尖吻蝮蛇三种毒蛋白氨基酸组成与N—末端分析

尖吻蝮蛇(Agkistrodon Acutus)三种毒蛋白的纯化及其性质的研究,徐洵等已经作详尽报道,它们都具有出血及致死作用,并兼有蛋白水解酶活性和纤溶活性等多种功能。但其出血活性不尽相同,如AaT—Ⅰ出血活性最大,还兼有肌溶作用,AaT—Ⅱ出血活性次之,而对心肌则有明显毒性作用,AaT—Ⅲ出血活性较小,主要为肌肉坏死作用。因此,研究这些毒蛋白的结构和功能的关系具有一定的理论和实践价值。分析比较它们在结构上的微观异     

鲨鱼肠道蛋白酶的分离纯化及性质的初步研究

以鲨鱼肠为材料，经柠檬酸缓冲液抽提，硫酸铵分级分离，ＣＭ－纤维素离子交换柱层析纯化，获得蛋白酶（Ⅰ）和蛋白酶（Ⅱ），研究了蛋白酶Ⅱ性质，酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白纯，酶的紫外吸收特征峰在２７５ｎｍ处，测得酶的分子量为１８ｋｄ，在ＰＨ８．０、３７℃下酶催化酪蛋白水解的Ｋｍ值为６．９×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ。酶水解酪蛋白的最活温度为５２℃，活化能为７６．５３ｋＪ／ｍｏｌ。几种金属离子对酶活力的     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长ｃＤＮＡ克隆ｐＢａＳ１ｃ１８４Ｘ ＧＬⅢ和ＣＯｒＩ双酶切，回收基中的酪蛋白基因编码片段，与经ＢａｍＨＩ，ＳｍａＩ双酶切的植物表达载体ｐＢＩ１２．１２分两步连接；第一步载体的ＢａｍＨＩ末端与酪蛋白基因的ＢｇｌⅡ粘性末端连接；第二步用Ｔ４ＤＮＡ多聚酶补平酪蛋白基因的ＥｃｏＴＲⅠ末端，再与载体ＳｍａⅠ进行平末端连接而环化。     

山光杜鹃化学成分研究

从山光杜鹃中分离得到４个二萜成分和一个酚甙，根据光谱法和文献比较分别鉴定为：木藜毒素，－Ⅰ（Ⅰ），木藜芦毒素－Ⅳ（Ⅱ），５，６－异丙叉基木藜芦毒素－Ⅰ（Ⅲ），５，６－异丙叉基本藜芦毒素－Ⅳ（Ⅳ），自桦甙（Ⅴ），其中Ⅲ和Ⅳ为次生新化合物。     

东亚马氏钳蝎部分纯化的神经毒素对GH3细胞钠电流的影响

马氏钳蝎粗毒ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离后可得到几个组分。其中峰Ⅱ毒素对蜚蠊毒性较大，而峰Ⅲ毒素对小白鼠毒性较大，可以认为它们是部分纯化的昆虫类毒素和哺乳类毒素。     

单异丙氧基二核铝酸酯结构和性质研究

通过元素分析和分子量测定,确证了合成的单异丙氧基三(二异辛基磷酸基)二核铝酸酯(Ⅰ)、单异丙氧基三(单异辛基,异辛基膦酸基)二核铝酸酯(Ⅱ)和单异丙氧基三油酸基二核铝酸醋(Ⅲ)的化学组成。应用均相水解法测得它们的水解稳定性是Ⅰ<Ⅱ<Ⅲ。利用红外光谱法研究了这些化合物的分子结构,并解释其水解稳定性的原因。化合物Ⅰ、Ⅱ分别在210℃和195℃开始失重,Ⅲ也有较好的热稳定性,但其热分解行为较为复杂,这与它的分子中含有不饱和结构有关。     

海星活性成分研究进展

海星中含有蛋白和多肽、糖苷类、甾醇、生物碱、神经酰胺等生物活性物质。在海星中已分离纯化出的物质具有多种生理活性。在这些提取物中,蛋白具有免疫活性,促细胞生长活性;甾类糖苷有细胞毒性、溶血、抗病毒、抗炎症、鱼毒素等活性;生物碱类有细胞毒性、抗病毒、抗真菌活性;神经节苷酯类有抗肿瘤活性。     

相转移催化不对称合成(Ⅳ)——由希夫碱合成光学活性α-氨基酸

在固-液两相条件下,探讨甘氨酸乙酯薄荷酮希夫碱(Ⅰ)与丙烯腈在不同反应条件下的不对称Michael加成反应,合成了光学活性的丙烯腈薄荷酮希夫碱的衍生物(Ⅱ),经进一步水解得到相应的光学活性的α-谷氨酸盐酸盐(Ⅲ).光学纯度P_o为0.82%～40.7%.     

真菌嵌合体植酸酶的构建及其抗蛋白酶水解特性研究

 在烟曲霉植酸酶（Afp）的基因上,通过PCR逐步将编码1-47、178-237及338-381多肽序列的DNA片段置换为黑曲霉NRRL 3135植酸酶（Anp）中的对应片段,构建了3个嵌合体（嵌合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ）基因,并在毕赤酵母中将其成功表达及纯化。所有的嵌合体和亲本植酸酶均能抵抗胃蛋白酶。在m(胰蛋白酶)/m(植酸酶)为0.1时,Anp完全失活;但Afp与所有嵌合体的活性仅损失13%~23%。胰蛋白酶水解产物的SDS-PAGE结果显示嵌合体Ⅱ与Ⅲ也能被胰蛋白酶严重水解,但非变性PAGE结果却表明它们在水解后仍能保持结构完整。嵌合体也具有一些与Anp及Afp相异的新pH曲线及耐热性。实验表明,通过替换基因片段改良真菌植酸酶可行。     

牦牛乳经凝乳酶作用后的蛋白组分变化

为研究牦牛乳经凝乳酶凝乳后的乳蛋白组分变化,在牦牛乳中加入凝乳酶进行凝乳,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和碱性尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对凝乳酪蛋白和乳清蛋白的组成进行了分析.结果显示,牦牛乳凝乳后酪蛋白发生了显著水解,水解产物存在于凝乳酪蛋白中,同时乳清中新增加了一些低分子量的可溶性蛋白.这些变化可能涉及部分α-酪蛋白的水解.     

胰蛋白酶水解酪蛋白所得产物抗菌活性的研究

利用胰蛋白酶水解酪蛋白,并对水解产物进行了分离,得到产物1、2、3,比较不同水解度条件下各种产物的抗菌活性;摸索培养基起始pH值、水解产物添加量对抗菌活性的影响.结果表明在37℃、底物浓度为10%时,三种水解产物的抗菌活性均随着水解度的增大而增大,并最终趋于平缓,产物3的抗菌活性最好;培养基起始pH值为8.0时,30 mL培养基中水解产物添加量达到2 mL时,水解产物的抗菌效果有较大提高.     

石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒活性抑制作用的初步研究

【目的】寻找用于治疗尖吻蝮(Agkistrodon acutus)咬伤的中草药石柑子(Pothos chinensis)的药效实验证据。【方法】将制备所得石柑子水提物与尖吻蝮蛇毒混合孵育40min,检测混合液中蛇毒的磷脂酶A2活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性。【结果】石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒的磷脂酶A2活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性都有明显抑制作用。【结论】研究结果初步证实了石柑子对尖吻蝮咬伤具有治疗效果。     

苏云金芽孢杆菌毒素Cry7Aa1三维结构模型

运用生物信息学软件和网络数据库资源,采取同源建模的方法以毒素蛋白Cry8Ea1为模板预测了苏云金芽孢杆菌毒素Cry7Aa1的三级结构并分析了相关的生物学功能.结果表明,Cry7Aa1为3个结构域组成的近似球状蛋白,Cry7Aa1在氨基酸序列上与Cry8Ea1有40%的同源性,在三维结构_ECry7Aa1与Cry8Ea1有高度的相似性,它们结构域Ⅰ几乎完全相同,在结构域Ⅱ之间和结构域Ⅲ之间存在较小差异.Cry7Aa1与Cry8Ea1的表面电势分布不同.2种毒素具有相似的毒杀机理.模型经Ramachandran图和Verify 3D检验具有合理性.     

年轻妇女宫颈癌50例临床分析

目的分析年轻妇女宫颈癌的临床表现、临床病例组织学特征、诊断和治疗.方法回顾分析本院50例年轻宫颈癌患者的临床资料.结果年轻妇女宫颈癌的临床表现主要为接触性阴道出血.患者的5年生存率原位癌为100%。Ⅰa期85.7%.Ⅰb期77.8%,Ⅱa期63.6%,Ⅱb期62.5%,Ⅲa期、Ⅲb期均为0,鳞癌为79.1%,腺癌和腺鳞癌28.8%.手术后随访患者中无一例卵巢转移,且卵巢功能无明显影响.结论接触性出血为年轻妇女宫颈癌的危险信号,必须高度重视,以免延误诊断和治疗,对年轻早期宫颈癌患者治疗时须注意保留卵巢功能或生育功能.     

内大麦叶片SOD活性低下的原因研究

各苗龄南黄大麦叶片细胞分裂素含量,超氧化物歧化酶活性均明显低于早熟三号,ＳＯＤ同功酶比早熟三号少１条谱带,且ＳＯＤ同功酶谱带Ⅰ,Ⅲ均窄于早熟三号,但谱带Ⅱ宽度与早熟三号基本一致,外源６－ＢＡ处理,提高南黄大麦叶片ＳＯＤ活性,促进ＳＯＤ同功酶谱带Ⅰ,Ⅲ的增宽,且诱导谱带Ⅳ的形成,但对谱带Ⅱ宽度影响极小。     

葱蜜酒剂对健康兔心功能的影响

本试验用健康日本大耳白兔45只,分为葱蜜酒(Ⅰ)、葱酒(Ⅱ)、蜜酒(Ⅲ)及白酒(Ⅳ)四组。酒剂用冷渍法,用药后临床症状Ⅰ及Ⅲ组腹胀明显。心电图Ⅱ导联波形比较恒定、明显。Ⅰ组用药后P波呈明显上升趋势,T波则明显下降。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组T波和P波的变化不如Ⅰ组明显。病理组织学变化:Ⅰ组心肌炎最明显(有充血、出血、颗粒变性、心肌纤维断裂,炎性浸润等),Ⅱ组个别家兔有明显心肌灸,炎性细胞浸润较轻,Ⅲ组病变轻微,Ⅳ组病变不明显。     

牛酪蛋白cDNA基因克隆的改建

牛酪蛋白全长cDNA克隆pB_aS_1C184经Bgl Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,回收其中的酪蛋白基因编码片段,与经BamH Ⅰ、SmaⅠ双酶切的植物表达载体pBI121.2分两步连接:第一步载体的BamHⅠ末端与酪蛋白基因的BglⅠ粘性末端连接;第二步用T_4DNA多聚酶补平酪蛋白基因的EcoR Ⅰ末端,再与载体SmaⅠ进行平末端连接而环化,转化JM109菌株,从得到的33个转化子中,通过~(32)P标记的酪蛋白cDNA基因为探针,点杂交筛选到一个阳性克隆。经酶切鉴定,确认酪蛋白cDNA基因编码区已正确插入到pBI121.2中。     

混凝土断裂临界值测试研究

对一种常规混凝土，用相同的单边裂缝方形试件和统一的加载装置，进行了Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型３种单一型和Ⅰ－Ⅱ、Ⅰ－Ⅲ、Ⅱ－Ⅲ、Ⅰ－Ⅱ－Ⅲ４种复合型裂缝失稳扩展时的应力强度因子临界值的测试，得出ＫⅠｃ、ＫⅡｃ、ＫⅢｃ和Ⅰ－Ⅱ、Ⅰ－Ⅲ、Ⅱ－Ⅲ复合型临界断裂曲线和Ⅰ－Ⅱ一Ⅲ复合型临界断裂曲面，从而获得了完整的Ｋ判据临界值体系。     

石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒活性抑制作用的初步研究

【目的】寻找用于治疗尖吻蝮(Agkistrodon acutus)咬伤的中草药石柑子(Pothos chinensis)的药效实验证据。【方法】将制备所得石柑子水提物与尖吻蝮蛇毒混合孵育40min,检测混合液中蛇毒的磷脂酶 A2 活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性。【结果】石柑子水提物对尖吻蝮蛇毒的磷脂酶 A2 活性、透明质酸酶活性、蛋白水解酶活性、出血活性、凝血活性和致死活性都有明显抑制作用。【结论】研究结果初步证实了石柑子对尖吻蝮咬伤具有治疗效果。
     

红毛五加多糖的分离纯化和表观分子质量测定

红毛五加经热水浸提，用Sevag法脱蛋白，经DEAE—cellulose 32离子交换层析和Sephacryl S-200HR凝胶层析纯化得到3个主要多糖组分：AHP-Ⅰ、AHP-Ⅱ、AHP-Ⅲ，经HPLC和Sephacryl S-300HR凝胶层析鉴定，3种多糖均为均一组分，HPLC测定AHP-Ⅰ、AHP-Ⅱ、AHP-Ⅲ的表观分子质量分别为：7．0kD、59．5kD和12．9kD，Sephacryl S-300HR凝胶层析进行验证，得到相似结果．