水蛭素-RGD序列融合蛋白基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达

水蛭素是从医用水蛭唾液腺中分离纯化的一种多肽,分子量约为7 kD.它是天然存在的最专一有效的凝血酶抑制剂,无明显毒副作用,用量低,因此可作为抗栓药物用于治疗血栓性疾病[1～2].RGD序列是纤维蛋白原等粘附因子上以Arg-Gly-Asp为核心的小肽序列[3],通过与活化血小板上纤维蛋白原受体GPⅡb/Ⅲa结合而导致血小板聚集.因此外源RGD序列可通过竞争性结合该受体而阻断血小板的聚集,抑制血栓的形成[4].RGD序列与水蛭素融合可获得同时具有抗凝血酶和抗血小板聚集双功能的新型抗栓剂.本文首次报道重组水蛭素HV3与RGD序列融合蛋白基因克隆并在枯草芽孢杆菌中表达的结果.     

含RGD序列水蛭素嵌合抗栓剂的构建与表达

通过对水蛭素及一些含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的多肽类血小板聚集抑制剂结构与功能的分析,设计并构建了两个在水蛭素C端融合RGD序列的嵌合分子。嵌合体基因分别重组到表达载体pET-21a(+)中并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经限制酶消化和DNA序列分析,证明两种重组质粒与设计完全一致。由于RGD-水蛭素嵌合基因上游连接了金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)的信号肽序列,在IPTG诱导下两种嵌合分子都获得了分泌表达,表达产物主要集中在细胞周质空间。通过离子交换层析和凝胶过滤层分别对两种嵌合体蛋白进行纯化,纯化产物在Tricine-SDS-PAGE中都显示为单一条带。活性分析结果表明两种嵌合体蛋白在保留水蛭素抗凝血酶活力的同时,还呈现抗血小板聚集活性。     

关于(A6,A11)-双位点突变胰岛素原作为外源肽呈递骨架可行性的研究

通过重组DNA技术,以(A6,A11)-双突变胰岛素原分子为支架构建了含有外源抗栓肽功能区的嵌合分子,并在大肠杆菌进行了表达和纯化.对嵌合分子进行胰岛素受体结合活性、放射免疫活性及抗血小板聚集活性分析,结果表明该嵌合分子具有较强的血小板聚集抑制活性,而无胰岛素生物活性,证明以(A6,A11)-双突变胰岛素原作为外源肽序列呈递骨架是可行的.     

安舒克栓酶和水蛭素融合基因在枯草杆菌中的表达(简报)

安舒克栓酶(Antithromboase,AT)是本实验室从枯草杆菌N18中分离得到的具有强烈水解纤维蛋白活性的蛋白酶.研究表明,该酶具有直接纤溶和纤溶酶原激活剂的双重作用,且有较强的纤维蛋白亲和性,是极具开发价值的溶栓药物.来源于医用水蛭的水蛭素(hirudin,Hir)是凝血酶的最强有力的天然抑制剂,是极具优势的抗凝药物.但仍各有不足:安舒克栓酶只有溶栓功能,不能抗栓,不能解决血栓治疗中再栓塞的问题;水蛭素只有抗凝作用,不具溶栓功能.如果将这两种从不同途径治疗血栓的药物.通过融合     

抗凝血蛋白药物的研究进展

除了血液中的抗凝因子外，自然界中还存在大量具有抗凝活性的生物大分子，如水蛭素、蚯蚓纤溶酶等．基础研究证实这些抗凝刑的作用一般是通过三方面得以实现：一是抑制凝血酶及凝血酶活化因子活性；二是水解血纤维蛋白或纤溶酶原；三是抑制血小板凝聚．由于这些活性物质具有高效的抗凝、溶栓作用，它们极有可能发展成治疗血栓性疾病的药物．     

KGD环七肽的分子设计及性质研究

通过化学合成方法合成线性长度七肽分子CKGDWDC,进而通过在(1,7)位形成二硫键构成共价闭合环状结构,最终形成KGD环七肽.结构计算结果显示,KGD环七肽中的KGD序列表现出功能构象,具有较强的抗血小板聚集活性,能够专一性识别与结合血小板膜上纤原受体,具有较强的抑制血栓形成的能力.KGD环七肽具有较强的实际应用价值和广阔的应用前景.     

水蛭素基因的递归PCR合成和在大肠杆菌中的表达与分泌

水蛭素是凝血酶最强的特异抑制剂，可望成为预防和治疗各种血栓疾病的有效药物。根据医用水蛭头部水蛭素（ＨＶ－２）的氨基酸序列，通过递归ＰＣＲ，合成水蛭素基因，并重组到本实验室改建的大肠杆菌分泌型表达载体ｐＩＮ－＝ｏｍｐＡ－ＨＩ中，使水蛭素基因的编码序列直接位于大肠杆菌外膜蛋白Ａ信号肽序列的下游。转化大肠杆菌ＤＨ５α，筛选出重组体，经ＰＣＲ，限制酶切图谱和序列分析，结果表明所合成的水蛭素基因与设计完全一     

水蛭素基因植物表达载体的构建

在不改变水蛭素原氨基酸序列前提前下,根椐植物基因密码子选择偏向,对水蛭素基因序列进行了改造．在设计和合成的水蛭素基因序列中添加了先导链、poly(A)尾、XbaⅠ和SacⅠ双酶切位点．将所合成序列与双元载体pBI121重组,构建成pBI121-hir植物高效表达载体．经抗性筛选法、琼脂糖凝胶电泳和测序3种方法鉴定,该载体构建成功．     

天然水蛭素的提取和纯化(简报)

水蛭素(hirudin)是存在于水蛭唾液中的一种酸性多肽类物质,是迄今为止世界上最强的凝血酶抑制剂,在治疗各种血栓性疾病及弥散性血管内凝血中均有很好的预防及治疗效果,并且没有副作用,因而它比肝素更有优越性。研究表明,水蛭素还能防止肿瘤细胞的转移,用水蛭素配合化疗和放疗,可促进肿瘤中的血流而增强疗效,因而具有宽阔的临床应用前景。     

血小板聚集功能临床应用进展

血小板具有凝血和止血的功能.血小板聚集率在一定程度上能预示患者的出血风险,故对患者进行血小板功能试验的检测对临床治疗和患者出血风险评估方面有着重要的意义.血小板聚集功能的测定对于临床上诊断出血性疾病、血栓前状态、血栓性疾病及抗血小板药物监测方面具有重要意义.血小板聚集率检测在血液病、心内科疾病、神经内科疾病、内分泌科疾病及其并发症的预防、抗凝药物的监测、疾病辅助诊断和预后发挥着积极的作用.因此开展血小板聚集功能检测技术是临床不可缺少的项目之一.     

基于电力负荷管理系统的交流采样(简报)

0引言交流采样是电力系统中实现各种监测功能的一项关键技术.20世纪90年代中后期该技术与电力负荷管理系统初步结合,随着现代电子技术的高速发展,其实现方法也逐渐成熟,由单片机慢速采样到现今的DSP高速采样;由简单的电压电流监测到用户端的电网谐波分析,质量考核;由电力负荷管理系统中的可选配置变为标准配置.然而,关于其结合电力负荷管理系统的发展以及应用却鲜见报道.     

红色伪角毛虫无性生殖中大核DNA合成的形态学(简报)

腹毛类纤毛虫(hypotrichciliates)是纤毛门原生动物中一个最为进化的类群.迄今的研究表明.这类纤毛虫细胞除具有腹、背的分化,细胞表面纤毛聚集成发达的口纤毛器和体纤毛器外。其另一个典型特征是,细胞内含有一个至多个致密型大核,细胞周期中大核DNA合成采用复制带(replicationband)的形式进行.在含一枚大核的纤毛虫细胞中,核的两端同时出现复制带,两条带相向移动至融合后消失,完成DNA复制;在含有两枚至多枚大核的绝大多数种类中,各在核的一端出现复制带,并分别向核的另一端移动,当两个至多个大核相互靠拢,带消失,表明DNA复制完成,然后大核融合成一部分.作为较罕见的例子,作者对红色伪角毛虫(Pseudokeronopsisrubra)的观察发现,虽然其具有腹毛类纤毛虫的基本形态,但大核在细胞分裂过程中的行为显著不同于上述的情况,详细了解其核器演化的特征,无疑对深入认识纤毛虫细胞核     

人肝癌细胞移植瘤cDNA表达文库的构建及鉴定(简报)

0 引言 肝癌是一种发病隐蔽,病情恶化快的恶性肿瘤,严重危害人类的生命健康.全世界每年约有25万人死于肝癌,我国原发性肝癌发病率与死亡率均居世界首位,每年死亡人数达到10万人以上.     

1-轻基丙叉-1,1-二麟酸二钠的合成及表征(简报)

有机多元膦酸由于膦酸基团特殊的立体结构和性质,而具有极强的配位能力,在较宽的pH值范围能与多种金属离子形成稳定的配合物。它们在医药、农业、电镀、水处理、稀土分离、化学分析等领域得到广泛的研究和应用。其中,羟乙膦酸钠是一种最常用的骨钙调节药物,商品名为Didronel。在羟基膦酸盐中,其同系物1-羟基丙叉-1,1-二膦酸钠虽然在分子结构上只比羟乙膦酸钠增加了一个碳原子,但对     

大气氟化物向桑叶、蚕体迁移的定量研究(简报)

浙江省嘉善县大通乡是当地蚕茧重点生产区之一,该区域内同时也存在砖瓦厂、水泥厂等大气氟污染源,空气中的氟化物被吸附到桑叶表面后,能在叶内积累起来,已有研究表明,植物组织中的氟化物含量与空气中的氟化氢有关,大气氟化物能在桑叶体内累积,含氟桑叶被蚕食后,氟化物就会向蚕体迁移,本工作对大气氟化物向桑叶、蚕体的迁移进行了定量研究。     

非线性采样系统镇定问题的连续原型方法(简报)

0 引 言 基于近似离散模型上设计的采样控制器是否对原来连续受控系统有效的问题是近期研究的热点之一,文献[1~2]对镇定问题进行了研究,在采样周期充分小的情况下,给出了可实用渐近稳定的条件,但对实际控制系统而言,其执行机构的工作响应频率是有限制的,因此控制器的采样周期不可能任意小.而文献[3]在采样周期固定的条件下,考虑了指数稳定的特殊情况.文献[3]中提出了离散模型连续原型的概念,证明了在微分同胚条件下近似离散模型的连续原型的存在性,在连续的框架下,给出了基于近似离散模型上设计的指数稳定的采样控制器,能够以同样方式指数稳定原来连续受控系统的条件.在采样周期固定的条件下,本文在文献[3]连续原型方法的基础上,进一步讨论相应渐近稳定的情况,给出了基于近似离散模型上设计的渐近稳定的采样控制器能够镇定连续受控系统的条件.     

钛铝硅复合氧化物的合成及应用研究

无机以及有机排放污水对环境和生态平衡造成严重的影响。粉煤灰是热电厂排弃物,其主要组成为SiO_2·Al_2O_3,不仅对环境造成严重的污染,而且占用大量耕地;工业有机染料污水由于不易光催化分解、残留的时间长,不及时处理将会对地球表面水造成污染,因此,寻找科学、廉价的治理方法解决面临的实际问题就显得十分重要。前人通过粉煤灰与NaOH相互作用合成沸石类物质,用于交换金属阳离子、吸附和催化剂的载体;作者也曾用粉煤灰合成铝硅酸盐对阳离子染料脱色进行研究。本文利用的漂浮轻质粉煤灰,其主要组成为SiO_2·Al_2O_3,通过与NaOH锻烧、水解合成铝硅酸盐中间体,利用sol-gel方法与钛溶胶反应合成新型的钛铝硅氧化物纳米复合材料，其结构分别用IR（Infrared ray）、XRD（X-ray diffraction）和AFM（Atomic force microscope）进行表征说明复合物是均匀的纳米粒子，该材料对有机染料摸你污水西服实验表明在较短的时间内表现出显著的脱色效果。该新型材料的合成不仅有一定的理论研究价值，而且由从工业排放的污染废弃物开发新材料，达到了以污治污的目的和效果，有着潜在的应用和开发前景。     

上海单子叶植物新记录

本文报导上海单子叶植物14个种和变种(禾本科与莎草科),其中禾本科新记录属1个、新记录种2个,莎草科新记录种10个、变种1个和1个已发表的新种。     

Burgers方程的直接解法（简报）

寻求非线性偏微分方程的精确解一直是一个重要的研究课题.目前虽然已经提出了许多方法, 但依然还有很多工作要做. 作为一种有益的探索，文献［9］基于Hopf-Cole变换法和试探函数法的基本思想求得了一类非线性偏微分方程的精确解.文献［10］利用文献［9］中所引入的一个变换给出了Burgers方程的一种直接求解方法. 本文在文献［10］的基础上，继续求解该文中所导出的一个非线性常微分方程，进一步求出Burgers方程的许多精确解.     

奇摄动边值问题的解对给定数据导数的渐近分析

A.B.Vasil'eva等人在文献[1～2]中研究了如下的非线性Tikhonov系统的奇摄动边值问题 μdz/dt=f(z,y,t)dy/dt=g(z,y,t),(z,y,t)∈Dz×Dy×[0,1]; (1)