家蚕血淋巴蛋白的发育变化的BmLSP的纯化

对1－5龄的家蚕幼虫血淋巴取样,通过十二烷基硫酸钠－聚丙酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）观察并分析蚕幼虫血淋巴主要蛋白的发育变化,对其中的一种主要蛋白即家蚕幼虫血清蛋白,通过流酸铵沉淀,阳离子交换柱层析,凝胶过滤纯化至均一。     

家蚕抗菌蛋白Cecropin D和Lysozyme的分离纯化及性质鉴定

经大肠杆菌E．coli K12D31诱导后的家蚕幼虫，其免疫血淋巴经CM-Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析及HPLC分离后，得到2种抗菌蛋白，经液相色谱-电喷雾质谱（ESI-MS）分析鉴定，纯化的2种抗菌蛋白分别是家蚕抗菌肽eeeropin D和溶菌酶lysozyme酸性电泳（A-PAGE）测活免疫血淋巴得到抗菌蛋白活性谱：cecropin D在8h无显著表达，12h有较强抗菌活性，30h达到最高，以后逐渐降低；lysozyme在8h后检测到表达，12h到达高峰，之后逐渐下降，48h的血淋巴中未检测到明显的表达．研究认为抗菌蛋白lysozyme和cecropin D是家蚕幼虫感染细菌8h后大量表达的抗菌蛋白，主要参与细菌感染12～30h的血淋巴对细菌的清除，是参与家蚕幼虫抗菌免疫的重要蛋白．     

CREB在家蚕中枢神经系统中的免疫组织化学定位

用免疫组织化学的方法,研究了CREB蛋白在家蚕中枢神经系统中的分布.结果表明,家蚕CREB蛋白在5龄幼虫期和蛹期的中枢神经系统中均有表达,主要分布在脑和神经节的胞体密集区.从5龄幼虫期到蛹期,随着发育的进行,CREB阳性细胞数逐渐减少.比较二化性品种的滞育系与非滞育系,CREB蛋白在5龄幼虫脑中的表达分布存在明显的差异,滞育系的阳性反应细胞比非滞育系多.这些结果暗示,CREB蛋白可能参与家蚕生长发育、变态的调控以及环境条件调控家蚕滞育的过程.     

人工饲料育家蚕/杆状病毒表达猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2基因

以重组病毒Bm-BacPAK6-E2接种全龄人工饲料育及5龄桑叶育家蚕皓月×菁松幼虫、蛹,观察重组病毒的感染发病情况,调查病蚕、蛹的采血量并进行SDS-PAGE分析.结果表明,全龄人工饲料育家蚕接种重组病毒的成功率、采血量等指标均与5龄桑叶育相近,SDS-PAGE蛋白质电泳在家蚕幼虫、蛹血淋巴中均检测到1条与目的蛋白理论分子量(63 kD)相符的特异性蛋白条带,初步认为是重组病毒Bm-BacPAK6-E2的融合表达产物.     

大头金蝇幼虫、蛹免疫系统对大肠杆菌诱导的应答

体内注入活体大肠杆菌后,诱导大头金蝇幼虫和蛹产生抗菌物质。检测到的抗菌物质包括抗菌肽和凝集素,分别于注射后48小时和36小时达到高峰。诱导后幼虫血淋巴稀释100倍,对金黄色葡萄球菌致死率仍达20％。聚丙烯酰胺电泳显示诱导后的幼虫和蛹血淋巴均比对照增加了4条染色带,另有2条染色带染色明显加深。     

昆虫血淋巴蛋白质的淀粉胶电泳

淀粉胶电泳用于蛋白质成分的分析,分辨力十分高.自1955年Smithies用来分析人血清蛋白成分以来,对于各种动物血液及其他组织液蛋白成分的分析,包括个体种属间的差异,正常、病理下的比较,发育变异时的变化等诸方面,应用已十分广泛.从1956年开始,陆续有人报导淀粉胶电泳应用于昆虫血淋巴的研究结果.Chen发现果蝇(Drosophila)幼虫血淋巴含有7种蛋白质成分,库蚊(Culex)为4种.Barlow报导了落叶松锯蜂(Pristiphora erichsoni Htg)的预蛹为4种蛋白质成分,家蝇(Musca demosica L.)幼虫为     

舍蝇（Musca domestica vicina）幼虫分泌物及血淋巴活性研究

首次报告舍蝇幼虫分泌物具有抗根结线虫（Meloigyne sp.)活性,同时未经外源诱导的舍蝇幼虫,其分泌物和血淋巴提取液也有抗菌活性。IEF－PAGE电泳分析表明,幼虫分泌物和血淋巴提取液呈微酸性至弱碱性,前者电泳带为6条,后者7条,两者的第二和第五电泳带在同等的位置上。     

粘虫(Mythimna separata)变态期间环核苷酸和蜕皮激素的动态及灭幼脲的影响

本文用放射免疫法研究了粘虫(Mythim(?) (?) parata(walker))末龄幼虫和蛹初期的脑和前胸腺cAMP含量及血淋巴20-羟基蜕皮酮滴度的动态变化,进而研究了灭幼脲对这两种物质的影响.结果表明:(1)粘虫末龄幼虫仅具一个血淋巴20-羟基蜕皮酮的释放高峰,化蛹后则以更快的增长速度提高滴度,至蛹3日龄仍无衰减之势;(2)末龄幼虫前胸腺cAMP高峰出现后12小时,血淋巴中出现20-羟基酮释放峰位.而蛹1日龄出现前胸腺cAMP高峰后的较长时间内仍有血淋巴20-羟基蜕皮酮的持续增加;(3)末龄幼虫脑cAMP峰较前胸腺的峰位提早24小时发生,1日龄蛹前胸腺发生cAMP高峰前,脑的cAMP量也维持在较高水平;(4)1日龄末龄幼虫经灭幼脲处理后,脑和前胸腺的cAMP峰值以及血淋巴20-羟基蜕皮酮峰值分别降低约47％(P<0.001),25％(P<0.025)和75％(P<0.001),峰值期以外的cAMP量和激素滴度均无显著影响.     

抗性棉铃虫神经细胞的离体培养和超微结构分析

对棉铃虫幼虫神经细胞进行了离体培养,并建立了其体外培养的实用方法。神经细胞在增补棉铃虫幼虫血淋巴的TC-100培养基中可贴壁生长,存活5-7d,培养基中不加血淋巴,而增补谷氨酰胺时,细胞也可贴壁生长,但接种24h后出现老化现象,增补适量葡萄糖,细胞可存活22-28d。细胞存活的最适pH值为6。4.90%的细胞具多条突起,与在体内生长有明显区别。棉铃虫抗性种群、对照种群、同种群不同龄期幼虫以及同一个体胸、腹神经节的神经细胞体外培养时形态无明显差异,但抗生品系幼虫运动神经元内线粒体明显增多,且神经围鞘与神经世膜厚度之比明显增加。     

家蚕生物反应器与家蚕实验动物化饲育技术

以家蚕为生物反应器 (重组家蚕核型多角体病毒表达系统 )生产基因工程产品 ,具有成本低、安全、产品产量与活性高的优点。随着近年生命科学和生物技术的迅猛发展 ,需要发展新的实验动物品种、特别是利用低等动物代替哺乳动物 ,大力开发动物资源型功能 ,造福人类。本文报道我所利用家蚕表达外源基因与家蚕实验动物化饲育技术方面一些研究成果。由家蚕细胞、转移载体、修饰的BmNPV、家蚕幼虫或蛹组成家蚕表达系统。获得了含有日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因的重组病毒 (rsj14NPV)和含有日本血吸虫 2 8KDGST基因的重组病毒 (rsj2 8NPV)。r…     

金耳水溶性多糖的部分化学性质及抑瘤试验

金耳子实体经热水抽提，反复经Ｓｅｖａｇ法脱蛋白，获得金耳多糖，Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ分级分离呈现双峰（Ａ和Ｂ）。其峰Ａ的相对分子质量介于１０＾５￣１０＾６之间。峰Ａ组分经醋酸纤维薄膜电泳鉴定，呈现单一谱带，为一纯多糖。利用硅胶Ｇ薄板层析技术，确定峰Ａ组分主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖组成。利用人肺腺癌裸小鼠模型ＬＡＸ－８３对金耳多糖全组分进行抑瘤试验，结果表明有明显抑瘤疗效。     

基于OFFGEL预分离二维液质联用技术在大鼠海马膜蛋白中的应用

以大鼠海马膜组分为研究对象,以等电聚焦OFFGEL为研究手段,结合反相液相色谱质谱联用技术,考察对酶切肽段的分离富集性能,同时结合DAVID分析工具对分离富集得到的酸性蛋白质进行的GO分析.结果表明,海马膜组分的酶切肽段经过OFFGEL分离后,得到24个不同馏分,每个馏分经过纳流液相色谱-质谱检测,发现有77% 的肽段专属于一个馏分,在酸性范围内的肽段等电点偏差较小,可以达到良好的聚焦效果;酸性蛋白的GO分析结果显示,质膜和物质的跨膜运输所占比例最大.OFFGEL作为一种预分离手段,可以应用于生物样品的大规模蛋白鉴定,在进一步蛋白质层面的生物功能研究中表现出良好的应用前景.     

蟋蟀雄性生殖系统的结构和精子发生

研究了蟋蟀雄性生殖系统的结构和精子发生的动态过程 .成熟的雄性生殖系统主要由一对精巢 ,一对输精管 ,一对附腺 ,一对储精囊和一根射精管组成 .精巢乳白色由许多精巢管盘曲组成 ,精巢管包括原精区、生长区、成熟区和变形区四个区域 .其主要特点是处于不同发育时期的精母细胞呈放射状密集排列在圆球形的育精囊中 .精子发生的动态是 :一龄期 ,精巢小管仅具一些精原细胞 ;二～三龄期 ,精原细胞不断通过有丝分裂增殖 ;四龄期 ,初级精母细胞形成 ,并由减数分裂形成次级精母细胞 ;五龄期 ,精细胞大量形成 ,并变形成为精子 .其主要特点是成虫期的精巢管中存在所有各期生殖细胞 ,当下端的精子成熟时 ,上端部分的精母细胞再发育形成精子 ,表明从五龄开始蟋蟀便能连续不断地产生精子     

人血清中真核复制起始区DNA（Ors12DNA）结合蛋白的鉴定和纯化

利用含有真核细胞复制起始区（ＯｒｉｇｉｎｏｆＤＮＡＲｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）的Ｏｒｓ１２ＤＮＡ作为探针，检测了人血清中与Ｏｒｓ１２ＤＮＡ特异结合的蛋白质。凝胶电泳迁移率改变实验表明人血清中存在特异Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白。实验还对影响Ｏｒｓ１２ＤＮＡ与蛋白质最适宜结合的各种因素进行了研究。苯酚处理反应体系及限制性内切酶的酶切位点保护实验都证实了Ｏｒｓ１２ＤＮＡ－蛋白质复合物的存在。利用硫酸铵盐析及ＤＮＡ亲和层析，对血清中的Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白进行了部分纯化，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，Ｏｒｓ１２ＤＮＡ结合蛋白为一组非均一的蛋白质，亚基分子量分别为６４ｋＤ、４４ｋＤ和２４ｋＤ。     

纹皮蝇Hypodermin B基因在大肠杆菌中的表达

从纹皮蝇Ⅰ期幼虫中提取总RNA,RT-PCR扩增纹皮蝇Hypodermin B(HB)基因.将扩增基因进行克隆测序,构建原核表达载体pET30-HB,转化大肠杆菌BL21(DE3).用IPTG诱导表达后,得到表达量达全菌蛋白30%以上的特异性蛋白.SDS-PAGE分析表明表达产物主要以包涵体形式存在.Western blotting检测结果表明,获得的重组蛋白为重组Hypodermin B,具有较好的反应原性.     

马尾松毛虫感染绿僵菌后体壁组织和血淋巴的病理生化分析

利用聚内烯酰胺凝胶电泳技术，分析金龟子绿僵菌感染马尾松毛虫3～4龄幼虫在3天、4天、6天后，体壁组织中蛋白质和过氧化物酶及血淋巴中过氧化物酶的变化情况。结果表明，金龟子绿僵菌对马尾松毛虫体壁组织蛋白质代谢产生很大影响，过氧化物酶活性有减弱趋势。     

聚苯乙烯为致孔剂的分子印迹膜对溶菌酶吸附性能的研究

探索聚苯乙烯微球的添加对于分子印迹膜对溶菌酶(Lysozyme, Lyz)吸附性能的影响.以溶菌酶为模板分子,丙烯酰胺、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为功能单体、聚苯乙烯(Polystyrene,PS)微球为致孔剂,制备聚苯乙烯为致孔剂的分子印迹聚合物膜(PS-MIP).PS-MIP的吸附平衡时间为30 min,短于未添加聚苯乙烯微球的分子印迹聚合物膜(MIP);PS-MIP与MIP对于Lyz的吸附能力均明显好于聚苯乙烯为致孔剂的非分子印迹聚合物膜(PS-NIP)与未添加聚苯乙烯微球的非分子印迹聚合物膜(NIP);PS-MIP对Lyz的选择性要好于MIP,而卵清蛋白和牛血清白蛋白在PS-MIP和MIP上的荧光信号没有差别.实验结果表明,在分子印迹膜聚合过程中添加聚苯乙烯微球,有利于缩短吸附时间,增大溶菌酶的吸附量并提升选择性.     

Inhibitory Kinetics of p-Substituted Benzaldehydes on Polyphenol Oxidase from the Fifth Instar of Pieris Rapae L.

Polyphenol oxidase (PPO) is the enzyme responsible for enzymatic browning during the growth of insects. It is also involved in defense reactions and is related with immunities in insects. PPO, a metalloenzyme oxidase, catalyzes the oxidation of ο-diphenol to ο-quinone. The present paper de- scribes the effects of benzaldehyde and its p-substituted derivatives on the activity of PPO from the fifth instar of Pieris rapae L. PPO from the fifth instar of Pieris rapae L. was purified using ammonium sulfate fractionation and chromatography on Sephadex G-100. The enzyme kinetics was characterized using L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) as substrate. The results show that benzaldehyde, p- hydroxybenzaldehyde, p-chlorobenzaldehyde, and p-cyanobenzaldehyde can inhibit the PPO activity for the oxidation of L-DOPA. The inhibitor concentration leading to 50% activity lost, IC50, was esti- mated to be 5.90, 5.62, 2.83, and 2.91 mmol/L for the four tested inhibitors, respectively. Kinetic analy- ses show that the inhibitory effects of these compounds are reversible. Benzaldehyde, p- hydroxybenzaldehyde, and p-chlorobenzaldehyde are noncompetitive inhibitors while p-cyano- benzaldehyde is a mixed-type inhibitor. The inhibition constants were determined for all four inhibitors. p-chlorobenzaldehyde and p-cyanobenzaldehyde were more potent inhibitors than the other com- pounds. These results provide a basis for developing PPO inhibition-based pesticides.     

家蚕促咽侧体素受体基因克隆及发育表达

文章克隆得到家蚕(Bombyx mori)神经肽促咽侧体素受体基因(Allatotropin receptor,BommoATR),开放阅读框全长为1 254 bp,编码416个氨基酸.Bommo-ATR氨基酸序列的二级结构预测为7次穿膜蛋白,符合GPCR家族成员的典型特征.实时荧光定量PCR结果表明,家蚕脑-咽下神经节复合体中的ATR mRNA在5龄幼虫期表达量最高,其次为蛹后期,蛹前期和成虫阶段表达量最低.其中5龄幼虫第2天表达量最高,1～5 d持续维持较高的表达水平,这可能与保幼激素的合成有关.     

苏云金杆菌与灭幼脲混剂对美国白蛾幼虫 围食膜的破坏研究

为明确苏云金杆菌(Bt)与灭幼脲混剂对美国白蛾幼虫的毒杀效果,笔者对美国白蛾4龄幼虫围食膜被破坏的状况进行了研究。经超薄切片透射电镜观察发现,美国白蛾4龄幼虫围食膜表面平整光滑,有较明显的多层结构。经Bt+灭幼脲混剂对美国白蛾4龄幼虫处理120 h后, 围食膜上出现较多的白色和黑色斑点状孔洞,并扩大为斑块状孔洞,形成了薄而易脆、易断或溃烂、无弹性的围食膜碎片,并致围食膜被破坏和幼虫死亡。试验证明,Bt+灭幼脲混剂对白蛾4龄幼虫围食膜的破坏最快,Bt和灭幼脲单剂次之。同时,经Bt+灭幼脲混剂及其单剂对美国白蛾4龄幼虫的林间LT₅₀、LT₁₀₀值和飞防毒杀速率测定发现,Bt+灭幼脲混剂对美国白蛾幼虫的致死率均高于其单剂,毒杀速率快于单剂。因此,Bt+灭幼脲混剂处理可较快地破坏白蛾4龄幼虫围食膜,其毒杀速率明显提高。