人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因

以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑叶育相近,SDS-PAGE蛋白质电泳在家蚕幼虫、蛹血淋巴中均检测到1条与目的蛋白理论分子量(63 kD)相符的特异性蛋白条带,初步认为是重组病毒Bm-BacPAK6-E2的融合表达产物.     

松墨天牛原肌球蛋白基因的克隆和表达检测

利用先前构建的cDNA文库和RACE方法,克隆了松墨天牛原肌球蛋白基因的cDNA全长,该序列长1 203 bp,命名为MaTm(GenBank登录号:KM099072),其中开放阅读框长852 bp,编码283个氨基酸.MaTm的氨基酸序列与赤拟谷盗 (Tribolium castaneum)相似性最高,为97%,与家蚕相似性 (Bombyx mori)为94%.松墨天牛与赤拟谷盗处在系统发育树的同一个分支上.用 RT-qPCR 分析了MaTm的相对表达量,结果显示:蛹和幼虫的表达量低于成虫;成虫足和头的表达量高于对照;在幼虫各组织中均有表达,且差异显著(p0.05),其中在体壁的表达量最高.     

CREB在家蚕中枢神经系统中的免疫组织化学定位

用免疫组织化学的方法,研究了CREB蛋白在家蚕中枢神经系统中的分布.结果表明,家蚕CREB蛋白在5龄幼虫期和蛹期的中枢神经系统中均有表达,主要分布在脑和神经节的胞体密集区.从5龄幼虫期到蛹期,随着发育的进行,CREB阳性细胞数逐渐减少.比较二化性品种的滞育系与非滞育系,CREB蛋白在5龄幼虫脑中的表达分布存在明显的差异,滞育系的阳性反应细胞比非滞育系多.这些结果暗示,CREB蛋白可能参与家蚕生长发育、变态的调控以及环境条件调控家蚕滞育的过程.     

小黑瓢虫过冷却点和结冰点的测定

测定了小黑瓢虫Delphastus catalinae( Horn)各个虫态的过冷却点和结冰点.结果表明,雌雄成虫之间过冷却点差异不大,分别为-12.41和- 12.27℃;幼虫和蛹按过冷却点值由高到低依次为3龄幼虫、2龄幼 虫、4龄幼虫、1龄幼虫、蛹,分别为- 9.78、- 9.80、-9.88、- 9.97、- 10.31℃.小黑瓢虫雌雄成虫之间结冰点差异不大,分别为- 8.55和- 8.08℃;幼虫和蛹按结冰点由高到低依次为蛹、4龄幼虫、3龄幼虫、2龄幼虫、1龄幼虫,分别为-3.13、- 5.48、-5.69、- 6.10、- 6.99℃.     

白蛾黑基啮小蜂寄主接受行为的研究

白蛾黑基啮小蜂(Tetrastichus nigricoxae Yang)在徐州地区主要寄生杨小舟蛾(Micromelalopha troglodyta)蛹。在小环境中,它搜寻寄主蛹平均耗时(93.12±66.53)s。搜寻到寄主后,多数小蜂从寄主蛹腹部爬上蛹体并产卵,只有少数小蜂在蛹的头部和胸部爬上寄主蛹并产卵。1~3 d龄小蜂寄生能力无差异,其寄生率均为100%,4 d龄小蜂寄生能力开始显著下降,5 d龄的寄生率已降至20%。白蛾黑基啮小蜂能寄生杨小舟蛾老熟幼虫、预蛹、1~5 d龄蛹,不能寄生6 d龄蛹。1 d龄杨小舟蛾蛹被寄生率最高,达(92.59±12.83)%,随着蛹龄的增长,小蜂对寄主蛹的寄生能力逐渐下降。在增加寄主蛹密度的情况下,小蜂的寄生能力并不能显著提高。随着雌蜂密度的增加,寄主蛹的被寄生率和每头寄主子代出蜂量也相应提高,当蛹蜂比为1∶5时开始出现过寄生现象,并随着雌蜂数量的增加,过寄生现象呈上升趋势。速冻蛹(蛹动)对白蛾黑基啮小蜂接受寄主的影响不大。     

粘虫(Mythimna separata)变态期间环核苷酸和蜕皮激素的动态及灭幼脲的影响

本文用放射免疫法研究了粘虫(Mythim(?) (?) parata(walker))末龄幼虫和蛹初期的脑和前胸腺cAMP含量及血淋巴20-羟基蜕皮酮滴度的动态变化,进而研究了灭幼脲对这两种物质的影响.结果表明:(1)粘虫末龄幼虫仅具一个血淋巴20-羟基蜕皮酮的释放高峰,化蛹后则以更快的增长速度提高滴度,至蛹3日龄仍无衰减之势;(2)末龄幼虫前胸腺cAMP高峰出现后12小时,血淋巴中出现20-羟基酮释放峰位.而蛹1日龄出现前胸腺cAMP高峰后的较长时间内仍有血淋巴20-羟基蜕皮酮的持续增加;(3)末龄幼虫脑cAMP峰较前胸腺的峰位提早24小时发生,1日龄蛹前胸腺发生cAMP高峰前,脑的cAMP量也维持在较高水平;(4)1日龄末龄幼虫经灭幼脲处理后,脑和前胸腺的cAMP峰值以及血淋巴20-羟基蜕皮酮峰值分别降低约47％(P<0.001),25％(P<0.025)和75％(P<0.001),峰值期以外的cAMP量和激素滴度均无显著影响.     

家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化

对 1～ 5龄的家蚕幼虫血淋巴取样 ,通过十二烷基硫酸钠 -聚丙酰胺凝胶电泳(SDS -PAGE)观察并分析家蚕幼虫血淋巴主要蛋白的发育变化 ,对其中的一种主要蛋白即家蚕幼虫血清蛋白 ,通过硫酸铵沉淀、阳离子交换柱层析、凝胶过滤纯化至均一     

家蚕非编码RNA Bm-152功能初探

Bm-152是前期研究中发现的一个在家蚕丝腺中高表达的非编码RNA.采用实时荧光定量PCR技术对Bm-152在家蚕5龄到预蛹期不同发育天数丝腺中的表达谱进行检测.同时,在个体中过表达Bm-152,检测Bm-152可能参与的信号通路.结果显示,Bm-152在家蚕5龄幼虫丝腺发育过程中无明显的变化规律,但在吐丝第1天表达量较高,随后表达量又下降.通过在血淋巴中注射2μg piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-152]过表达载体,48h后发现Bm-152在丝腺组织中无明显过表达,但在非丝腺组织中可实现明显过表达,且表达量上调1.66倍;蜕皮激素信号通路基因Usp在非丝腺组织中上调1.95倍,E75A在非丝腺组织中上调2.26倍,保幼激素信号通路基因Met在非丝腺组织中上调1.79倍.表明非编码RNA Bm-152可能通过蜕皮激素和保幼激素信号通路参与家蚕发育,该结果为进一步探索Bm-152的功能提供了方向.     

家蚕新的非编码RNA功能初探

构建了家蚕50～500 nt非编码RNA的cDNA文库,发现了189个新的ncRNA,其中一个小RNA-Bm-86在家蚕幼虫和蛹中的表达量显著高于卵和成虫.利用生物信息学软件对该ncRNA的特性及其与上下游基因的关系进行了深入分析,并利用Northern杂交和半定量RT-PCR技术对该ncRNA与其宿主基因在家蚕不同组织的表达情况进行了研究.结果发现,该ncRNA属于H/ACA box snoRNA家族,是由家蚕eIF5A基因的第二个内含子转录产生的,且在家蚕中没有明显的靶标位点.分析其上下游基因结构发现,在其上游263 bp处存在着一个可能的启动子位点,表明其有独立转录的倾向.进一步分析Bm-86与其宿主基因eIF5A在家蚕不同组织部位的表达情况发现,二者在表达上存在着负相关的关系,且该现象在丝腺中尤其明显.推测Bm-86可能通过影响eIF5A基因的表达参与到家蚕丝腺发育调控过程中.     

野桑蚕serpin2基因的克隆及转录表达分析

以野桑蚕Bombyx mandarina 5龄第3天幼虫为实验材料,利用RT-PCR技术,克隆了野桑蚕Bombyx mandarina serpin2cDNA,并对其转录表达模式进行了分析.结果表明:野桑蚕Bombyx mandarina serpin2基因的完整开放阅读框长1 125bp,有7个内含子,8个外显子,编码374个氨基酸,蛋白质的分子质量为41 760,pI为4.87.氨基酸序列具有与其他昆虫serpin2的共有特征.该基因的mRNA在表皮和马氏管中的表达水平较低,而在脂肪体中的表达水平最高.     

Synthesis dynamic and developmental profile of prothoracicotropic hormone between diapause-and nondiapause-destined individuals in Helicoverpa armigera

Biosynthesis and secretion of prothoracicotropic hormone (PTTH) of diapause-and nondiapause-destined individuals in Helicoverpa armigera were studied using whole-mount immunocytochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The immunocytochemistry revealed that PTTH is expressed in two pairs of lateral neurosecretory cells of the brain. The presence of immunoreactivity has not significant difference between the brains of the diapause-and nondiapause-destined 6th instar larvae. However,the obvious differences of expressional pattern from day 4 pupae were observed be-tween the two types. PTTH titers in hemolymph from the 6th instar larvae to pharate adults were measured by the ELISA. Although there were similar titer changes between the two types of individuals at the larval stage,a significant difference from developmental expression was detected at the pupal stage,suggesting that the expression and secretion of PTTH does play a crucial role in regulation of pupal diapause of H. armigera.     

Synthesis dynamic and developmental profile of prothoracicotropic hormone between diapause- and nondiapause-destined individuals in Helicoverpa arrnigera

Biosynthesis and secretion of prothoracicotropic hormone （PTTH） of diapause- and nondiapausedestined individuals in Helicoverpa armigera were studied using whole-mount immunocytochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The immunocytochemistry revealed that PTTH is expressed in two pairs of lateral neurosecretory cells of the brain. The presence of immunoreactivity has not significant difference between the brains of the diapause- and nondiapause-destined 6th instar larvae. However, the obvious differences of expressional pattern from day 4 pupae were observed between the two types. PTTH titers in hemolymph from the 6th instar larvae to pharate adults were measured by the ELISA. Although there were similar titer changes between the two types of individuals at the larval stage, a significant difference from developmental expression was detected at the pupal stage, suggesting that the expression and secretion of PTTH does play a crucial role in regulation of pupal diapause of H. armigera.     

家蚕BmMet2基因的组织定位与激素诱导表达分析

Met作为保幼激素(JH)的受体, 能编码bHLH-PAS结构域结合DNA并调控下游基因的表达。为了探究BmMet2是否作为JH的受体参与调控家蚕的生长发育,以家蚕为材料,用生物信息学方法分析了BmMet2蛋白结构,利用实时定量PCR检测其在翅原基不同时期和激素诱导下的表达情况;原核表达了BmMet2中能与DNA结合的蛋白区域BmMet2DBD,并制备了抗体;利用蛋白质印迹法(Western blotting)和免疫组化检测了BmMet2在家蚕多个时期和各组织中的定位表达情况。结果显示:在翅原基中,BmMet2在5龄第3天和5龄第6天有较高水平的表达,蛹期的表达量较低,这与家蚕体内JH的滴度一致;BmMet2在5龄第6天、吐丝期和预蛹期的胸节表皮、脂肪体及翅原基等组织中都有较高的表达;JH和20E均对BmMet2有不同程度的诱导,说明其可能同时参与了JH和20E的调控, 进而参与调控家蚕变态发育过程。     

咪唑类化合物对天蚕幼虫生长发育的影响

本文报告了咪唑类化合物——金鹿三眠素对天蚕幼虫生长发育的影响。三龄0～48小时喂饲浸渍过500～2000ppm三眠素溶液的白栎鲜叶后,三眠蚕诱导率最高可达94.56％;诱导所得三眠蚕三、四龄历期明显延长,四龄起蚕体重和四龄末丝腺鲜重重于正常四眠蚕(对照),而三龄至结茧的总历期和熟蚕体重、丝腺鲜重则反之;仍为四眠蚕的三、五龄历期和三龄至结茧的总历期多长于对照、四龄起蚕和熟蚕体重大多重于对照。四龄0～48小时喂饲浸渍过500～2000ppm三眠素溶液白栎鲜叶后,极大多数仍为四眠蚕,三眠蚕诱导率最高仅为9.88％;其中四眠蚕四、五龄历期和四龄至结茧的总历期大多长于对照;诱导所得三眠蚕的四龄历期明显长于对照,但总历期反之。三眠蚕四龄期丝腺鲜重增长明显快于正常四眠蚕,但最终鲜重不及正常四眠蚕。     

保幼激素和蜕皮激素对家蚕翅原基生长分化的影响

翅原基（Wing disc）是昆虫幼虫体内成虫原基的一种,经生长分化后最终形成成虫翅。翅原基是研究昆虫变态发育过程的一个理想系统。为探究发育过程中翅原基的生长变化,本文以家蚕翅原基为材料,通过离体和石蜡切片的方法观察了翅原基从5龄第3天至蛹期0天的形态变化,并通过注射外源蜕皮激素活性物质20E和保幼激素类似物Methoprene探究了昆虫激素对家蚕翅原基生长分化的影响。结果显示,翅原基在幼虫阶段发育缓慢,从5龄第6天起生长分化逐渐加快,且翅原基的形态发生了显著变化,原本附着于翅原基腔口处且呈团状的造血器官逐渐分散至消失,而由气管组成的翅脉逐渐形成。外源激素处理的结果显示,2μg剂量的20E可促进翅原基的生长分化,而2μg 的Methoprene抑制了翅原基的生长分化。上述结果暗示了,蜕皮激素和保幼激素共同调控了翅原基的生长分化,并最终实现了翅原基的变态发育。     

宽带细腹食蚜蝇Sphaerophoria macrogaster生物学特性的初步研究

本文研究了宽带细腹食蚜蝇Sphaerophoria macrogaster(Thompson)的生物学特性,发现该食蚜蝇在福州一年发生7代,各代的历期分别为46.3天、30.9天、66.7天、23.1天、26.1天、37.1天与131.2天。主要以蛹在土壤中越冬和越夏,所以第7代与第3代的历期都很长,蛹期也比其他各代长,分别为100天与45天。每雌的平均产卵量为20.8粒。幼虫期的总捕蚜量为286.7头,其中2、3龄幼虫的捕蚜量占幼虫期总捕蚜量的98.2％。     

Ecdysteroids in the larvae of Opogona sacchari （Bojer）, a invasive alien pest

In order to understand the composition and quantitative variation of ecdysteriods in the larvae of Opogona sacchari (Bojer), a invasive alien pest, we analyzed the larval ecdysteroid composition and titers in this pest. The main component of ecdysteriods in the larvae of O. sacchari is 20-hydroxyecdysone, and also there is a little 26-hydroxyecdysone. The titer of ecdysteriods in the larvae from the 1st instar to the 7th instar was gotten higher gradually compared on ng ecdyster-oid/larva, but no regularity could be found about the titer if compared on ng ecdysteroid/g avoirdupois. There was only one peak of ecdysteroids (0.5475 ng/larva) showed at day 2 during the developmental time of the 6th instar larvae. However, there were two peaks appearing during the developmental time of the 7th instar larvae , one peak (0.29415 ng/larva) at day 3, another (0.214 ng/larva) at day 5.     

斜纹夜蛾前胸腺的生长发育研究

 通过解剖观察4龄至蛹期斜纹夜蛾前胸腺,对其形态特点和生长发育规律进行了研究,主要结果如下：发现斜纹夜蛾前胸腺由53个左右的圆形或椭圆型细胞成串组成,Y型,成对,外围包裹一层透明鞘膜,位于胸部第一气门的气管丛内;在斜纹夜蛾4龄到蛹期的发育过程中,前胸腺不发生有丝分裂,细胞数量基本恒定;前胸腺细胞直径在幼虫发育期间不断增大,斜纹夜蛾幼虫在4龄第1天的前胸腺直径为(28.80±0.47) μm,而到了6龄末期,则增加到(92.22±2.43) μm;幼虫期的斜纹夜蛾前胸腺细胞直径和虫体体质量呈显著相关,r=0.826,P=0.000,拟合曲线方程为Y=82.1X ^0.263;此外,幼虫期的斜纹夜蛾前胸腺细胞直径和虫体体长也呈现出显著相关,r=0.886,P=0.000,拟合曲线方程： Y=e^{(4.781-1.863/Z)}。     

Ecdysteroids in the pupae of Opogona sacchari （Bojer）, a new invasive alien pest

The banana moth Opogona sacchari (Bojer) of the family Hieroxestidae is a new invasive alien pest in China that originated from the moist tropical and sub- tropical areas of Africa[1]. So far, the pest has dispersed to many areas around the world includin…     

马尾松毛虫幼虫生殖系统的形态学初报

<正> 马尾松毛虫(Dendrolimns punctatus Walker)属鳞翅目、枯叶蛾科(Lepidoptera Lasiocam-pidae),它繁殖力强,迁移扩散快,经常猖獗成灾,是我国危害森林的最严重的历史性大害虫。为了防治马尾松毛虫,必须建立准确、可靠、方便的预测预报方法,掌握其种群数量动态;而昆虫的性比则是种群结构的重要特征,它对种群的数量动态有重要影响。故研究马尾松毛虫雌雄区分问题对建立上述预测、预报方法具有重要实践意义。目前尚未见到关于马尾松毛虫幼虫生殖系统的研究报道。 自1982年起,我们开始对马尾松毛虫的生殖系统进行研究。本文报道此项研究的部分结果。