HRP标记β_2-微球蛋白单克隆抗体的研究

用辣根过氧化物酶(HRP)标记β2-微球蛋白单克隆抗体,以此作为ELISA实验的酶标二抗.用过碘酸钠将辣根过氧化物酶(HRP)的糖的部分轻微氧化为醛基,然后与抗体氨基进行反应,形成辣根过氧化酶(HRP)与抗体的结合物.将β2-微球蛋白与过氧化物酶的结合物进行纯化,得到较纯的酶结合物,以此作为ELISA的酶标二抗.     

苦瓜过氧化物酶的提取分离及性质测定

从苦瓜(Momordica charantia L.)中分离和纯化过氧化物酶(POD),分别测定其最适pH值、最适温度、热稳定性、底物浓度对酶活性的影响。结果表明:苦瓜过氧化物酶以邻苯二胺为底物时λmax=425nm,Km=4.6×10-3,Vmax=0.137unit/s,最适pH值为4.6,最适温度是50℃。在温度为50℃时过氧化物酶的酶活力最大,酶活性较高。在温度为60℃以上时过氧化物酶的失活率升高,在温度为70℃以上时过氧化物酶基本失活。抗坏血酸和半胱胺酸对过氧化物酶有明显的抑制作用,其失活率分别达到94%和92%;Al3 的抑制作用稍弱,过氧化物酶的失活率为69%;EDTA的抑制效果最不明显,过氧化物酶的失活率仅为13%。     

HRP标记的二抗检测heme结合蛋白造成假阳性问题的探讨

为了验证对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)作为二抗标记物在检测heme结合蛋白时产生假阳性问题的推测,以菠菜细胞色素b_6f复合体(Cyt b_6f)和铁氧还蛋白-NADP~+氧化还原酶(FNR)为检测对象(前者含有heme结合蛋白Cyt f,后者不含heme基团),采用菠菜FNR一抗、HRP和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)标记的二抗,设计对比实验。结果表明,在使用HRP标记的二抗体系中,Cyt f不经一抗和二抗孵育即可显色,这是明显的假阳性;而在ALP标记的二抗体系中,Cyt f条带不显色,只有FNR条带显色。在western blot实验中,如果被检测蛋白为heme结合蛋白或者混有少量heme结合蛋白,应避免采用HRP标记的二抗,建议使用ALP标记的二抗或者其他二抗产品;heme结合蛋白具有类似HRP的氧化还原酶活性,其本身可以和显色液反应,从而产生假阳性,干扰对实验结果的判断。     

猕猴桃蛋白酶在胍中“慢构象快活力变化”现象

比较了猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍中变性时的荧光变化与活力变化的关系。当胍浓度为0.1 mol/l时,酶的最大荧光发射波长λ_(max)不变,荧光强度上升。此时酶被激活,活力提高25％,激活速度比变性速度快5.0倍。胍浓度逐渐增大,酶λ_(max)略红移,4.0 mol/l时达336 nm。但荧光强度降低,酶表现为快相和慢相失活的二个一级反应,失活速度常数比变性速度常数快 1～3个数量级。Actinidin 的激活与失活现象显示这可能与活性部位相关的 Trp 微环境的构象变化有关。胍变性结果指出 Actinidin 构象变化速度小于活力变化速度,这代表酶变性反应时慢构象变化快活力变化的一种模式。     

二苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出了以二苯胺为底物的伏安酶联免疫分析新体系测定辣根过氧化物酶 (HRP)的方法 .通过线性扫描二阶导数极谱法测定 HRP催化 H2 O2 氧化二苯胺的产物 ,从而间接的测定 HRP的浓度 ,进而用于酶联免疫分析 .在 p H=8.5的 Britten-Robinson(BR)缓冲溶液中 ,二苯胺的氧化产物可以在 -0 .53V(vs.SCE)左右处产生一个灵敏的极谱还原峰 .在选定的最佳条件下 ,应用此峰测定 HRP的检测限可达 1 .0× 1 0 - 9g/m L,测定 HRP的线性范围是 4 .0× 1 0 - 9～ 2 .0× 1 0 - 7g/m L.另外 ,还推导了酶催化反应和电极还原反应方程式     

四种电化学底物伏安酶联免疫分析法检测烟草花叶病毒

分别以对苯二胺，间氨基酚，邻联茴香胺和硫酸对氨基N，N－二乙基苯胺为辣根过氧化物酶（HRP）的电化学底物，这四种物质在HRP的催化下能够被H2O2氧化生成具有电化学活性的酶催化反应产物，可以用线性扫描二阶导数极谱法进行检测。将该法与抗原直接包被间接法（DAC－ELISA）相结合，应用于烟草花叶病毒（TMV）的检测，取得了较好的结果。     

辣根过氧化物酶标记单克隆抗体的初步研究

采用经改良的过碘酸盐氧化法,以国产辣根过氧化物酶(HRP)标记经纯化的三种抗bFSH和抗bLH的单克隆抗体,所获得的酶—抗体结合物的效价用ELISA法测定为10~(-3)—8×10~(-5),文中讨论了标记高效价酶—抗体结合物的若干事项。     

胰酶水解干酪素的动力学行为

研究了胰酶水解干酪素制备蛋白胨过程中胰酶在不同温度下的失活行为,以及底物浓度对反应速率和平衡的影响,ｐＨ对反应浓度和平衡的影响。胰酶在４０℃下４ｈ基本不丧失水解大分子的活力;在５０℃,ｍｉｎ、５５℃,１００ｍｉｎ、６０℃,９０ｍｉｎ完全丧失对大分子的水解活性。胰酶短时间在高温下丧失的活性,当其返回到４０℃时可部分恢复。底物和产物对反应有抑制作用。底物初始浓度高,最终平衡转化率低。当ｐＨ８时的反应速     

锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在甲醛溶液中的失活动力学研究

研究甲醛对锯缘青蟹N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（NAGase EC 3．2．1．52）活力的影响．结果表明：随着甲醛浓度的增大．酶活力呈指数下降．导致酶活力下降50％的甲醛浓度（失活半衰期，IC50）为0．60mol／L。酶在低浓度甲醛溶液中的失活过程显示为可逆失活．用底物反应动力学方法考察酶在甲醛溶液中的失活动力学．测定游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）在甲醛溶液中失活的微观速度常数。并比较游离酶（E）和酶-底物络合物（ES）的正向反应的微观失活速度常数k＋0〉k’＋0．表明底物对酶被甲醛的失活作用有一定的保护作用．正向的失活速度常数k＋0和k’＋0随着甲醛浓度的增大而增大．而逆向的速度常数k-0随着甲醛浓度的增大而减小．表明随着甲醛浓度的增大。酶变性越来越快。而活力恢复越来越难．     

伏安酶联免疫分析中一类新的HRP底物体系的初步研究

提出了以酚红、1,2,5,8－四羟基蒽醌、1,8－二羟基蒽醌三种染料类物质作为电化学酶免疫分析中辣根过氧化物酶（FRP）催化氧化反应的底物,这三种具有电化学活性物质,在HRP的催化作用下,被H2O2氧化生成非电活性的产物,导致测定的电流下降,其减少程度和HRP的浓度有一定的关系,从而建立了三种底物测定HRP的新体系,比较了它们测定HRP的灵敏度,对酶催化反应机理进行了初步的探讨。     

早熟,高配,抗逆玉米自交系“自改—1”的选育

“自改—1”玉米自交系是由“330×oh43HtHt—早”组合中经多代选株自交而成。“自改—1”自交系既保持了“330”自交系主要优良性状,又克服了“330”的缺点,并提高了抗病能力、缩短了生育期。是一个自身产量高、配合力好、早熟、抗病、抗倒、抗旱性强、农艺性状优良的理想自交系。“自改—1”玉米自交系具有较高的配合力。“自改—1×黄早四”杂交种(原名廊玉2号),已被河北省农作物品种审定委员会审定,定名为“冀单15号”。“8112×自改—1”、“1984×自改—1”参加了省区域试验。“自改—1×掖107"、“自改—1×23”等组合在多点试验评比中表现突出。这些组合在生产上具有较高的利用价值。     

岗南,黄壁庄水库降水效应的分析

修建水库后水域面积的扩大必然会引起一些气候要素的变化。本文根据岗南、黄壁庄水库地区建库前后多年的降水量统计资料,采用回归分析法和综合系数法,比较科学地分析了大型水库水体对其周围地区降水量的影响效应。结果表明,建库使得该地区降水量的时空分布发生了变化。     

生态位及其在城市发展研究中的应用

本文阐述了生态位的涵义及其在研究城市发展中的重要意义。结合我省情况,探讨了生态位的结构及其变量集。并运用生态位原理对我省九个省辖市的生态位进行剖析,揭示出人口激增,水资源短缺和环境污染是城市发展的制约因素。据此,以系统整体功能优化为目标,遵循高效、和谐的原则调控生态位,以缩小区域生态势。     

采光屋面设计中一些问题和解决方法

本文提出了目前在采光屋面设计中存在的一些问题和相应的解决方法。     

小儿脑电图的描记方法与注意事项

本文针对小儿脑电图描记比较困难,提出了描记方法和注意事项。     

利多卡因治疗眩晕26例疗效观察

本文对利用利多卡因治疗２６例眩晕进行了疗效观察。     

嫩江县基本建设工程抗震设防现状与对策

本文介绍了嫩江县近几年来基本建设工程抗震设防的现状,分析了存在的问题,提出了几点建议。     

二元液体混合物粘度的研究

设计了测定液体混合物粘度的实验装置,用纯水对实验装置进行检验,其偏差与文献值相比小于5％。使用该装置对六种二元液体混合物的粘度,即丙酮和水,丙酮和甲醇、甲醇和三氯乙烯、甲醇和苯、四氯乙烯和苯、甲醇和四氯乙烯,从常温到高温加压测定。测定的六种液体混合物的粘度大体上随温度成反比例变化。     

绞股蓝对提高小鼠机体运动能力研究

实验选用昆明纯系小白鼠,应用随机分组法分组。灌喂混合型绞股蓝口服液(简称1号液)、混合型人参口服液(简称2号液)、混合型口服液(简称3号液)和生理盐水CK。测验提高小鼠机体运动能力,并进行成组t检验计算,其结果为1号口服液作用≥2号口服液>3号口服液>CK。     

传染病婴幼儿的心理护理

本文主要观察２００例急性传染病婴幼儿,提出了运用心理活动规律进行护理的措施和方法。