人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达、复性及分离纯化

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ—ＰＡ）。ＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中，在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％．以醋酸钟显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ—ＰＡ表达条带，进行复性处理．Ｒ性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ—ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ—ＰＡ．     

两步亲和层析纯化限制性核酸内切酶Bsp 63Ⅰ

以Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ６３为材料,采用ＤＮＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ和ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ３ＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ两步亲和层析,分离纯化得到电泳均一纯限制性核酸内切酶Ｂｓｐ６３Ⅰ。酶的得率约为１３０单位／ｇ湿菌,比活力高达６１４００单位／ｍｇ蛋白。还报道了ＤＮＡ－Ｓｐｅｈａｒｏｓｅ４Ｂ两种亲和吸附剂制作方法的改进。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

单克隆抗本亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗本的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ纯化得到ＩｇＧ纯品，分子量为１５０ＫＤ，与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。     

单克隆抗体亲和层析法纯化人尿激酶

含抗人尿激酶单克隆抗体的腹水经ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ柱纯化得到ＩｇＧ纯品,分子量为１５０ｋＤ（重链５５ｋＤ,轻链２０ｋＤ）,与ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联制成抗人尿激酶单克隆抗－体－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析介质。尿激酶粗品经单抗－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化后,所得尿激酶制品比活为９×１０－４～１．７×１０－３ｍｏｌ／ｓ·ｍｇ－１,纯化倍数为１５～３０倍,酶活性回收率在５０％以上。     

用柱层析技术纯化孕血清中的早孕因子（EPF）

采用ＤＥＡＥ，Ｓ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦ·Ｆ离子交换层析，ＣｏｎＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，ＨｅｐａｒｉｎＳｅｇｈａｒｏｓｅ亲和层析，从１１０例妊娠３～８周早孕妇女混合静脉血清中提取，纯化早孕因子（ＥＰＦ）。以玖瑰花结抑制试验（Ｅａ－ＲＩＴ）检测孕血清及各阶段提取物的ＥＰＦ活性，盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其纯度．结果表明提取，纯化的ＥＰＦ达电泳纯，在国内尚未见报导。     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

用柱色谱纯化牛红血球超氧化物歧化酶

比较了几种初步纯化超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的方法,并进行了优化组合。研究了用软基质阴离子交换柱（ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ）和凝胶柱（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ）分离纯化ＳＯＤ的工艺条件。利用建立的方法纯化了来自牛血的超氧化物歧化酶,整个工艺过程总活性回收率为６５％,比活为５４２９Ｕ／ｍｇ,纯化倍数提高至６１倍。     

Fe^2＋和CO2对番木瓜ACC氧化酶活性的影响

１－氨基环丙烷－１－羧酸（ＡＣＣ）氧化酶催化ＡＣＣ氧化成为乙烯．通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析后，ＡＣＣ氧化酶被纯化１９．５倍．在体外分析中，ＡＣＣ氧化酶活性被Ｆｅ２＋和ＣＯ２促进；Ｃｏ２＋、Ｎｉ２＋和Ｍｎ２＋抑制ＡＣＣ氧化酶的活性，但这种抑制效应能部分地被Ｆｅ２＋所拮抗．ＣＯ２对ＡＣＣ氧化酶活性的促进作用与反应体系中氧的浓度有关，在２１％的氧浓度下，ＣＯ２的促进作用较显著     

NF－1菌胞外多糖的制备及其结构初步分析

报道了ＮＦ－１菌胞外多糖的分离纯化工艺，并对其结构做了初步分析。即反复用水溶、乙醇沉淀法得到粗多糖，然后经两根ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ凝胶层析柱分离纯化，所得多糖纯度用蒽酮比色法测定，红外光谱分析表明，该多糖呈β－糖苷键连接．     

肝素－琼脂糖凝胶4B的制备及在肝生长因子提取纯化中的应用

以琼脂糖凝胶为载体，肝素为配基，乙睛活化后经环氧氯丙烷偶联，制得肝素——琼脂糖凝胶．经间接法测定，偶联率为２．４７５ｍｇ肝素／ｇ湿重琼脂糖凝胶，与Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司的Ｈｅｐａｒｉｎ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ比较，两种凝胶对肝细胞生长因子（ＨＧＦ）的亲和能力、层析行为及重复使用性能等方面非常相似，且自制凝胶的成本仅为进口的１／２０，解决了ＨＧＦ纯化过程中的关键步骤，使大量提取生产ＨＧＦ成为可能．     

Separation and Purification of Thrombin-like Enzymes by Affinity Adsorbents

An affinity adsorbent, benzamidineSepharose 4B, was used to separate and purify thrombinlike enzymes. The paminobenzamidine as a specific ligand was coupled to the matrix-Sepharose 4B. The recombinant thrombinlike enzyme-defibrase was used as a model in order to evaluate the efficiency of this biospecific affinity adsorbent. The homogeneity of the enzyme preparation was comfirmed as one band on sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis.     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

菲律宾蛤仔糖蛋白提取及体外抗肿瘤活性研究

以菲律宾蛤仔肉为研究对象,水提醇沉,Sevag法除蛋白,DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析柱分离纯化,Sephadex G-25凝胶柱除盐,得到1种白色组分,红外显示该组分具有糖蛋白的一般吸收特征。将该糖蛋白作用于前列腺癌细胞DU-145进行体外药物敏感性实验,结果显示,0.1 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰组分对DU-145细胞具有明显增殖抑制作用,最适作用浓度约为25 mg/mL,表明菲律宾蛤仔具有潜在的抗肿瘤作用。     

蚯蚓纤溶酶的分离纯化及性质鉴定

以赤子爱胜蚓为材料，经过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤和制备电泳分离得到四种纤溶酶组分．经PAGE鉴定四种组分为单一组分；SDS-PAGE测定其分子质量分别为27、28、23和33ku；等电点均在4．0以下；经甲苯胺蓝染色后都出现糖蛋白的阳性反应；用苯酚一硫酸法测定其中性糖含量分别为8.4％、13.5％、9．1％、6．8％；纤维平板法测得四种组分的活性存在明显差异；四种组分都具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用．pH值对四种组分纤溶活性稳定性的影响各不相同．四种组分对温度的适应范围较广．     

牛血超氧化物歧化酶脂质体的稳定性

采用“逆相蒸发法”制备含有牛血细胞超氧化物歧化酶(Cu,2n—SOD)的大单层囊泡脂质体,经过一次Sepharose 4B柱层析得到纯化的SOD—脂质体(SOD—Luv);SOD—Luv可以有效地抵抗6.Omol/L盐酸胍的钝化作用;SOD—Luv可以有效地抵抗胰蛋白酶的消化作用。     

金耳水溶性多糖的部分化学性质及抑瘤试验

金耳子实体经热水抽提，反复经Ｓｅｖａｇ法脱蛋白，获得金耳多糖，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ分级分离呈现双峰（Ａ和Ｂ）。其峰Ａ的相对分子质量介于１０＾５￣１０＾６之间。峰Ａ组分经醋酸纤维薄膜电泳鉴定，呈现单一谱带，为一纯多糖。利用硅胶Ｇ薄板层析技术，确定峰Ａ组分主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖组成。利用人肺腺癌裸小鼠模型ＬＡＸ－８３对金耳多糖全组分进行抑瘤试验，结果表明有明显抑瘤疗效。     

超氧化物歧化酶的异硫氰酸荧光素脂质体的研究

在pH9.5的0.5mol/LNa_2CO_3缓冲液中,异硫氰酸荧光素(FITC)标记牛血超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD),经层析得到纯化的FITC-SOD;用逆相蒸发法制得含FITC-SOD的逆相蒸发囊泡(REV)即(FITC-SOD)-LUV,将含(FITC-SOD)-LUV与游离的FITC-SOD的混合物,通过—Sepharose4B层析柱,合并洗脱后的A_(620)峰即为(FITC-SOD)-LUV.     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。