应用多重PCR法鉴定产志贺样毒素大肠杆菌毒力基因

目的：从各种来源的标本中快速鉴定STEC毒力基因，并了解其在菌株中的分布情况．方法：采用多重PCR的方法鉴定STEC的特征性毒力因子stx1，six2，eaeA和hlyA．结果：各种标本中鉴定出产志贺毒素的大肠杆菌共46株，38株(82．6％)携带stx1基因，30株(65．2％)具有six2基因，22株(47．8％)同时检测到2种基因．36株(78．3％)检测到hlyA基因，24株(52．2％)有eaeA基因．4种毒力基因即six1 stx2 eaeA hlyA的有19株(41．3％)，而且血清型均为O157．结论：产志贺样毒素大肠埃希菌毒力基因图谱是一个重要的分子流行病学标志，应用多重PCR可简便、快速、敏感、特异性地鉴定出STEC的特征性毒力基因，并依照毒力基因存在情况判定其致病性能．     

鸡源大肠杆菌分离鉴定与药敏试验

自成都市某养鸡场发生的疑似大肠杆菌病的病死鸡肝脏中无菌采取10份病料,分离鉴定出5株大肠杆菌,经O血清型鉴定,除一株未定型外,共鉴定出4株大肠杆菌的O血清型,分别是O37两株、O84和O100各一株．用18种抗菌药物进行药敏试验,分离菌株耐药性非常严重,以多重耐药为主,最少的耐药10种,最多的耐药17种,其中,对罗美沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氨苄西林、阿莫西林、氧氟沙星、恩诺沙星和复方新诺明100％耐药（5／5）：对甲氧苄啶、四环素和链霉素80％耐药（4／5）;对新霉素、庆大霉素、头孢氨苄、头孢拉定和头孢唑啉60％耐药（3／5）;对阿米卡星20％．耐药（1／5）．结果提示,同一鸡场的发病鸡群存在着多种血清型,耐药谱复杂,且没有一种抗生素对所分离的菌株全部敏感．     

大理地区志贺菌的血清型分布及耐药性分析

目的:了解大理地区志贺菌的血清型分布及对12种常用抗生素的耐药性。方法:通过分离培养和鉴定得到68株志贺菌,血清学鉴定其血清型,K-B法检测其对12种抗生素的敏感性。结果:血清学鉴定显示68株志贺菌中福氏志贺菌41株,宋内氏志贺菌25株,鲍氏志贺菌2株。志贺菌对萘啶酸耐药率最高,对复方磺胺甲噁唑和氨苄西林耐药率较高;对头孢曲松和头孢噻肟较敏感,对喹诺酮类显示出不同程度的耐药。结论:大理地区以福氏志贺菌感染为主。在志贺菌治疗中可首选头孢曲松和头孢噻肟。     

产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的耐药性监测

目的：探讨大理地区产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的耐药情况。方法：采用VITEK-32型全自动微生物鉴定仪将葡萄球菌属鉴定到种，头孢硝噻吩滤纸片法检测β-内酰胺酶，药物敏感试验采用K-B法。结果：61株金黄色葡萄球菌中产β-内酰胺酶13株，产酶率21．3％，产酶株对万古霉素最敏感，其次为左氧氟沙星，对其他抗生素的耐药率前四位分别是氨苄西林92．4％，青霉素G92-4％，红霉素84．7％，克林霉素69.3％。结论：金黄色葡萄球菌的β内酰胺酶检测应作为常规项目开展，产β-内酰胺酶的金黄色葡萄球菌对青霉素类，大环内酯类抗生素高度耐药，万古霉素无耐药菌株，为首选药物，应在药敏试验指导下合理选用抗生素。     

云南昆钢医院2013年三、四季度细菌耐药性监测分析

目的:分析云南昆钢医院2013年三、四季度的细菌耐药情况,为临床治疗提供可靠依据。方法:用VITET-2 Compact全自动微生物分析仪鉴定细菌,采用肉汤微量稀释法做体外药敏试验,依照美国临床实验室标准化协会2013年制定的判断药敏试验标准。结果:第三、四季度检验科收到标本3 920份,检出致病菌953株,阳性率24.3%。其中排在前5位的病原菌株种类分别是:大肠埃希氏菌263株、肺炎克雷伯112株、金黄色葡萄球菌56株、铜绿假单胞菌48株、鲍曼不动杆菌41株。药敏大肠埃希氏菌对复方新诺明、氨苄西林的耐药率分别为93.6%、100.0%,肺炎克雷伯菌对复方新诺明、哌拉西林耐药率分别为100.0%、96.4%,鲍曼不动杆菌对头孢唑林、复方新诺明耐药率均大于75.0%,金黄色葡萄球菌青霉素P的耐药率为90.3%,未发现万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松耐药率均为100.0%。结论:结合昆钢医院细菌耐药趋势参照抗生素目录及使用指南合理选用抗生素,减少或减缓耐药菌株的产生。     

致仔猪腹泻大肠杆菌的耐药性与质粒谱分析

对河北省不同地区发病猪场分离的已经过系统鉴定的12株猪源大肠杆菌,采用K-B纸片法进行了15种抗生素的耐药性检测,并提取质粒,对耐药谱和质粒谱型进行了比较分析。结果显示,分离菌株对氨苄西林的耐药率达到了100%,对阿莫西林的耐药率为91.7%,对四环素和复方新诺明的耐药率介于50%～70%。分离菌株存在多重耐药性,以耐4种、6种和7种药物为主,占总数的75%。对分离菌株耐药谱与质粒谱的分析表明,大肠杆菌的质粒携带与细菌的耐药性之间并没有明显的对应关系。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性分析

目的了解吉林市区肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分类及耐药情况,并对其分子流行病学特征进行分析.方法采用PCR扩增法检测118株肺炎克雷伯菌产CTX-M型ESBLs基因型情况,调查其阳性株对14种常见抗菌药物的耐药情况,对产CTX-M型肺炎克雷伯菌进行AP-PCR同源性分析,并绘制基因分析图谱.结果 118株肺炎克雷伯菌中共扩增出CTX-M型菌株25株,占21.19%;其中CTX-M-1组13株,占11.02%;CTX-M-9组16株,占13.56%;同时含CTX-M-1组和CTX-M-9组菌株4株,占3.39%;扩增未发现CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-25组阳性株.25株产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶均为多重耐药菌（耐3种以上抗菌药物）,对红霉素耐药率高达100%;其次耐药率依次为头孢噻肟92%,氨苄西林92%,四环素88%;对亚胺培南耐药率较低,对美罗培南均敏感.25株CTX-M型阳性菌株做随机扩增多态性分析,共发现13种RAPD.结论吉林市区产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株均为多重耐药,且对红霉素、头孢噻肟和氨苄西林类耐药率均很高.CTX-M酶在一定程度上存在克隆传播.     

肺炎克雷伯菌第1类整合子的鉴定和耐药性分析

目的 了解来源于不同临床标本的肺炎克雷伯菌的耐药性、携带第1类耐药整合子的特征及基因盒的种类.方法 使用常规方法分离肺炎克雷伯菌;运用法国梅里埃VITEK细菌分析系统进行鉴定;应用纸片扩散法对15种抗生素进行耐药性监测和分析;应用PCR法扩增第1类整合子;对PCR产物纯化、测序,并对结果进行分析.结果 来源于不同临床标本的64株肺炎克雷伯菌100%耐药,32株(50%)表现多重耐药,9株耐4种抗生素,耐药谱为氨苄西林-链霉素-复方新诺明-四环素;20株(31.2%)为第1类整合子阳性株,其中17株整合子大小为1.0 kb,2株为1.6 kb,1株含有1.0 kb和1.6 kb两个整合子;PCR产物测序显示1.0 kb整合子携带pse-1-aadA1基因盒,1.6 kb整合子插入了pse-1-aadA2,pse-1-aacA1基因盒,双重整合子株插入了pse-1-aadA1和pse-1-aacA1基因盒.结论 第1类整合子存在于各种临床标本分离的肺炎克雷伯菌中,且与多重耐药性相关,主要决定着对β内酰胺类和氨基糖苷类抗生素的耐药性.     

成都地区健康犬及其畜主鼻腔金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的分离及耐药性研究

为了解成都地区健康犬及其主人金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的携带率及耐药情况,对收集的鼻腔棉拭子样本308份(犬源和人源各154份)进行相关细菌分离、纯化及鉴定.对获得菌株进行药物敏感性和mec A基因检测.结果表明:犬源和人源金黄色葡萄球菌分离率分别为5.19%(8/154)和13.64%(21/154),犬源和人源中间型葡萄球菌分离率分别为9.74%(15/154)和2.60%(4/154);金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌中mec A检出率分别达20.71%和68.42%;29株金黄色葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶耐药最严重(耐药率R达93.10%),对青霉素G和复方新诺明耐药较严重(R分别为72.41%和58.62%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率范围6.90%~27.59%);19株中间型葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶、青霉素G耐药非常严重(R分别达100.00%和94.74%),对红霉素及复方新诺明耐药较严重(R分别为78.95%和73.68%),对其余药物呈不同水平耐药性(R范围5.26%~63.16%),26.32%中间型葡萄球菌对苯唑西林耐药.不同来源菌株表现出较严重多重耐药性,尤其是耐苯唑西林中间型葡萄球菌呈100.00%多重耐药性.以上结果说明,健康犬和人类鼻腔内可携带金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌,这些菌株已呈较严重耐药性,在这些菌株中mec A基因普遍存在,应加强对这两种细菌流行情况及其耐药性检测.     

从腹泻实验兔分离的一株大肠埃希菌的生物学特性研究

目的 研究从腹泻实验兔分离到的大肠埃希菌的生物学特性。方法 对一株从因腹泻而死亡的SPF级实验兔体内分离的致病性大肠埃希菌的遗传谱系、抗生素敏感性、消毒液敏感性以及细菌携带的耐药基因和毒力基因进行较为全面的研究。结果 该大肠埃希菌属于B1型遗传谱系，携带毒力基因eaeA,属于肠致病性大肠埃希菌。对常用的5种消毒液敏感，对于青霉素、氨苄西林、头孢氨苄、头孢拉定、四环素、多西环素、米诺霉素、红霉素、麦迪霉素、万古霉素、复方新诺明等11种抗生素耐药，携带aadA1,gyrA,sul1和tetA等4个抗生素耐药基因。结论 从因腹泻而死亡的SPF级实验兔体内分离的致病性大肠埃希菌为一株B1型遗传谱系的肠致病性大肠埃希菌，具有多重耐药性，对常用的消毒剂均敏感。     

我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查、耐药性及其肠毒素基因检测

调查了2011—2016年我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况,并对分离到的相关菌株进行了肠毒素基因的检测和耐药性分析。收集全国39个城市699份市售食用菌,利用定性和定量检测方法,检出金黄色葡萄球菌阳性样品33份,平均污染率4.72%,污染水平9.75MPN/g。24种抗生素的药敏结果显示,分离株耐药情况严重,对利奈唑胺、利福平敏感,对氨苄西林等22种抗生素都产生不同程度的耐药。7株分离株经表型和分子鉴定确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。运用聚合酶链式反应法对分离的39株金黄色葡萄球菌进行了18种肠毒素基因检测,约60%分离株携带4~6种肠毒素基因,携带率最高的肠毒素基因是sei,其次是sem、seg、seq、sec、seb、sen。本研究反映了我国市售食用菌金黄色葡萄球菌污染的潜在风险,相关分离株具毒性潜力,且耐药性严重,应引起重视。     

水貂源大肠杆菌对9种抗菌药物敏感性试验

为了解水貂源大肠杆菌对抗菌药物的敏感性,指导兽医临床有效防治大肠杆菌病.采集山东省某水貂养殖场水貂粪便;采用常规的分离、鉴定方法获得8株大肠杆菌菌株;采用K-B纸片扩散法检测菌株对9种抗菌药物的药物敏感性.结果表明,菌株对9种药物呈不同水平的耐药性(耐药率范围25.0~100.0%),对妥布霉素、阿米卡星100%耐药;对粘杆菌素、氟喹诺酮类呈较低耐药率;62.5%的菌株对所检测的8种药物耐药.以上结果说明了本次检测的水貂源大肠杆菌耐药性非常严重,临床上应根据药敏试验结果,合理和谨慎地使用抗菌药物以控制水貂大肠杆菌病.     

尘肺结核患者Mycobacterium tuberculosis耐药基因突变研究

研究尘肺结核患者结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)耐药基因突变与耐药性的关系。在97例尘肺结核患者痰中检出MTB菌株28株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因突变,并与采用常规药敏试验(AST)法检测的耐药结果进行对比分析。采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因,突变率分别为42.86%(12/28)、42.86%(12/28)和32.14%(9/28),采用AST法检测INH、RFP和SM,耐药率分别为64.23%(18/28)、60.71%(17/28)和53.57%(15/28),两者之间差异均无显著性(P>0.05)。其中多耐药株20例(71.43%),包括耐三种药物12例(42.86%),耐两种药8例(28.57%),单耐药株6例(21.43%),敏感株2例,耐药率92.86%。PCR-SSCP法检出3个基因联合突变8株,与AST法符合率为66.67%(8/12);2个基因突变5株,符合率为62.50%(5/8);单基因突变2株,符合率为33.33%(2/6)。结果表明:PCR-SSCP技术适用于MTB katG、rpoB和rpsL耐药基因突变的筛选,对指导尘肺结核患者临床用药上具有重要意义。     

养禽场周围水环境中磺胺类抗性菌、抗性基因分布

为进行养禽场周围水环境中磺胺类抗性菌、抗性基因分布的研究,从3家养禽场多个区域水环境中分离的56株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli),应用肉汤微量稀释法分析磺胺类药物敏感性,应用PCR方法检测磺胺类药物抗性基因。结果有18株(32.14%)磺胺类抗性菌,对利福平的耐受性最弱,对氯霉素的耐受能性最强;共检测到64个抗性基因,三个养禽场分别为:19(29.69%)、29(45.31%)、16(25.00%);分别为sul1 18(28.12%)、sul2 13(20.32%)、sul3 7(10.94%)、Int1 18(28.12%)、Int2 8(12.50%)。含一种抗性基因的菌株为1株、含2种抗性基因的菌株为1株、含三种抗性基因的菌株为6株、含四种抗性基因的菌株为5株、含五种抗性基因的菌株为4株,而1株无抗生素抗性的菌株检出抗性基因。结果表明在养禽场场内检测到抗性基因和抗性菌株数量较高、养禽场周围水环境中存在磺胺类抗性菌株,且具有多重抗性,可能对生态环境的产生一定的不良影响。     

衡阳地区绿脓假单胞菌临床分布特征及耐药性分析

目的了解衡阳地区绿脓假单胞菌的临床分布特征及耐药现状，为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法收集衡阳市南华大学附一医院临床分离的199株绿脓假单胞菌，采用K—B法检测药物敏感性。结果199株绿脓假单胞菌中，以痰液为主，占64．32％（128／199）；其次为伤口分泌物，占9．05％（18／199）。病区来源以ICU检出率最高，占14．07％（28／199）；其次为神经外科和呼吸内科，占9．05％（18／199）。在检测的19种药物中，耐药率超过50％的达13种（68．42％），耐药率最高为氨苄西林／舒巴坦（98．00％），其次为复方新诺明（95．00％）和替卡西林（79．00％），耐药率最低为多粘菌素E（8．00％）。结论临床分离绿脓假单胞菌多来源于呼吸道标本，且耐药现象十分严重。临床应加强对绿脓假单胞菌耐药性监测、合理选用抗菌药物。     

体外抗真菌药敏试验多量与微量稀释法对比研究

目的 对比研究酵母菌的体外抗真菌药敏试验多量与微量稀释法。方法 采用美国国家临床试验标准化委员会（NCCLS）推荐的药敏试验方案的多量稀释法和微量稀释法,分别测定45株念珠菌（包括来自国外AIDS患者的28株氟康唑耐药株,15株国内临床分离株和2株ATCC模式株）对氟康唑的最小抑菌浓度（MIC）值。结果 采用NCCLS推荐的多量稀释法与微量稀释法测定45株念珠菌对氟康唑的MIC值一致为91％。结论 体外抗真菌药敏试验的多量稀释法与微量稀释法有较好的一致性,微量稀释法可以做为一种较好的体外抗真菌药敏试验方法在临床实验室推广使用。     

重症监护病房的肠球菌种类及其耐药性分析

目的:了解我院重症监护病房肠球菌的种类及对其耐药情况进行分析.方法:用法国梅里埃公司生产的全自动细菌分析仪Vitek-32进行肠球菌鉴定和K-B法进行药敏试验.结果:113株肠球菌中以粪肠球菌和屎肠球菌为主,共94株占总数的83.18%,其中粪肠球菌63株占55.75%,屎肠球菌31株占27.43%.肠球菌对替考拉宁和万古霉素的耐药性最低,但屎肠球菌对12种抗菌药物的耐药性明显高于粪肠球菌.结论:临床对肠球菌的检测应达到种的水平,屎肠球菌对抗菌药物的耐药性较粪肠球菌为高,已经检测出对糖肽类抗生素万古霉素及替考拉宁耐药的肠球菌,值得重视.     

鸡大肠杆菌病的流行病学研究

对来源于河南省32个县市的93株鸡致病性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定、16种抗生素药物的耐药性试验和耐药性质粒的检测分析.结果表明:河南省鸡致病性大肠杆菌的血清型种类众多,以O78、O1、O2为优势血清型,分别占定型菌株的35.14%、18.92%、13.51%;耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,菌株耐药种类3~14种;质粒图谱复杂,可分为49种质粒图谱,质粒条带1~6条.