糖尿病肾病大鼠胰基因组DNA甲基化状态的变化

分别从正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药糖微康治疗的糖尿病肾病大鼠 、西药开博通治疗的糖尿病肾病大鼠的胰组织中提取其基因组DNA,用对DNA甲基化作用敏感 的限制性核酸内切酶HpaⅡ和MspⅠ(为一组同裂酶)进行限制性酶切;并进行染色质DNaseⅠ敏感性分析. 实验发现中药糖微康治疗后能向正常方向逆转胰组织DNA中CCGG位点甲基化状态,胰组织中处于转录活性状态的染色质明显增加. 这表明中药糖微康能通过提高基因转录水平和向正常方向恢复甲基化状态而发挥其治疗作用.     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNase敏感性的分析

用 3H标记的 S-腺苷酰 - L -甲硫氨酸 (3H- SAM)作为甲基供体 ,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药“糖微康”治疗的糖尿病肾病大鼠、西药“开博通”治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的 DNA甲基化酶活性 ,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组 DNA分别进行 DNase 敏感性分析 .结果显示 :糖尿病肾病大鼠肝 DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝 ,其基因组 DNA对 DNase 敏感性比正常大鼠肝增强 ;中药“糖微康”治疗及西药“开博通”治疗的大鼠的肝 DNA甲基化酶活性均有所回升 ,且中药组更接近正常大鼠对 DNase 的敏感性 .     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNaseⅠ敏感性的分析

用3H标记的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(3H-SAM)作为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药"糖微康"治疗的糖尿病肾病大鼠、西药"开博通"治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的DNA甲基化酶活性,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组DNA分别进行DNaseⅠ敏感性分析.结果显示:糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝,其基因组DNA对DNaseⅠ敏感性比正常大鼠肝增强;中药"糖微康"治疗及西药"开博通"治疗的大鼠的肝DNA甲基化酶活性均有所回升,且中药组更接近正常大鼠对DNaseⅠ的敏感性.     

糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNaseⅠ敏感性的分析

用3H标记的S-腺苷酰-L-甲硫氨酸(3H-SAM)作为甲基供体,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药"糖微康"治疗的糖尿病肾病大鼠、西药"开博通"治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的DNA甲基化酶活性,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组DNA分别进行DNaseⅠ敏感性分析.结果显示:糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝,其基因组DNA对DNaseⅠ敏感性比正常大鼠肝增强;中药"糖微康"治疗及西药"开博通"治疗的大鼠的肝DNA甲基化酶活性均有所回升,且中药组更接近正常大鼠对DNaseⅠ的敏感性.     

子宫颈癌抑癌基因P16第一外显子CpG岛异常甲基化

利用限制性核酸内切酶-PCR方法分析33例肿瘤组织和15例正常组织抑癌基因p16第一外显子SacⅡ和SmaⅠ酶切位点甲基化,应用SPSS软件进行统计分析。结果显示,18例子宫颈癌在抑癌基因p16第一外显子SacⅡ位点甲基化,8例子宫颈癌在SmaⅠ位点甲基化。正常组织仅有两例在抑癌基因p16第一外显子SacⅡ位点甲基化,正常组织在SmaⅠ位点没有甲基化。另外,抑癌基因p16第一外显子SacⅡ和SmaⅠ酶切位点甲基化易发生在肿瘤的早期。抑癌基因p16第一外显子SacⅡ和SmaⅠ酶切位点甲基化与子宫颈癌相关。     

甲状腺癌甲基化差异片断的筛选

目的筛选甲状腺癌与甲状腺癌旁组织的甲基化差异片段。方法采用甲基敏感性代表性差异分析（MS-RDA）方法,用甲基化敏感性内切酶消化甲状腺癌及癌旁组织基因组DNA,连上接头制备扩增子后,进行两轮消减杂交,筛选甲状腺癌与癌旁组织的甲基化差异片段。结果经过两轮消减杂交后,筛选出3个低甲基化差异片段,2个高甲基化差异片断。筛选出的低甲基化差异片段C913位于BC029276基因上,该基因编码一种rRNA结合蛋白,可能与肿瘤有关。另外2个低甲基化差异片段C915与C917尚未见相关结构和功能的报道。两个高甲基化差异片断与已知基因同源性在20%-35%之间。5个片断均为新的甲基化差异片断。结论在甲状腺癌组织中存在异常甲基化,筛选出的甲基化差异片断有助于进一步了解异常甲基化在甲状腺癌发生发展中的作用。     

高活力水稻种子萌发过程中DNA甲基化变化的MSAP分析

DNA甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式,是调节基因组功能的重要手段。本实验采用MSAP方法分析,旨在研究高活力水稻种子萌发过程中的甲基化与去甲基化变化的规律,为研究种子的老化机理和种子的长期保存提供依据。结果表明:水稻种子萌发过程中,同时发生了甲基化与去甲基化作用,且去甲基化作用先于甲基化作用发生。发生去甲基化可能与基因活化有关,发生甲基化可能与组织特异性有关。     

编码普通野生稻磷酸盐转运蛋白基因片段的分离与克隆

以云南普通野生稻基因组DNA为模板，根据GeneBank中登记的编码小麦高亲和力磷酸转运蛋白基因保守序列设计一对特异引物，利用多聚酶链反应技术（PCR），扩增出目标基因（cwrpt)1002bp长度的基因片段并克隆到载体pGEM-T。经DIG标记探针杂交检测初筛，限制性内切酶酶切，PCR扩增，DNA序列分析与可能氨基酸序列同源性比较，此推定的氨基酸序列与小麦，水稻，拟南芥，番茄磷酸转运蛋白同源性很高，初步认为此基因片段为普通野生稻耐低磷胁迫相关磷酸盐转运蛋白的编码基因，获得全长序列与基因表达的进一步研究正在进行中。     

DNA甲基化异常与人类肿瘤

DNA甲基化是表遗传学上研究最深入的一种机制,是一种酶介导的化学修饰过程,在DNA的某些碱基上增加一个甲基.在人类的肿瘤中都可以发现不同程度的DNA异常甲基化现象.介绍DNA甲基化在基因表达中的作用及其抑制基因转录、表达的机理,尤其发生在抑癌基因CpG岛和其他相关基因的甲基化异常与肿瘤发生、演进的关系,甲基化的检测方法以及去甲基化在肿瘤治疗方面的应用前景.     

一种蛙病毒的纯化和酶切分析

从患病虎纹蛙（Rana tigrina rugulosa)蝌蚪中分离得到一种蛙病毒,感染鱼的FHM、CO、EPC细胞,获得大量的病毒原料,分离纯化得到高纯度的病毒粒子,电镜下可见病毒粒子为二十面体,具囊膜,直径平均为125nm。抽提病毒核酸,对其基因组DNA进行酶切分析,病毒基因组为双链DNA分子,表现脊椎动物虹彩病毒基因组的特点即其胞嘧啶5′端高度甲基化。以限制性内切酶XbaⅠ、BanHⅠ、HindⅢ、KpnⅠ和PstⅠ酶切病毒基因组DNA,经电泳分离后,分别得到13、25、6、14、22条清晰的酶切片段,并根据酶切片段算得基因组的大小超过100kb。用PCR方法,得到这个病毒的主衣壳蛋白（MCP）基因保守序列,与FV3相比,同源性达98％。     

MSAP在水稻害虫白背飞虱中的应用研究

甲基化敏感的扩增多态性分析方法 (MSAP)是在扩增片段长度多态性技术基础上建立起来的主要用来检测样品基因组DNA甲基化情况的一种方法,特别适用于全基因组范围内检测CCGG位点的胞嘧啶甲基化情况,在高等动物和许多植物上已广泛应用,但尚未有在昆虫中应用该方法的报道。从DNA提取、酶切基因组DNA用量、酶切和接头连接时间、电泳图谱显影方法等方面对MSAP方法进行了改进,并在水稻重要害虫白背飞虱上得到成功应用。这为将来在其它昆虫中使用该方法研究基因组DNA甲基化情况提供了一定借鉴和指导价值。且通过比较白背飞虱雌雄性别间和长短翅型间的MSAP图谱,发现雌雄性别间和长短翅型间的基因组DNA甲基化式样都存在明显的差异,说明DNA甲基化可能参与了性别和翅型分化的调节。     

北魏书法三题——读康有为《广艺舟双楫》

北魏作为中国书法史的重要阶段,形成了颇具时代特点的书风。康有为《广艺舟双楫》积极推扬、倡＂尊魏卑唐＂之论。从三个方面切入,一是对康氏所概括的＂魏碑十美＂给予阐释,二是对其所分的＂十六宗＂予以辨析,三是对方圆笔法进行论述,旨在推进北魏书法的研究。     

F-MSAP： A practical system to detect methylation in chicken genome

By replacing radiation with fluorescent system in the technique of methylation sensitive amplified polymorphism （MSAP） and optimizing reaction conditions, a modified technique to detect DNA methylation called F-MSAP （fluorescent labeled methylation sensitive amplified polymorphism） was developed. In the present study, cytosine methylation patterns of genomic DNA were investigated in two inbred chickens and their F1 hybrids. Three types of methylation patterns were observed in each individual, namely fully methylated, hemi-methylated or not methylated types. The average incidence of methylation was approximately 40%. The percentage that the F1 hybrid individual inherits the methylation for any given sites from either/both parent amounted to 95%, while the percentage of altered methylation patterns in F1 individual was only 5%, including 14 increased and 12 decreased methylation types, demonstrating that F-MSAP was highly efficient for large-scale detection of cytosine methylation in chicken genome. Our technique can be further extended to other animals or plants with complex genome and rich in methylation polymorphism.     

DNA甲基化与基因调控

ＤＮＡ甲基化或去甲基化,改变了ＤＮＡ分子构象,导致某些重要基团的隐蔽或暴露,削弱或增强了ＤＮＡ与蛋白质因子的结合能力,从而改变了基因表达．     

Influence of DNA methylation on transgene expression

DNA methylation plays an important role in gene expression in eukaryote. But DNA methylation of transgene usually leads to target gene silencing in plant genetic engineering. In this research, reporter gene b-glu- curonidase (GUS) gene ( uidA ) was introduced into tobaccos via Agrobacterium-mediated transformation method, and the foreign uidA gene became inactive in some transgenic tobaccos. No mRNA of uidA was detected in these plants by Northern blotting analysis, and DNA methylation of promoter region was found. The results indicated that gene silencing might be caused by DNA methylation of promoter.     

陈子昂的文学观及其诗文实践

初唐之际,陈子昂＂文章道弊五百年＂的诗文革新论、＂汉魏风骨,晋宋莫传＂的文学风格论、＂兴寄都绝,每以咏叹＂的文学本质论、＂当有知音,以传示之＂的文学创作论的文学观及其诗文实践,承继汉魏风骨,开启盛唐气象,为盛唐诗文奠定了基调,唱响了＂盛唐之音＂的序曲。     

Detection of DNA methylation changes during seed germination in rapeseed （Brassica napus）

DNA methylation is a common yet important modi- fication of DNA in eukaryotic organisms. DNA methy- lation, especially methylation of cytosine (m5C), have both epigenetic and mutagenic effects on various cellu- lar activities such as differential gene exp…     

葛根黄酮降血糖防治糖尿病并发症的实验研究

通过尾静脉注射四氧嘧啶(50mg/kg体重)建立糖尿病小鼠模型,实验分为正常组、糖尿病组、糖脉康药物对照组和葛根黄酮组,实验40d后检测各组动物体重、饮水量、血糖、糖耐量、果糖胺、山梨醇、醛糖还原酶、山梨醇脱氢酶和糖基化终产物(AGEs)等实验指标.结果表明,葛根黄酮能明显改善糖尿病小鼠的病理症状,降低血糖水平,降低血液中果糖胺、山梨醇、醛糖还原酶和AGEs的含量,升高血液中山梨醇脱氢酶的含量,同时还能降低肝脏、肾脏、大脑、心脏和皮肤组织中AGEs和山梨醇的含量,与糖尿病组小鼠比较差异显著(P0.01).由此得出结论,葛根黄酮除具有明显降血糖作用外,还对糖尿病并发症有一定的预防和治疗效果.