玉米自交系P9-10遗传转化体系的建立

在Ｎ６培养基中添加１０＾－４ｍｏｌ．Ｌ＾－１ＡｇＮＯ３可促进玉米Ｐ９－１０自交系幼胚诱导产生Ｉ型胚性愈伤组织,把这些胚性愈伤组织经高渗处理后作为受体,用基因枪转化含Ｂｔ基因的ｐＭＧ６质粒,通过选择压递增式筛选,得到了１４个抗性克隆。抗性克隆３种不同的培养基中共诱导出１０个胚状体,经分化得到１０个再生植株累ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证实有８个再生植株的基因组中整合有Ｂｔ基因。ＥＬＩＳＡ分析结果     

巨噬细胞集落刺激因子受体的配基结合区的分析

从人胎盘中提取总ＲＮＡ〈利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增巨巨噬细胞集落刺激因子受体（Ｍ－ＣＳＦＲ）胞外区的Ｄ１－３，Ｄ２－３和Ｄ３功能区，并在大肠杆菌中成功夺表达了各相应的重组蛋白，酶联免疫吸附分析（ＥＩＡ）证明重组Ｄ１－３结合Ｍ－牟能力是重组Ｄ２－３的３倍，前者的Ｋｄ为１１ｎｍｏｌ／Ｌ后者的为３９ｎｍｏｌ／Ｌ，而重组的Ｄ３则完全没有结合能力，这些数据提示Ｄ２－３是与其配基结合的主体位点，Ｄ１为其配基     

小鼠胸腺髓质CD4-CD8+单阳性细胞表型分析

对胸腺髓质型ＣＤ４＾－ＣＤ８＾＋细胞进行表型分析，发现这群经有型不均一、外周成熟的ＣＤ８＾＋Ｔ有型为ＴＣＲαβＣＤ３＾＋Ｑａ－２＾＋ＨＳＡ＾－３Ｇ１１＾－６Ｃ１０＾－，而胸腺髓质型ＣＤ４＾－ＣＤ８＾＋细胞Ｑａ－２＾＋细胞占２０％，ＨＳＡ＾＝者占３３％，３Ｇ１１＾－者占３０％，６Ｃ１０＾－者占７０％，这４种表面标志表达的不同提示髓质区ＣＤ８单阳性细胞仍需经历一个表型成熟的过程，根据这４种表面标志在细     

小麦黄花叶病毒72ku蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗血清制备

采用逆转录－ＰＣＲ方法，扩增获得小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）ＲＮＡ２上的７２ｋｕ蛋白基因，将其克隆到ｐＥＴ３０ａ（＋）上，构建了该基因的原核表达载体ｐＥＴＰ７２。ＳＤＳ－ＲＡＧＥ分析结果显示，经ＩＰＴＧ诱导，７２ｋｕ蛋白基因在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中得到高效表达。以含表达产物的凝胶作为抗原，免疫家兔，首次制备了小麦黄花叶病毒ＲＮＡ２７２ｋｕ蛋白特异性抗血清。     

玉米愈伤组织的遗传转化及抗除草剂植株再生

以玉米胚性愈伤组织为受体，采用基因枪轰击法将来自拟南芥菜（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）的突变抗除草剂基因ａｌｓ导入玉米愈伤组织细胞；转化后的细胞经除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎ筛选，产生了抗性愈伤组织并再生植株，经ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法鉴定，部分再生植株转入了ａｌｓ基因，喷施除草剂试验表明，转基因植株具有良好的抗除草剂特性．研究的目的是获得抗除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒ     

用脉冲辐解法研究藻胆蛋白与羟自由基反应动力学

用竞争反应动力学方法研究，３种藻胆蛋白对羟基自由基的清除作用，其中Ｃ－藻蓝蛋白（Ｃ－ＰＣ）和变藻蓝蛋白（ＡＰＣ）从螺旋藻（Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）中提取； Ｒ－藻红蛋白（Ｒ－ＰＥ）从多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａ ｕｒｃｅｏｌａｔａ）中提取；羟基自由基通过脉冲辐解水产生．实验结果表明， ３种藻胆蛋白对羟自由基有强的清除作用；测量得到清除反应速率常数在（２．８～５．６）×１０~９Ｌ·ｍｏｌ~（－１）·ｓ~（－１）之间。     

人神经元电压门控钙通道γ-3基因的克隆

将小鼠Ｃａｃｎｇ２基因的编码区与ＥＳＴ数据库进行同源性分析，得到一个与小鼠Ｃａｃｎｇ２基因在 ４３５ ｂｐ中有 ７５％同源的 ＥＳＴ（ＧｅｎＢａｎｋ： Ｗ２９０９５）．在该 ＥＳＴ中设计引物与 ｃＤＮＡ文库载体臂上引物行巢式 ＰＣＲ和 ＲＡＣＥ反应，在人脑前叶皮质 ｃＤＮＡ文库和人脑 Ｒｅａｄｙ ｃＤＮＡ中获得 ｃＤＮＡ序列 １５４５ ｂｐ，其中包含一个 ９４８ ｂｐ的可读框，编码 ３１５个氨基酸．该可读框经确证命名为 ＣＡＣＮＧ３．ＣＡＣＮＧ３基因与大规模测序中定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１的ＢＡＣ克隆ＡＣ００４１２５完全一致，从而将该基因定位于１６ｐ１２－ｐ１３．１，并由此获得它的基因组结构，编码区由４个外显子组成．经ＲＴ－ＰＣＲ分析，ＣＡＣＮＧ３在成人脑和胎脑有表达．运用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ在视网膜色素变性家系、视网膜色素变性伴耳聋和癫痫家系进行突变检测，未检测到突变．     

双价、三价种子特异性表达载体的构建及表达PHB合成相关基因的转基因油菜的获得

分离了种子特异性启动子和质体导肽序列，利用已经克隆的合成聚羟基丁酸酯的３个关键酶基因，分别构建了含有种子特异性启动子的嵌合ｐｈｂＣ（编码ＰＨＢ合酶）、ｐｈｂＢ（编码依赖ＮＡＤＰＨ的乙酰－ＣｏＡ还原酶）的二价及嵌合ＰｈｂＣ、ｐｈｂＡ（编码３－酮硫裂解酶）、ｐｈｂＢ的三价表达载体，并由导肽将基因表达产物定位于质体．经根瘤农杆菌介导获得转基因油菜，并进行了ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及ＲＴ－ＰＣＲ－ＤＮＡ杂交等分子检测．     

去甲肾上腺素对不同初始表达水平α1B-肾上腺素受体表达的调节

选用α１Ｂ-肾上腺素受体（α１Ｂ－ＡＲ）密度分别为（６３３６±９１３）和（７７３±１６４）ｆｍｏｌ·ｍｇ－１的两株克隆ＨＥＫ２９３细胞，分别用高表达和低表达α１Ｂ-ＡＲ表示，比较去甲肾上腺素（ＮＥ）持续作用下不同初始表达水平的α１Ｂ－ＡＲ发生密度改变的差别．结果显示： １０μｍｏｌ·Ｌ－１ＮＥ持续作用４８ｈ可使高表达以α１Ｂ－ＡＲ的密度发生下调，却可使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度发生上调．蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＲＯ－３１－８２２０或Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ　Ｃ可消除ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但对低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度上调无影响．ＰＫＣ激动剂ＰＭＡ不仅可模拟ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，而且使低表达α１Ｂ－ＡＲ的密度也发生下调．肌浆网／内质网钙泵抑制剂ＣＰＡ和内钙螯合剂ＢＡＰＴＡ－ＡＭ不影响ＮＥ对高表达α１Ｂ－ＡＲ的下调作用，但可部分抑制低表达α１Ｂ－ＡＲ的上调．以上结果提示，ＮＥ持续作用可对初始表达水平不同的α１Ｂ－ＡＲ密度产生不同方向的调节作用，作用机制亦不尽相同．     

金霉素链霉菌废菌丝体吸附金(Au~(3+))特性的表征

以金霉素发酵生产中的金霉素链霉菌废菌丝体为生物吸附剂，研究了该菌体吸附金离子的特性．结果表明，该菌体吸附金离子的最适ｐＨ值为３．５，其吸附作用是一种快速而非依赖温度的过程．在起始Ａｕ３＋浓度（１００ ｍｇ·Ｌ－１）与菌体浓度（２ｇ·Ｌ－１）之比为５０ｍｇ／ｇ，ｐＨ ３．５和 ３０℃条件下，吸附 ４５ｍｉｎ，菌体对Ａｕ３＋的吸附量为４５．６ ｍｇ·ｇ－１，吸附率达 ９１．２％．菌体所吸附的金可被解吸附．透射电子显微镜观察结果表明，该菌体能将Ａｕ３＋还原成金颗粒，并形成不同形状和大小的金晶体．Ｘ射线光电子能谱分析证明，Ａｕ３＋能被菌体还原成Ａｕ０．     

阴离子表面活性剂AES虫状胶束的形成

应用流变学方法和冷冻蚀刻透射电子显微镜技术，研究了阴离子表面活性剂十二烷基聚氧乙烯（３）硫酸钠（ＡＥ）在ＡｌＣｌ３溶液中胶束的生长和结构．通过对溶液的剪切黏度、剪切应力、复合黏度、动态模量等物理量的测量，应用 Ｃｏｘ－Ｍｅｒｚ规则和 Ｃｏｌｅ－Ｃｏｌｅ图，发现在 ＡＥＳ／ ＡｌＣｌ３体系中可以形成虫状胶束和网络结构，且体系是偏离Ｍａｘｗｅｌｌ模型的黏弹性流体．应用冷冻蚀刻透射电子显微镜技术，研究了０．０８ｍｏｌ·Ｌ－１ＡＥＳ／０．８ｍｏｌ·Ｌ－１ＡＬＣＬ３体系的结构，进一步证实了虫状胶束的存在．     

钠离子对 γ-Al2O3表面的修饰作用

用＾１Ｈ＾２３Ｎａ核磁共振双共振新技术研究了钠离子对γ－ＡＬ２Ｏ３载体表面羟基的修饰作用。＾１Ｈ＾２３Ｎａ交叉极化（ＣＰ）实验明确地区分出３种与表面羟基有相互作用的钠离子，而与表面羟基无相互作用的沉积盐－Ｎａ２ＣＯ３Ｒ信号则被完全抑制掉。＾１Ｈ〔＾２３Ｎａ〕自旋回波以共振实验明确地揭示了这种相互作用的细节，当Ｎａ＾＋负载量较低（５％，１０％）时，Ｎａ＾＋优先与γ－ＡＬ２Ｏ３表面上的酸性ＯＨ配位，随     

CD3ε胞浆区2个酪氨酸共同介导T淋巴细胞凋亡

ＣＤ３ε是Ｔ细胞抗原受体复合物（ＴＣＲ／ＣＤ３）的一个成员,在此复合物的组装和介导细胞激活信号的传递中起重要作用,其信号传递的功能与其胞内区称之为免疫受体酪氨酸依赖的激活基序（ＩＴＡＭ）有关,已有报道人ＣＤ８分子的膜外区－跨膜区的ＣＤ３ε分子的胞内区组成的融合分子（ＣＤ８－ε）能介导Ｔ淋巴细胞激活后凋亡,表明单独的ＣＤ３ ＩＴＡＭ可传递细胞凋亡信号。进一步以ＣＤ８－ε为模板和点突变ＰＣＲ技术制备了     

从固氮菌细胞中分离纯化聚羟基烷酸的新方法

用固氮菌Ｇ－３菌株进行发酵培养４２～４８ｈ，待菌体内含ＰＨＡ占细胞干重７５％以上时，将菌体细胞从发酵液中分离收集，进行低温冷冻处理，使菌体细胞崩裂，将ＰＨＡ颗粒从细胞中释放出来，用１０ｇ／Ｌ十二烷基磺酸钠（ＳＤＳ）处理１５ｍｉｎ，进行有效的降解细胞残留物中的脂类和蛋白质，再用３０％浓度的次氯酸钠（ＮａＣｌＯ）作用３ｍｉｎ，进一步降解细胞壁肽聚糖残片和非ＰＨＡ细胞释放物。最后经多次离心冼涤，可得到纯     

用PEG法向小麦原生质体导入外源基因获得转基因植株

目前用基因工程方法改良小麦是世界上普遍关注的课题,但其有效外源基因转化系统的建立却十分困难.Vasil 等曾用基因枪法转化小麦悬浮细胞获得转化的愈伤组织;最近他们又用相同的方法转化小麦胚性愈伤组织得到了抗除草剂的小麦转基因植株.我们在小麦原生质体再生植株获得成功的基础上,通过反复实验,用 PEG 处理法将外源基因导入小麦原生质体,通过培养和对转化细胞的筛选,获得了完整的转基因小麦再生植株.     

应用FLUPD-DD-PCR检测血清饥饿对胶质瘤细胞mRNA表达的影响

荧光通用引物差异显示ＰＣＲ（ＦＬＵＰＤ－ＤＤ－ＰＣＲ）是以荧光通用引物和相应１０碱基随机引物进行ＤＤ－ＰＣＲ扩增，在荧光自动测序仪上进行电泳。通过对电泳图谱的分析进行特异条带的确定，使准确度和自动化程度大大提高，尤其对于表达量上有差异的ｃＤＮＡ片段，这一方法比传统的ＤＤ－ＰＣＲ更为方便。     

蓝藻Anabaena sp.strainPCC7120中一种可诱导的CO2浓缩机制(CCM)

为了探讨蓝藻Ａｎａｂａｅｎａ ｓｐ．ｓｔｒａｉｎＰＣＣ７１２０在外源无机碳浓度变化时，其光合作用对ＣＯ２和ＨＣＯ３的利用特性，制备了高ＣＯ适应细胞，Ａｎａｂａｅｎａ ｓｐ．ｓｔｒａｉｎＰＣＣ７１２０ＨＣＧ细胞的生长速率高于ＬＣＧ细胞，即在空气中生长的细胞，当ＨＣＧ细胞从５％ＣＯ２转换到空气中时，其碳酸酐酶活性升高；它对外源无机碳的表观光合作用亲合力明显提高，说明它的ＣＣＭ活性被诱导，ＨＣＧ与ＬＣＧ     

胡萝卜lea基因cDNA片段的克隆及其表达特性分析

在ＭＳ培养基中加入高浓度的蔗糖，可使胡萝卜体细胞胚的发育静止于子叶胚阶段，而当蔗糖浓度恢复到正常水平时，静止的体细胞胚便转入胚后发育。采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法，从调控状态的胡萝卜体细胞胚中获得ｌｅａ基因Ｄｃ３家族一个新成员的ｃＤＮＡ片段。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，该基因在调控状态的胡萝卜体细胞胚中具有强表达活性；在解调控１２ｈ的胡萝卜体细胞胚中，表达活性明显降低；解调控２４ｈ之后，其表达活性则基     

衣藻叶绿体表达体系的建立

构建了甲型肝炎病毒ＶＰ３Ｐ１区和丙型肝炎病毒Ｃ区融合抗原基因的衣藻叶绿体转化载体ｐＡＣⅢ，并用基因枪法将其导入衣藻叶绿体内，转化子通过抗性培养和暗培养筛选，经ＰＣＲ，Ｓｏｕｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ，Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｗｅｓｔｅｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴定，证实融合抗原基因已整合于衣藻叶绿体基因组中的ｃｈｌＬ结构基因位置，并在衣藻叶绿体本身的双启动子５’ｃｈｌＬ－５‘ａｔｐＡ调控下，得     

CⅡTA反义RNA对HLAⅡ类分子表达的抑制作用

为研究ＭＨＣⅡ类基因转录活化因子对人类白细胞抗原Ⅱ类分子表达的影响，用ＲＴ－ＰＣＲ方法从Ｒａｊｉ细胞中克隆到ＣⅡＴＡ基因ｃＤＮＡ５’端片段，构建成ＣⅡＴＡ反义ＲＮＡ真核表达载体ｐｃＤＮＡ－Ⅱ，基因转移ＨＬＡⅡ类分子诱导型表达的ＨｅＬａ细胞，ＩＦＮ－γ诱导，发现稳定转染ｐｃＤＮＡ－Ⅱ的细胞中ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ和ＤＱ的表达均较转ｐｃＤＮＡ３空载体的细胞有显著下降，而ＨＬＡ Ｉ类分子的表达不受影响。实验