两种海洋饵料藻的超低温保存

用两步冷冻法对牟氏角刺和新月菱形藻进行了超低温保存，研究了影响存活率的内外因素，结果表明，对这两种 分别选用１０％和１５％ＤＭＳＯ抗冻保护剂，预冻至－４０℃并保持３０ｍｉｎ后投入液氮，样品化冻后分别在室温及０℃要用较慢的稀速率去除ＤＭＳＯ时可获得较高的存活率。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

二甲亚砜(DMSO)对桃树叶肉细胞抗冻性的影响

在冷冻条件下，利用７２３０分光光度计、显微摄影及ＩＥＦ－ＰＡＧＥ等方法测定不同浓度的ＤＭＳＯ对桃树叶肉细胞的抗冻作用。发现（１）材料冷冻后再加入ＤＭＳＯ对细胞的抗冻作用不明显；（２）先用ＤＭＳＯ处理后对细胞有明显的抗冻作用，其中ＶＤＭＳＯ∶ＶＨ２Ｏ＝２∶３及ＶＤＭＳＯ∶ＶＨ２Ｏ＝１∶１的配比对桃树叶肉细胞有较好的效果。     

柱层析法纯化且人肿瘤坏死因子α及其抑瘤作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达，发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铵沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５，ＤＥＡＥ－５２纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮｆ－ａ比活性为２×１０＾７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％，经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５     

光棘豆（Oxytropis leptophylla DC）愈伤组织超低温冰冻保存技术的研究

光棘豆（ＯｘｙｔｒｏｐｉｓｌｅｐｔｏｐｈｙｌｌａＤＣ）愈伤组织超低温冰冻保存研究结果表明：适宜的保护剂是必要的，本试验所用复合保护剂中以１０％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）＋０．５ｍｏｌ蔗糖效果最佳；两步冰冻法（即以０．５℃／ｍｉｎ的速度由０℃降至－４０℃，停留２ｈ，再投入液氮）能获得较高的存活率；自来水流水冲洗是较好的解冻方法；回温后不洗涤，通过更换培养基逐步稀释保护剂对恢复再生长有利；各环节均采用最佳处理方法，可使冰冻回温后再培养的愈伤组织存活率高达９５％以上；再培养分化出的植株形态及生长状态正常．     

两种海洋饵料硅藻的超低温保存

用两步冷冻法对牟氏角剌藻和新月菱形藻进行了超低温保存,研究了影响存活率的内外因素．结果表明,对这两种藻分别选用１０％ 和１５％ ＤＭＳＯ为抗冻保护剂,预冻至－ ４０℃并保持３０ ｍ ｉｎ 后投入液氮,样品化冻后分别在室温及０℃采用较慢的稀释速率去除ＤＭＳＯ时可获得较高的存活率．此外,处于静止期或经过低温驯化的藻细胞也表现出较大的抗冻性．通过优化内外条件,两种藻的存活率分别达到９１．５％ 和６３．１％ ．     

ORL1受体在SK-N-SH细胞中的功能性表达及其跨膜信号传导

一种新型的阿片受体ＯＲＬ１（ｏｐｉｏｉｄ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｌｉｋｅ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ）及最近发现的ＯＲＬ１的内源性激动剂（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ）在痛觉的调制机制中扮演着某种重要角色．通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术在人的神经母细胞ＳＫ－Ｎ－ＳＨ中检测到ＯＲＬ１受体ｍＲＮＡ的天然高量表达；ｃＡＭＰ放射免疫测定技术发现，在经ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ处理的ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞中，由环甘酸环化酶激活剂（Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）引起的细胞内ｃＡＭＰ水平的升高受到抑制，其ＩＣ５０为６０±１５ｎｍｏｌ／Ｌ，最大抑制率为７０％．同时，用ｄｅｌｔａ阿片受体ＤＯＲ激动剂（ＤＰＤＰＥ）、Ｍｕ阿片受体ＭＯＲ激动剂（ＤＡＧＯ）分别处理ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞，也产生了不同程度的抑制，但抑制率均不如ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ．发现阿片受体的广谱拮抗剂（ｎａｌｏｘｏｎｅ），可使ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ及ＤＰＤＰＥ的抑制作用反转；用ＤＯＲ的特异性拮抗剂（ｎａｌｔｒｉｎｄｏｌｅ）只能使ＤＰＤＰＥ的抑制反转，而不能影响ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ的抑制作用．用５μｍｏｌ／Ｌ的ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ对ＳＫ－Ｎ－ＳＨ细胞进行２０ｍｉｎ（３７℃）的预处理，可引起细胞对ｎｏｃｉｃｅｐｔｉ     

非极性表面活性剂对小鼠早期胚胎冷冻保护作用的初步研究

许多研究者报道了某些非极性表面活性剂在防止蛋白质低温冷冻变性方面有着明显的效果．本研究就某些非极性表面活性剂对胚胎的防冻作用作了初步探索．方法是分别将不同浓度的两种表面活性剂Ｐｏｌｙｓｔｅｎ２０（Ｐ２０）和ＳＹ－ｇｌｙｓｔｅｒＭＬ－７５０（ＭＬ７５０）添加于改进的磷酸缓冲液（ＰＢ１）和本研究采用的防冻液（ＦＳ：ＰＢ１＋３ｍｏｌ乙烯二醇＋０．２５ｍｏｌ乳糖）中，处理小鼠早期胚２０ｍｉｎ后培养并观察对胚胎发育的影响，以确定它们对胚胎的临界安全浓度（ＣＳＣ）．在ＰＢ１中，两种表面活性剂的ＣＳＣ值均为０．５％，而在ＦＳ中，则为０．０５％．然后将两种表面活性剂Ｐ２０和ＭＬ７５０分别以０．０５％和０．０３％两种浓度添加于ＦＳ中，以ＦＳ作为对照组．在室温下平衡处理小鼠桑椹胚和早期囊胚５ｍｉｎ后连同防冻液一起装入塑料冷冻细管中．在液氮蒸气（－１７０℃）中预冷冻１ｍｉｎ后即投入液氮内保存．在３８℃水浴中快速解冻并去除防冻剂后在Ｗｈｉｔｔｅｎ培养液中培养２４ｈ．分别观察和统计冷冻－解冻胚的形态正常率和发育率．结果表明：处理组与对照组在冷冻－解冻胚形态正常率方面无显著差异（Ｐ＞０．０５），而添加０．０３％Ｐ＿２Ｏ或ＭＬ７５０的两     

hSOD基因导入细胞抗超氧阴离子毒性的研究

研究了已获得稳定表达的ｈＳＯＤ基因导入细胞（ＣＭＶ－ＳＯＤ细胞）对百草枯（ｐａｒａｑｕａｔ）和黄嘌呤（Ｘ）／黄嘌呤氧化酶（ＸＯ）产生的超氧阴离子造成的细胞毒性的抵抗作用。结果表明：在百草枯和过氧化氢酶共存时,ＣＭＶ－ＳＯＤ细胞的存活率明显高于父本细胞,同时父本细胞过氧化脂质的产生数值显著高于ＣＭＶ－ＳＯＤ细胞;经过Ｘ／ＸＯ处理,ＣＭＶ－ＳＯＤ细胞的存活率为５３％,而父本细胞的存活率仅为４０％,同时     

柱层析法纯化重组人肿瘤坏死因子α及其抑癌作用

半合成人肿瘤坏死因子ＴＮＦ－α在大肠杆菌中高表达．发酵后收集菌体经超声破碎，然后在１２０００ｒ／ｍｉｎ４℃离心１０ｍｉｎ，上清经６０℃热处理３０ｍｉｎ，离心上清用６０％饱和度的硫酸铰沉淀，再依次经过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—２５、ＤＥＡＥ—５２纤维素和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—７５柱层析，得到的纯化ｒｈＴＮＦ—α比活性为２×１０７ｕ／ｍｇ，回收率为２４％．经过ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳和ＨＰＬＣ鉴定，纯度达９５％左右，分子量为１７×１０３．ｒｈＴＮ—α对热稳定性试验表明，—２０℃下贮存一年或者０℃下贮存一个月，ｒｈＴＮＦ—α活性仍保留５０％．人胃癌和肝癌细胞株的体外抑瘤试验和接种小鼠的活体抑瘤试验表明，本实验取得的ｒｈＴＮＦ—α具有明显的抑瘤生长作用．     

细胞及玻璃化冷冻保护剂显微实验研究

利用低温冷冻显微实验平台,测定了DMSO和甘油两种保护剂的凝固点和玻璃化条件.采用4种不同的冷冻方案对SD大鼠的成骨细胞进行了低温冷冻保存研究.实验结果表明冷冻保护剂的凝固点温度随保护剂浓度和降温速率变化而变化,玻璃化的产生需要很高的保护剂浓度或很快的降温速率.保护剂的性能、冷冻和解冻程序及冻存时间是影响冷冻细胞比活的关键因素.所得结论对研究不同的细胞系、不同尺度组织的最佳低温冷冻保存方案具有指导意义.     

昆明小鼠未成熟卵母细胞OPS和SSV冷冻保存的比较

目的寻找昆明小鼠卵母细胞冷冻保存效率的新途径。方法选用5~6周龄雌性昆明小鼠的未成熟卵母细胞,在不同前处理液(10%EG或10%EG+10%DMSO)中平衡5 min,然后在冷冻液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30 s后进行OPS(Open pulled straw)法和SSV(Solid-surface vitrification)法玻璃化冷冻保存。结果小鼠未成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中,用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为84.4%,成熟率低于16.7%;而在SSV法冷冻保存中,用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为86.0%,成熟率为46.5%。OPS法和SSV法冷冻小鼠未成熟卵母细胞形态正常率为91.6%和91.4%,与对照组间差异较显著(P>0.01);成熟率为42.9%和59.1%,与对照组差异极显著(P<0.01)。结论多种抗冻保护剂组合使用效果好于单种抗冻保护剂;EDFS冷冻液冷冻保存效果好于EFS,尤其是EDFS30;OPS法可以有效地冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞,且新型玻璃化冷冻法SSV法冷冻保存效果优于OPS法。     

嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂的正交法优化

以甘油、海藻糖、蔗糖和二甲亚砜为考察因素,采用正交实验方法,对嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂的优化配比进行研究.直接分析、因素指标分析和方差分析结果表明：在由甘油、海藻糖、蔗糖、二甲亚砜4种保护剂组成的混合保护剂中,对冷冻存活率影响由大至小的顺序为：甘油,海藻糖,蔗糖,二甲亚砜.最佳保护剂组合为100g/L甘油＋100g/L海藻糖＋180 g/L蔗糖＋50 g/L二甲亚砜,该组合能使冷冻存活率达到89%.     

温暖化加剧青藏高原高寒草甸土非生长季冻融循环

在2013年10月至次年4月,首次利用微根管直接观测和土壤温度间接观测相结合的方法,研究增温对青藏高原高寒草甸土壤冻融循环过程的影响。结果显示:1)全年增温和冬季增温均显著增加非生长季5,10,20 cm的土壤温度,而且冬季增温处理下的5~20 cm土壤非生长季月平均温度比全年增温处理下的高0.01~0.18oC;2)全年增温和冬季增温显著降低了完全冻结期和冬春解冻期的冻土层厚度,而对秋冬始冻期的冻土层厚度没有影响;3)全年增温和冬季增温显著减少了完全冻结期的持续天数和增加冬春解冻期的持续天数,而对秋冬始冻期的持续天数没有影响;4)冬季增温比全年增温对冻土层厚度和冻融循环持续天数的影响更加显著。研究表明,在青藏高原高寒草甸气候温暖化的趋势下,非生长季土壤冻融交替天数的增加,可能会进一步对高寒地区的地下碳氮循环产生重要的影响。     

超声-液氮冻融处理对灵芝孢子粉多糖提取的影响

利用苯酚-硫酸法对超声波-液氮冻融处理的灵芝孢子粉多糖含量进行了测试,结果表明采用液氮进行淬冷破壁具有效果好,操作简便等特点;增加冻结-解冻循环次数在一定程度上能提高多糖含量,循环次数以4次左右为宜;将超声波处理法和液氮处理法很好地结合起来,其内容物释放更高,效果更佳,此方法更具实用价值.     

Cryogenic Thermophysical Studies for Clinical Medicine

1　Introduction of Cell Injury DuringFreezing and ThawingAs biological cells and tissues contain much water,they can be analyzed as aqueous systems.Twosub- processes occur during freezing:heat transferand mass transfer.Heat is removed to thesurroundings s…     

耦合效应下联络通道解冻规律研究

结合上海长江隧道一号联络通道工程,在温度应力耦合控制方程的基础上,分别考虑自然解冻和人工强制解冻条件下对流散热、混凝土初衬、二衬水化热等影响因素,分析了土体内部温度场、冻土厚度的发展变化以及由于冻土的解冻产生的融沉效应.通过分析发现自然解冻条件下经过大约44 d冻土完全融化,衬砌混凝土的水化热对冻土的解冻影响较大;不考虑混凝土水化热的作用,至50 d冻土仅能解冻23%;由于冻土的融沉效应,联络通道区域整体沉降,通道中心竖向位移为-2 cm;采用强制解冻冻土解冻较快,仅需4.3d就可完全解冻,与冻结过程相反,双排管之间最先解冻,然后是内侧冻土,最后是外侧冻土.     

超声辅助冷冻对湿面筋蛋白中可冻结水含量及冰晶粒度分布的影响

超声辅助食品冷冻过程是一种新的技术。本文通过对湿面筋蛋白中可冻结水含量及冰晶粒度分布的检测,研究超声辅助食品冷冻过程中冰结晶的热力学机制。用差示扫描量热仪测定了不同冷冻环境下湿面筋蛋白中可冻结水的含量,结果可见：超声辅助冷冻和液氮浸渍冷冻的湿面筋蛋白中可冻结水的含量比传统冷冻过程的高。用扫描电镜间接观察和分析了冷冻的湿面筋蛋白中冰晶的形状和粒度分布,表明适当的功率超声能加速湿面筋蛋白的冷冻过程;超声辅助和液氮浸渍冷冻的湿面筋蛋白中冰晶细小且分布均匀,可减少冷冻时对面筋蛋白网络结构的破坏。显示超声辅助冷冻是改善冷冻食品品质的实用技术。     

水泥改良土融沉对地层位移场影响的数值分析

【目的】分析水泥改良土融沉对地层位移场的影响规律,为水泥土改良冻结法应用于城市地下工程提供理论基础。【方法】以南京地铁10号线盾构出洞水平冻结加固工程为研究对象,采用三维数值模拟方法对水泥改良土融沉引起的地层位移进行了分析,采用单因素分析法,分析了融沉系数、覆土厚度、冻土壁尺寸对融沉位移场的影响规律。【结果】冻结区土体未经水泥土改良时,地表最大融沉量为12.811 cm; 水泥掺入比为12%时,地表最大融沉量为1.521 cm,表明水泥的掺入可明显减小冻土融沉。【结论】水泥土融沉时,土层越深,融沉位移越大,融沉范围越小; 地表融沉位移呈盆状沉降面,最大沉降位于出洞口处,随融沉系数增加,地表最大融沉量逐渐增大,但地层沉降分布规律不变; 覆土厚度越大,地表融沉量越小; 冻土壁尺寸增加时,地表位移发展速度变缓,地表沉降时间延长,最终融沉量增大。     

人毛乳头细胞的冻存

寻找一种不影响人毛乳头细胞生物活性的冻存方法，采用标本沉降式液氮冻存方法，冻存新分离的人毛乳头；在冻存1月、3月和6月时解冻复苏，接种培养，观察毛乳头的贴壁率和细胞生长情况，复苏冻存了1月、3月和6月的毛乳头，培养2天时毛乳头贴壁率为90％－95％左右，与新分离的毛乳头贴壁率相近；瓶内细胞融合时间也基本相同，为15天。液氮冻存人毛乳头不会影响其细胞生物活性，值得推广。