacts two TATCT(AGATA) motifs, but not the conserved octamer (ATGCAAAT) that separates them. We observe that a single change (at -175, T----C) found in HPFH leads to increased promoter activity only in erythroid cells. This effect is mediated by GF-1, the human counterpart of the chicken erythroid factor Eryf 1. The form of HPFH we studied here is an inherited disorder which can be ascribed to the action of a cell-specific DNA-binding factor on a mutant promoter.     

瓜氨酸生产相关基因簇在谷氨酸棒杆菌中的组成型表达

构建1种组成型载体并将载体应用在表达瓜氨酸相关基因簇argCJBDF上。通过去除pXMJ19诱导型启动子上游阻遏蛋白lacI基因的方法,构建组成型质粒pXMJ19-lacI,并将谷氨酸棒杆菌中合成瓜氨酸途径的基因簇argCJBDF克隆到改造过的组成型载体中,实现瓜氨酸合成相关基因簇argCJBDF在谷氨酸棒杆菌的组成型表达。结果表明:重组菌在30℃摇瓶发酵72 h后,N-乙酰谷氨酸激酶的酶活达到(0.323±0.015)U/mg,瓜氨酸的产量达到4.33 g/L。成功构建的组成型表达载体,实现了外源基因簇argCJBDF在谷氨酸棒杆菌中的组成型表达。     

Two closely linked rice U14 boxC/D snoRNAs

By analysis of the conserved elements in yeast U14 boxC/D snoRNA. the conserved elements in rice U14 boxC/D snoRNA have been speculated. Through computer search of the international rice genome database, two rice U14 snoRNA gene candidates are obtained. These two putative U14 snoRNA genes are closely linked on rice chromosome 2. The coding sequences of these two snoR-NAs exhibit the hallmark structure of boxC/D antisense snoRNA. They both have conserved boxC and boxD sequences and a 14nt-long complement to the sequence between 414nt and 427nt of rice 18S rRNA (according to GenBank accession no. X00755). The experimental evidence shows that these two snoRNAs are involved in the methylation of the complementary sequence of rice 18S rRNA. The existence and localization of these two snoRNAs are proved by RT-PCR and Northern blot. Further analysis shows that both of the newly found rice snoRNAs have high homology with maize U14 snoRNA. and they are named rice U14.1 snoRNA and U14.2 snoRNA respectively. The gene sequence encoding these two snoRNAs has been deposited in the GenBank database under accession number of AF332622.     

Identification and characterization of two novel box H/ACA snoRNAs from Schizosaccharomyces pombe

Ineukaryotes,alargenumberofsmallnucleolar RNAs(snoRNAs)accumulatedwithinthenucleolus playimportantrolesinprecursorribosomalRNA(pre RNA)processingandmaturation[1].AllsnoR NAs,withtheexceptionofRNaseMRP,canbe broadlydividedintotwoexpendinggroups,boxC/D andH/ACAsnoRNAs,basedonconservedsequence elements[2].BoxC/DsnoRNAscontaintwocon servedshortsequencemotifs,boxC(UGAUGA)and boxD(CUGA),locatedonlyafewnucleotidesaway fromthe5′and3′ends,respectively,generallyas partofatypical5′3…     

人白介素-3乳腺表达载体的构建

人白介素-3是一种造血系统和免疫系统调节剂,在治疗造血系统疾病、肿瘤、先天或获得性免疫功能缺陷等方面发挥着重要作用.应用牛乳腺生物反应器生产人白介素-3的研究具有重要的临床应用和经济价值.研究选用具有红色荧光蛋白报告基因(R ed2)和新霉素抗性基因(neor)表达框架的pD sR ed2-1质粒为骨架构建人白介素-3乳腺表达载体.通过PCR方法分别扩增牛β-酪蛋白基因5′端上游调控序列、人IL-3基因以及CM V启动子序列,将它们按先后顺序分别定向克隆于质粒pD sR ed2-1的多克隆位点内,使牛β-酪蛋白基因调控序列位于人IL-3基因的上游,指导人IL-3基因在乳腺组织中特异性表达,而CM V启动子位于红荧光蛋白基因的上游,指导红荧光蛋白基因在所有的组织中非特异性表达.限制性酶切片段分析及部分DNA序列鉴定结果表明,所构建载体结构正确.     

粟酒裂殖酵母snR41 snoRNA的鉴定及其结构进化的意义

采用计算机分析和分子生物学实验的方法,在粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe中发现和鉴定了一种新的反义snoRNA,命名为snR41,与酿酒酵母Sacharomyces cerevisiae snR41同源分子比较,粟酒裂殖酵母snR41只具有一个指导rRNA核糖甲基化的反义序列,这一发现进一步揭示了反义snoRNA同源分子在一级结构上的多样性,为研究反义SnoRNA结构及进化提供了新的线索。